65.Методы окраски спор,капсул,клеточных стенок и определения жизнеспособности клеток.

1.Окрашивание бактерий по методу Грама.Полный метод - мазок на предметное стекло фиксируют трехразовым проведением ч/з пламя горелки.На препарат кладут полоску фильтр. бумаги и наливают на нее карболовый р-р генциана фиолетового на 0,5-1 мин.,заливают р-р Люголя и стекло прополаскивают в этиловом спирте 0,5-1 мин.,пока не перестанет отделятся краска.Затем стекло промывают водой и докрашивают от I до 2 мин. фуксином Циля.После промывания и просушивания препарата мазок микроскопируют.

Экспресс-метод на обезжиренное предметное стекло наносят петлей одну каплю дистилл. воды или каплю бульонной культуры.В каплю дистилл. воды вносят небольшое кол-во микробных клеток с анализ. колонки или газона чистой культуры.Затем в каплю вносят петлей 1 каплю реактива №1,распределяют смесь по стеклу и подсушивают мазок при комн. температуре.Фиксируют в пламени горелки, промывают водой,просушивают фильтровальной бумагой и наносят реактив №2,накрывая им всю пов-сть стекла,на 1-5 мин. Прополаскивают водой,просушивают,микроскопируют.

2.Окрашивание капсул по методу Буры.На обезжиренном и обпаленном предметном стекле смешивают каплю бактер-ой культуры с мелким порошком черной туши или суспензией нигрозина.С помощью 2-ого стекла со шлифованными краями быстро готовят тонкий мазок,который фиксируют,проводя ч/з пламя горелки.Мазок докрашивают р-ром кристаллического фиолетового или рабочим р-ром карболфуксина.Промывают в воде,оставляют на воздухе для высыхания и микроскопируют.

Фон препарата окрашиваются в серый цвет, бактериальные клетки окрашиваются монохроматически, капсулы остаются неокрашенными.

3.Окрашивание спор бактерий.На фиксированный мазок наносят р-р малахитового зеленого и нагревают 1мин до возникновения пара влаги,промывают водой,докрашивают 30 сек р-ром сафранина,вновь промывают водой и микроскопируют.Споры окрашиваются в зеленый цвет,вегетативные клетки – в красный.

66.Техника посева образцов в жидкие среды.Метод разведений для определения общего количества микроорганизмов.

Посев осущ-ют бактериолог. петлей.Отбор клеток м/ов:в правую руку берут петлю и стерилизуют ее.Пробирку с культурой берут в левую руку так,чтобы поверхность пит. среды с м/о была хорошо видна.Не выпуская петли,мезинцем и безымян.пальцами прав. руки прижимают пробку к ладони,вынимают ее из пробирки и держат так на протяжении след. действий.Края пробирки с культурой м/ов обжигают в пламени спиртовки,вводят в пробирку стерильную петлю,кот прежде охлаждают.Вынимают петлю из пробирки,горлышко и пробку обжигают,пробирку ставят в штатив,а получ. материал переносят в жидкую пит. среду.Остатки м/ов на петле сжигают.

Разведения готовят в физиолог. р-ре,используя шаг разведения 10 или 100.Для приготовления разв-ий с шагом 10 стерильный ФР разливают по 4,5 мл в стер. пробирки.В 1-ую пробирку вносят 0,5 мл суспензии м/ов – 1-ое разведение.Перемешивают,новой пипеткой отбирают 0,5 мл этой суспензии и переносят в 2-ую пробирку с 4,5 мл ФР – получают 2-ое разведение и т.д.

Шаг 100:все тоже только 9,9 мл ФР и 0,1 мл суспензии клеток.

Степень разведения зависит от плотности популяции.