63.Методы индикации и идентификации энтеробактерий.

Под индикацией понимают обнаружение присутствия энтеробактерий (БГКП) в прод-те.Она осущ-тся на стадии селективного накопления в селект. среде,селенитовом бульоне,ср. Мюллера.Затем получают чистую культуру и проводят идентификацию по: морфол.,культуральным,физиолог.,биохим.,серологическим и генетическим свойствам.

Цель сел. накопл.:подавить Гр(+)иГр(-) бактерии и способствовать развитию патогенных м/ов.

Длительность полного ан-за–30 дней,укорочен.–7 дней.

Плучение чистой кул-ры:

1-ый день:посев исчерпывающим штрихом смеш. кул-ры на пит. агар(ПА);для жидких сред- приготовление разведений,посев на универс. пит. среду,культивирование,Т=37С,3 суток.

2-ой:получение индивид. микроколоний-проверка на чистоту:1)мазок-окраска по Грамму 2)микроскопирование 3)повторный пересев.

3-ий:1)анализ колоний на чистоту 2)посев чистых культур на скошен. агар 3)культивирование в термостате Т=37С, сутки.

4 рода БГКП:эшерихия,цитробактер,клебсиела,энтеробактер.

Идентиф-ция в молоке

1 мл молока сеят в среду обогощения Кеслера с поплавком,термостат. сутки с Т=37С,идент-цию проводят по газообраз-нию(всплыванию поплавка) и изменению цвета среды.

Идентиф-ция на ср. Эндо

Из ср. Кеслера с газообразованием осущ-ют посев на ср. Эндо,Т=37С,сутки;проводят микроскопирование:красные смет. блеском- эшерихия коли,красные-клебсиела,розовые-энтеробактер,цитробактер.если прозрачн.,то это протеи,шигелы,сальмонеллы.

Затем высевают на ср. Козера и ср. с глюкозой.

Идент-ция на ср. Козера – лимон. к-та-цитратный тест.изменение цвета – цитрат(+).Эшерихия дает цитрат(-),т. к. не растет на лим. к-те.

Титр опр-ют по кол-ву полож. проб в пробирках.

64.Правила и приемы микроскопии микроорганизмов.Техника приготовления препаратов бактерий,дрожжей,мицелярных грибов для световой микроскопии.

Правила работы со световым микроскопом.

1)Осветитель устан-ют под конденсором в посадочное гнездо в основании микроскопа,при этом конденсор д.б. поднят до упора,дополн-ая линза конденсора отведена в сторону. Перемещением патрона с лампой вдоль оси добиваются наиболее интенсивного и равномерного осветления поля зрения микроскопа, пользуясь объективом меньшего увеличения (8^х);

2)На центр-ое место столика микроскопа устанавливается препарат;

3)Когда дальнейшие наблюдения проводятся с суховоздушным объективом 40^х,то необходимо прикрыть диафрагму конденсора, перевести револьвер микроскопа на объектив 40^х и медленно опустить тубус микроскопа вниз с помощью макровинта до возникновения изображения изучаемого объекта в поле зрения;

4)Когда дальнейшие наблюдения проводятся с объективом 90^х,то в центр препарата наносят каплю масла,переводят револьвер микроскопа на объектив 90^х и опускают тубус микроскопа вниз до соприкосновения объектива с предметным стеклом,наблюдая сбоку за опусканием объектива в масло.Смотря в оку­ляр,медленно подымают объектив с помощью микровинта до возникно­вения изображения м/ов в поле зрения микроскопа.С помощью мик­ровинта добиваются наилучшей чёткости изображения;

5)После просмотра всех препаратов необходимо снять масло с фронтальной линзы объектива,перевести микроскоп на малое увеличение,опустить конденсор и тубус микроскопа вниз до упора. Хранить микроскоп нужно в условиях, при которых исключается попадание пыли на линзы.

1.Препарат «раздавленная капля».На предметное стекло стеклянной палочкой помещают каплю воды.В нее стерил. петлей вносят небольшое кол-во культуры бактерий или дрожжей,эмульгируют и накрывают покровным стеклом.Остаток влаги из-под стекла собирают фильтровальной бумагой.Препарат микроскоп-ют при общем увеличении (8*15) или (40*15).

2.Препарат «висячая капля».Этот препарат исп-ют при долгом рассмотрении за развитием и размножением м/ов.Небольшую каплю суспензии м/ов наносят бактериол. петлей на стерильное покровное стекло.Стекло переворачивают каплей вниз,кладут на лунку специального предметного стекла.Капля должна свободно висеть в лунке,не касаясь краев и дна.Для создания влажной камеры края лунки смазывают вазелином.

3.Приготовление препаратов грибов.Иголкой для препарирования или бактер. петлей берут небольшое кол-во мицелия и другой иголкой снимают его на сухое предметное стекло.Вначале препарат рассм-ют без покровного стекла при малом увеличении.Затем на пов-сть препарата наносят каплю воды и накрывают покровным стеклом. Рассматривают при последовательном увеличении (8*15) и (40*15).

4.Техника приготовления мазка.На чистое и обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды,в нее бактер. петлей вносят культуру м/ов,эмульгируют и полученную суспензию равномерно размещают на стекле.Препарат высуш-ют при комн. температуре,затем фиксируют.

Цель фиксирования: а)умертвить м/о;б)зафиксировать их на стекле и тем самым уберечь от смывания;в)увеличить восприимчивость клеток к окраске.Лучше фиксировать нагреванием:препарат проносят 3-4 раза над пламенем спиртовки, держа мазок сверху.