§ 5. Количественное определение

В литературе описано около 100 различный способов количест­венного определения дубильных веществ, которые можно подраз­делить на следующие основные группы.

' О &

В

1 2

Рис. 24. Схема хрома­тограммы (ТСХ) кате­хинов листьев чая ки­тайского:

/ — извлечение из лис­тьев чая; 2 — очищенная сумма катехинов; а_-~ ( + ) катехины; в — ( + > эпикатехин

1. Гравиметрические — основаны на количественном осаждении дубильных веществ желатиной, ионами тяжелых металлов или ад­сорбцией гольевым порошком.

2. Титрометрические — на окислительных реакциях, прежде всего с применением перманганата калия (метод ГФ X).

3. Фотоколориметрические — на реакциях с солями окисного жблеЗа, фосфорновольфрамовой кислотой, с реактивом Фолина — Дениса и др.

4. Методы нефелометричеекие, хроматоспектрофотометрические в основном используются в исследованиях.

В СССР и за рубежом стандартным для технических целей яв­ляется гравиметрический метод с применением гольевого порошка [весовой единый метод (ВЕМ)].

В ГФ X входит титрометрический метод Левенталя в модифика­ции А. Л. Курсанова, основанный на способности дубильных ве­ществ быстро окисляться перманганатом калия.

Для количественного определения танина в листьях скумпии и сумаха предложен метод осаждения дубильных веществ сульфа­том цинка с последующим комплексонометрическим титрованием.

Для количественного определения катехинов в листе чая М. Н. Запрометовым разработан фотоколориметрический метод с использованием бумажной хроматографии для разделения кате­хинов и реакции катехинов с 1 %-ным ванилином в концентриро­ванной НС1, в результате которой образуется окрашенный раствор.

Методика количественного определения дубильных веществ (ГФ X). Около 2 г (точная навеска) измельченного сырья, просеян­ного сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм, помещают в кони­ческую колбу вместимостью 100 мл, заливают 50 мл кипящей воды и нагревают на водяной бане в течение 30 мин при частом перемешивании. Жидкость отстаивают в течение нескольких минут и осторожно процеживают через вату в мерную колбу вместимостью 250 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на вату. Сырье в колбе повторно извлекают кипящей водой, как указано выше, процежи­вая жидкость в ту же мерную колбу. Извлечение повторяют не­сколько раз до отрицательной реакции на дубильные вещества (проба с раствором железоаммониевых квасцов). Жидкость в мерной колбе охлаждают и объем извлечения доводят водой до метки. 25 мл полученной жидкости помещают в коническую колбу вместимостью 1 л, добавляют 750 мл воды и 25 мл раствора индигосульфокислоты и титруют "при постоянном перемешивании 0,1 н. перманганатом калия до золотисто-желтого окрашивания.

1 мл 0,1 н. раствора перманганата калия соответствует 0,004157 г дубильных веществ в пересчете на танин. Параллельно проводят контрольный опыт, титруя 25 мл индигосульфокислоты в 750 мл воды.

Процентное содержание дубильных веществ определяют по фор­муле

КРУт-100 * mV_a (100—ш)

где V₁ — объем 0,1 н. КМп0₄, пошедшего на титрование, мл; V₂ — объем 0,1 н. КМп0₄, пошедшего на контрольный опыт, мл; К — поправка на титр (по щавелевой кислоте); D — коэффициент пере­счета на танин: для гидролизуемых дубильных веществ равен 0,004157, для конденсированных — 0,00582; V — общий объем экстракта, мл; т — масса навески сырья, г; V₃ — объем экстракта, взятого для титрования, мл.

