Практическое занятие № 2 (4-6)

ПМ.01. «Проведение общеклинических лабораторных исследований»

МДК 01.01. «Теория и практика лабораторных общеклинических исследований»

группа дата

Тема занятия:

• 2.1. Качественное определение белка в моче.

• 2.2. Количественное определение белка в моче с 3% сульфосалициловой кислотой и с пирогаллоловым красным.

• 2.3. Определение глюкозы в моче.

Время: 270 мин. Вид занятия: практическое занятие.

Внимательно прочтите ниже изложенную информацию.

К химическим исследованиям, входящим в общий анализ мочи, относят качественное и количественное определение белка и глюкозы. Другие химические исследования (определение кетоновых тел, билирубина и желчных пигментов) выполняются по специальному требованию врача.

Белок в моче.

За сутки у взрослого человека через почечные клубочки фильтруется до 150— 200 мг белка, у детей до 135 мг. Прохождение белка через почечный фильтр зависит от количества белка в плазме, от состояния базальной мембраны, от формы и размера белковой молекулы. Наблюдается неравномерность выделения белка с мочой в течение суток. Днем белка может быть значительно больше, чем ночью. В норме в конечную мочу попадает незначительное количество белка, которое не выявляется обычными методами. Принято считать, что в моче здорового человека белка не содержится. Появление белка в моче называется протеинурией, которая является основным синдромом почечной патологии.

Протеинурии

/

___________________________________________________________________________________________________

/ /

РЕНАЛЬНЫЕ ВНЕРЕНАЛЬНЫЕ

__________________/_____________ _________ /______________

/ / ПРЕРЕНАЛЬНЫЕ ПОСРЕНАЛЬНЫЕ

ОРГАНИЧЕСКИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ

_________ /_________

/ /

КЛУБОЧКОВЫЕ КАНАЛЬЦЕВЫЕ

Определение белка в моче.

Качественные пробы

Каждый клинический анализ мочи включает качествен­ное определение белка. Если белок в моче обнаружен, т.е. качественная проба положительная, то обязательно определяют его количество. Все качественные пробы основаны на способности белка коагулировать под дей­ствием кислот и температуры. В результате реакции свернувшийся белок дает муть, поэтому обнаружить его можно только в прозрачной моче. Мутную мочу следует предварительно профильтровать.

Проба с сульфосалициловой кислотой.

Принцип. Белок свертывается при воздействии на не­го химическими реактивами, в результате чего проявля­ется выраженное в разной степени помутнение раствора или выпадение хлопьев.

Реактив. 20% раствора сульфосалициловой кис­лоты: 20 г сульфосалициловой кислоты растворяют в 70— 80 мл дистиллированной воды, переводят в цилиндр вме­стимостью 100 мл и доливают дистиллированную воду до метки. Приготовленный реактив хранят в посуде из темного стекла.

Ход определения. Две химические пробирки поме­чают: «О» — опыт и «К» — контроль. В обе пробирки наливают 4—5 мл прозрачной мочи. В опытную пробирку добавляют 4—5 капель 20% раствора сульфосалициловой кислоты, хорошо перемешивают. Обе пробирки рассмат­ривают рядом на черном фоне. При наличии белка в опытной пробирке отмечается помутнение. Контрольная пробирка служит для сравнения. Чувствительность пробы с сульфосалициловой кислотой 0,015 г/л.

Продукты расщепления белка—альбумозы — также дают положительную реакцию с сульфосалициловой кис­лотой. Для выяснения причины помутнения пробу нагрева­ют. При этом помутнение, вызванное присутствием альбумоз, исчезает, а помутнение, вызванное присутствием белка, усиливается.

Экспресс – тест (сухая диагностическая проба) для полуколичественного определения белка.

Принцип.

Белок изменяет цвет индикатора от желтого до синего.

Ход определения.

