Количественное определение белка в моче кольцевой пробой

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланки анализа мочи, пробирки, пипетки или дозаторы, исследуемый материал, часы, темный фон

Реактивы: реактив Ларионовой

Алгоритм действий:

• В пробирку вносят 1-2 мл реактива Ларионовой;

• Сверху осторожно наслаивают мочу (1-2 мл);

• Появление кольца определяют на черном фоне в проходящем свете между 2 и 3 мин и расценивают как 0,033 г/л.

• При появлении кольца раньше 2-й мин мочу разводят дистиллированной водой в зависимости от плотности и ширины кольца и степень разведения умножают на 0,033 г/л.

Рис. Техника наслаивания мочи.

Рис. Образование белочного кольца.

Расчет количества белка в зависимости от разведения мочи представ­лен в таблице.

Кол-во мочи, мл	Кол-во дист. воды, мл	Степень разведения	Кол-во белка г/л	Кол-во мочи мл 1:10	Кол-во дист. воды мл	Степень разве- дения	Кол-во белка г/л
1	2	3	0,099	2	2	1:20	0,66
1	3	4	0,132	2	3	1:25	0,83
1	4	5	0,165	2	4	1:30	0,99
1	5	6	1,198	2	5	1:35	1,16
1	6	7	0,231	2	6	1:40	1,32
1	7	8	0,264	9	8	1:50	1,65
1	8	9	0,297	1	5	1:60	1,98
1	9	10	0,330	1	6	1:70	2,31

Количественное определение белка в моче с сульфосалициловой кислотой

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланки анализа мочи, пробирки, пипетки или дозаторы, колориметр (ФЭК или спектрофотометр и т.п.), исследуемый материал

Реактивы: 3% сульфосалициловая кислота, физраствор или дистиллированная вода

Алгоритм действий:

• В пробирку вносят 3,75 мл 3% сульфосалициловой кис­лоты и добавляют 1,25 мл мочи, смешивают;

• Контролем служит пробирка, в которую вносят 3,75 мл раствора хлорида натрия и 1,25 мл мочи.

• Через 5 мин колориметрируют при длине волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптической плотности 5 мм.

	I. этап Опыт Контроль 3,75 мл 3% → ← 3,75 мл 0,9% сульфосали- раствора циловой хлорида кислоты ← 1,25 мл мочи → натрия
II. этап Тщательно перемешать, выдержать 5 мин при комнатной температуре Опыт Контроль
III. этап Фотоколориметрировать при длине волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр)

• Расчет проводят по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения.

Примечание. Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях белка мочу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

Количественное определение белка в моче пирогаллоловым методом.

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланки анализа мочи, пробирки, пипетки или дозаторы, колориметр (ФЭК или спектрофотометр, «Белур» и т.п.), исследуемый материал

Реактивы: пирогаллоловый красный, дистиллированная вода

Алгоритм действий:

Вариант 1. Количественное определение белка в моче пирогаллоловым методом

на анализаторе «Белур-600»

• Прибор предварительно калибруется преподавателем; таким образом, в памяти анализатора сохраняется фактор пересчета оптической плотности в концентрацию белка;

• Подготовка опытной пробы:

• мутную мочу предварительно центрифугируют 10 мин при 1500 об/ мин;

• смешать в пробирке 20 мкл мочи и 1 мл реагента;

• инкубировать пробу 10 мин при комнатной температуре; окраска проб стабильна 60 минут по истечении времени инкубации;

• перед измерением пробу необходимо еще раз перемешать, перелить в оптическую кювету;

• отодвинуть шторку кюветодержателя на анализаторе, вставить кювету (прозрачные стенки кюветы должны располагаться по ходу светового луча);

• измерение концентрации белка происходит автоматически, показатель высвечивается на табло (при концентрации до 1 г/л - в г/мкл; при концентрации белка более 1 г/л – в г/л).

Вариант 2. Количественное определение белка в моче пирогаллоловым методом

на ФЭКе

• Подготовка опытной и контрольной проб:

• мутную мочу предварительно центрифугируют 10 мин при 1500 об/ мин;

• смешать в пробирке 100 мкл мочи и 5 мл реагента;

• контролем служит пробирка, где смешано 100 мкл дистиллированной воды и 5 мл реагента;

• инкубировать пробу 10 мин при комнатной температуре; окраска проб стабильна 60 минут по истечении времени инкубации;

• перед измерением пробу необходимо еще раз перемешать, перелить в оптическую кювету с длиной оптического пути 1 см;

• измерять оптическую плотность раствора при длине волны 600 нм (±20 нм);

• расчет концентрации белка ведется по заранее подготовленному калибровочному графику.

Примечание. Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 4 г/л. При более высоких концентрациях белка мочу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

Качественное определение глюкозы в моче

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланки анализа мочи, пробирки, пипетки или дозаторы, исследуемый материал, диагностические полоски

Алгоритм действий:

1. 10 мл мочи наливают в пробирку.

2. Погрузите тест - полоску в мочу.

3. Удалите остатки мочи, проведя тест-полоской по краю сосуда с пробой или слегка прикоснувшись ребром тест-полоски к фильтровальной бумаге (салфетке).

4. Через указанное в инструкции время сравнить цветовое окрашивание реагентной зоны тест-полоски с цветовой шкалой на упаковке.

Количественное определение глюкозы в моче глюкозооксидазным методом.

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланки анализа мочи, пробирки, пипетки или дозаторы, исследуемый материал

Реактивы: рабочий раствор из глюкозооксидазного набора (см. инструкцию)

Алгоритм действий:

• Подготовка опытной и контрольной проб:

• смешать в пробирке 50 мкл мочи и 5 мл реагента;

• контролем служит пробирка, где смешано 50 мкл дистиллированной воды и 5 мл реагента;

• тщательно перемешать пробы и инкубировать 15 мин при 37ºС или 30 мин при комнатной температуре; окраска проб стабильна 60 минут по истечении времени инкубации;

• перед измерением пробу необходимо еще раз перемешать, перелить в оптическую кювету с длиной оптического пути 1 см;

• измерять оптическую плотность раствора при длине волны 510 нм (±30 нм);

• расчет концентрации глюкозы ведется по заранее подготовленному калибровочному графику.

Примечание. Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 20 ммольг/л. При более высоких концентрациях глюкозы мочу следует разводить и учитывать разведение при расчете.