Методика количественного определения танина в листьях скум­пии и сумаха. Около 1 г сырья, измельченного и просеянного сквозь сито с размером отверстий 1 мм, взвешивают с точностью до 0,0002 г, помещают в плоскодонную колбу вместимостью 150—250 мл, при­бавляют 30 %-ного этилового спирта, колбу присоединяют к обрат­ному водяному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, периодически смывая частицы сырья со стенок встряхиванием смеси. Затем смесь отстаивают 10—15 мин и жид­кость сливают через стеклянный фильтр (ПОР-160) в мерную колбу вместимостью 200 мл. Извлечение повторяют еще раз указанным способом, предварительно смыв частицы сырья с фильтра 30 %-ным этиловым спиртом. После охлаждения полученного извлечения до­водят объем раствора 30 %-ным этиловым спиртом до метки. Отбирают из мерной колбы 10 мл извлечения, помещают в пробирку для центрифугирования вместимостью 25—50 мл, прибавляют 10 мл реактива осаждения (см. ГОСТ 4564—79). Смесь перемеши­вают палочкой, палочку промывают 5 мл дистиллированной воды, которую присоединяют к основной смеси.. Через 30 мин смесь центрифугируют в течение 5—10 мин с частотой вращения 5—6 тыс. об/мин, жидкость с осадка сливают, а осадок в пробирке взмучивают в 20 мл 0,25 %-ного аммиака той же палочкой, которую затем промывают 5 мл раствора аммиака указанной концентрации, при­соединяя его к центрифугируемой смеси. После центрифугирования промывную жидкость сливают и отбрасывают. Осадок в пробирке растворяют в 3 мл 30 %-ной уксусной кислоты. Раствор количест­венно переносят в колбу вместимостью 250 мл с помощью 80—100 мл дистиллированной воды. Жидкость нейтрализуют 25 мл 5 %-ного гидрокарбоната натрия, прибавляют 0,5 мл ксиленолового оран­жевого и титруют 0,01 М раствором трилона Б до изменения красно- фиолетовой окраски раствора в желтую.

1 мл 0,01 М раствора трилона Б соответствует 0,0013 г танина.

Процентное содержание танина х в пересчете на абсолютно су­хое сырье вычисляют по формуле

_ К/С0.00130- 200- 100. 100 * тЮ (100—ю)

где V — расход трилона Б, мл; К — поправка к титру 0,01 М раствора трилона Б; т — масса навески сырья, г; w — потеря в массе сырья при высушивании, %.

Реактивы и оборудование: калий перманганат 0,1 н.; инди- госульфокислота; этиловый эфир; желатина 1%-ная; квасцы железоаммониевые [аммоний железо (III) сульфат], 1%-ный раствор; НС1 (конц ,0,1 н ); формальде­гид 40%-ный; свинца ацетат (кристал , 10%-ный); бромная вода; уксусная кис­лота 10 и 30%-ная; NaCl, HCI, 0,1 н ; ванилин 1%-ный в конц. НС1; и-бутанол; уксусная кислота (лед.); NaOH (1%-ный); оксид цинка; цинк (метал.); этило­вый спирт 30%-ный (этанол); аммония хлорид; аммиак водный (конц., 0,25%-ный); H₂S0₄ (16%-ная); натрия ацетат; натрия гидрокарбонат 5%-ный; вода (дистил.); трилон Б (0,01 М); ксиленоловый оранжевый 0,1 %-ный; сумма катехинов листа чая.

Колбы плоскодонные вместимостью 100 мл; колбы плоскодонные конические вместимостью 100, 150, 250, 500, 1000 мл; холодильник (обратный) стеклянный лабораторный с нормальным шлифом; колбы мерные вместимостью 200 и 250 мл; микробюретки и пипетки измерительные вместимостью 10, 25 мл; воронки стек­лянные для фильтрования диаметром 5 см; палочки стеклянные; пробирки стек­лянные вместимостью 10 мл; пробирки центрифужные вместимостью 25—50 мл; цилиндры мерные емкостью 1000 мл, 100, 25 и др.; камеры хроматографические для ТСХ; сито с диаметром отверстий 1 мм; кофемолка; весы лабораторные анали­тические; весы ручные; центрифуга лабораторная на 5—6 тыс. об/мин; капилляры стеклянные; вата гигроскопическая; пульверизатор; фотселектроколориметр ФЭК-56М, пластинки «Силуфол»; баня водяная лабораторная; фильтр стеклян­ный ПОР 160.

Вопросы для подготовки

1. Определение дубильных веществ.

2. Классификация дубильных веществ.

3. Физические и химические свойства.

4. Локализация дубильных веществ.

5. Методы выделения дубильных веществ из растительного сырья, очистка.

6. Качественные реакции на дубильные вещества.

7. Хроматографический анализ.

8. Методы количественного определения дубильных веществ в раститель­ном сырье.

Литература

Запрометов М. Н. Физиология растений, т. 5, 3, 1958, с. 408—416.

Биохимия растений: Пер. с англ./Под ред. Кретовича В А. — М.: Мир, 1968, с. 329—348.

Лист скумпии. ГОСТ 4564—79.

Лист сумаха. ГОСТ 4565—79.

Блажей А., Шутый Л. Фенольные соединения растительного происхожде­ния. — М-: Мир, 1977, с. 60—86.