22 Чистые культуры м/о и способы их выделения. Общая схема определения вида м/о.

Цель анализа видового состава м/о в пищ. продуктах:

1. оценка безопасности продуктов

2. оценка качества продуктов

3. определение м/о, вызывающих порчу продуктов

Схема анализа видового состава:

1. селективное накопление, развитие патогенных м/о

2. получение чистой культуры

3. идентификация:

- морфологические св-ва ( форма, размер, окраска)

- культуральные св-ва ( выпуклость. вогнутость колонии)

- физиологические св-ва ( питание, дыхание, рост)

- биохимические св-ва ( характеристика ферментов)

- генетические св-ва.

Чистой культурой считается потомство одной клетки (споры, вирусной частицы). Легче всего получить чистую культуру на плотной среде, где клетки могут быть разобщены, так что каждая из них сформирует отдельную колонию.

Получение чистой культуры занимает 3 суток:

1 день: - посев исчерпывающих штрихов смешенной культуры на питательный агар

- для жидких сред - разведение, посев на универсальную пит. среду, культивирование. Т=37⁰С, 3 суток.

2 день (рабочий): - получение индивидуальных микроколоний - проверка на чистоту;

- мазок- окраска по Гриму;

- микроскопирование

- повторный пересев

3 день: - анализ колоний на чистоту;

- посев чистых культур на скошенный агар

- культивирование в термостате при Т-37⁰С, сутки.

23 Методы определения клебсиел, золотистого стафилококка и сальмонелл.

Стафилококки – неправельные по форме скопления кокков ( по очертанию могут напоминать гроздья винограда). Стафилококки- солеустойчивые =>в среду добавляют 65 г/л соли. Используют желточно-солевой агар. О появлении колоний судят по цвету ( белый, либо золотистый => золотистый стафилококк).

Проверка на наличие фермента коагулаза: если есть, то плазма крови сворачивается. Петлю м/о вносят в ячейку, плазма свернулась => фермент коагулаза- есть стафилококк.

Сальмонеллы – патогенны, анализируют в 25 г.,их там не должно быть.

Используется среда Мюллера.

Посев на среду Эндо и Плоскирава на сутки и Т=37⁰С. На ср. Энда – прозрачные колонии, на ср. Плоскирава- прозрачно,но мелкие

Пересев на Крумвиде-Алькеницкого: красно-желтые.

24 Методы определения клостридий, протея в мясных продуктах.

Клостридии – споровые палочки, культивируются на 2-ух средах: СЦС( сульфит-циклосерная среда), Вильсона-Блера.

Протекает р-ция с образованием FeS – черная колония.

Разлив пробы в 7 пробирок, из каждого разведения вносится в среду Вильсона-Блера, Т=37⁰С,3 суток. Цвет поменяется-м/о.

На среде Кита-Тароти нужно смотреть за наличием запаха, изменением цвета. Если есть изменение цвета и запаха, то проводится микроскопирование.

Клостридии отличаются способностью расти без доступа О₂, формируют эндоспоры, разлагают полисахариды и белки, не требовательны к составу среды. Это те факторы, которые отличают клостридии от др. м/о, и их следует положить в основу элективного метода культивирования. Необходимо приготовить полусинтетическую питательную среду, в которой источником углерода и энергии явл.,напр., крахмал или какой-либо белок . Пробы можно отбирать из богатых органикой почв. После внесения пробы в среду полученную суспензию следует подвергнуть пастеризации, чтобы оставить жизнеспособными одни эндоспоры. Культивирование нужно осуществлять ванаэробных условиях, чтобы исключить доступ О₂.

Протеи бывают 2 форм: н-форма (подвижная), о-форма (неподвижная).

Определяют есть подв. форма или нет: скошенный питательный агар, отбирают колонию м/о со среды Энда, и вносят на пит. агар на дно пробирки, ставят на 37⁰, если подв. форма, то она сама начнет ползти. Если нет ползучего налета – м.б. о-форма, а может и не быть протей.

Затем используют среду Плоскарева: засев на сутки, Т=37⁰С. Смотрят образуются колонии. На этой среде растут только патогенные м/о, чаще протеи. Протея образует желтыи колонии, их отбирают и пересеивают на среду Крумвиде-Алькеницкого (здесь добавлена мочевина).Протеи могут активировать мочевину , они выделяют Н₂S, не используют лактозу. Колонии меняют цвет на черный =>