Из пенала извлекают по­лоску индикаторной бумаги и погружают ее в исследуемую мочу так, чтобы одновременно смочить индикаторные зоны определения рН и белка. Через 2—3 с полоску помещают на белую стеклян­ную пластинку. Немедленно проводят оценку рН, поль­зуясь цветной шкалой, нанесенной на пенале. Значения рН на цветной шкале соответствуют 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0.

Оценку содержания белка проводят через 60 с после смачивания полоски индикаторной бумаги мочой, пользуясь цветной шкалой, нанесенной на пенале.

Количественное определение белка в моче кольцевой пробой.

Количество белка в моче можно определить методом Брандберга—Робертса—Стольникова с разведением мочи.

В основу этого метода положена кольцевая проба Геллера.

Ход определения. В центрифужную пробирку наливают 1 — 1,5 мл 50% азотной кислоты или реактива Ларионовой. Затем наслаивают на кислоту такое же количество мочи, так, чтобы жидкости не смешивались. При наличии белка на границе жидкостей возникает белое кольцо. Реакцию оценивают на черном фоне и учитывают время появления нитевидного кольца. Чувствительность пробы 0,033 г/л. При таком содержании белка на границе жидкостей появляется белое нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами.

Техника наслаивания. Мочу всегда наслаивают на кислоту, так как относительная плотность мочи ниже, чем кислоты. Наслаивание производят пастеровской пи­петкой с баллоном, которой набирают небольшое количе­ство мочи. Затем мочу вносят в узкую часть центрифужной пробирки, держа ее наклонно, наслаивают по каплям, медленно опуская мочу по стенкам пробирки.

Недостаток пробы заключается в появлении пигмен­тного кольца от окисления урохрома азотной кислотой. Это коричневатое кольцо может мешать определению. В моче, содержащей ураты, иногда появляется беловатое кольцо выше границы жидкостей.

Более четкий результат пробы Геллера получается, если вместо 50% раствора азотной кислоты используют реактив Ларионовой (1% раствор азотной кислоты в насыщенном растворе хлорида натрия).

Изве­стно, что при содержании белка в моче в количестве 0,033 г/л образуется нитевидное кольцо на 2—3-й минуте. Если белка в моче содержится больше, чем 0,033 г/л, то кольцо появляется раньше, причем не нитевидное, а широкое. Такую мочу следует развести дистиллированной водой и вновь уже с разведенной мочой проделать наслоение на азотную кислоту. Если после наслоения появляется нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами, то разведение следует считать законченным. Количество белка в этом случае определяют, умножая 0,033 г/л на степень разведения мочи. Разведение мочи подбирают, пользуясь следующей ориентировочной оценкой свойств кольца: если после наслаивания сразу появилось нитевид­ное кольцо, мочу разводят в 2 раза, если сразу появилось широкое кольцо — в 4 раза, если сразу появилось компак­тное кольцо — в 8 или 10 раз.

Разведение мочи делают в мерной центрифужной пробирке, наливая мочу до метки 1 мл и доливают водой до той метки, во сколько раз делается разведение. Содержимое пробирки тщательно перемешивают пастеров­ской пипеткой с баллоном.

Иногда приходится разводить мочу несколько раз. В этом случае при подсчете количества белка учитывают все разведения.

Пример. При наслаивании цельной мочи появилось сразу компактное кольцо. Разводят мочу в мерной центрифужной пробирке в 10 раз (1 мл мочи и 9 мл воды до метки 10). Наслаивают разведенную в 10 раз мочу на азотную кислоту. Если сразу появляется широкое кольцо, то определение не закончено, его следует продол­жить. Из первого разведения в 10 раз необходимо сделать еще разведение в 4 раза. Общая степень разведения в этом случае будет равна 40 (10x4). С разведенной в 40 раз мочой вновь ставят кольцевую пробу Геллера. При появ­лении нитевидного кольца между 2-й и 3-й минутами определение следует считать законченным.