§ 4. Качественное определение

Для обнаружения кумаринов в растительном сырье используют их лактонные свойства, способность флуоресцировать при УФ осве­щении и давать окрашенные растворы с диазосоединениями, микро­сублимацию и хроматографический анализ спиртовых или хлоро­формных экстрактов сырья.

Ввиду плохой растворимости кумаринов в водных и лучшей в неполярных фазах разделение их осуществляется путем распре­делительной хроматографии на импрегнированной бумаге. В ка­честве подвижной фазы используют бензин, петролейный эфир (^кип = 60—100 °С), смесь петролейный эфир — бензол — метило­вый спирт (5:4:1), в качестве неподвижной фазы — 20 %-ный водный раствор этиленгликоля или пропиленгликоля, 10 %-ный формамид в метиловом спирте. Как правило, неподвижной фазой предварительно пропитывается хроматографическая бумага. Хро- матографирование осуществляется нисходящим способом в течение 1,5—2 ч. Хроматографы после высушивания просматривают в УФ свете. Кумарины в зависимости от структуры имеют голубую, си­нюю, фиолетовую, зеленую, желтую флуоресценцию, флуоресци­рующие пятна кумаринов отмечают и хроматограммы обрабаты­вают щелочью. После этого их высушивают в сушильном шкафу при t = 120 °С и вновь просматривают под УФ лампой; как пра­вило, флуоресценция усиливается. Затем хроматограмму обраба­тывают диазотированным сульфаниламидом, от действия которого кумарины в зависимости от структуры окрашиваются в оранжевый, красно-оранжевый, фиолетовый цвета. В некоторых случаях после просматривания хроматограммы в УФ свете ее обрабатывают ре­активом Драгендорфа или иодом. Кумарины проявляются в виде пятен, окрашенных в коричневый цвет.

Помимо бумажной хроматографии широко используется метод тонкослойной хроматографии. Хроматография проводится в тонком слое оксида алюминия" или силикагеля. Хорошее разделение кума­ринов в тонком слое было достигнуто при применении следующих

тстем растворителей: этилацетат — бензол (1 : 2); хлороформ — етролейный эфир (1 : 2).

Проявление кумаринов на хроматограммах проводится точно ак же, как в случае проявления бумажных хроматограмм.

Методику, качественного анализа. Приготовление извлечения из астительного сырья. 2 г измельченного сырья (плоды амми боль- юй, пастернака посевного, псоралеи костянковой, корйей горич- ика и порезника густоцветного и др.) заливают 20 мл этило- ого спирта и кипятят в течение 15 мин с обратным холодиль­ником. После охлаждения фильтруют.

а — псорален; б — ангелицнн; в — иэопим- пннеллнн; г — бергаптен; д — ксантоксин

Качественные реакции. 1. К 3—5 мл спиртового извле­чения прибавляют 10 капель 10 %-ного КОН в метиловом

Рис 23. Схема хромато- граммы (ТСХ) кумаринов корней горичннка Мори- сона (1), пореЗника густо­цветкового (2), вздуто- плодника сибирского (3):

а — пеуцеданин; б — птерик- снн; я — дигидросамидин

спирте и нагревают в течение 5 мин на водяной бане (при нали* чии кумаринов раствор желтеет), затем прибавляют 5 капель све­жеприготовленного диазореактива Паули по Кутачеку. При нали* чии кумаринов раствор приобретает окрашивание от коричнево* красного до вишневого. i

Рис. 22. Схема хроматограммы (ТСХ) кумаринов плодов псоралеи костянко­вой (/), амми большой (2) и пастер­нака посевного (3):

2. К 3—5 мл спиртового извлечения добавляют 10 капель 10 %4 ного КОН в метиловом спирте; раствор нагревают на водяной бане; Затем добавляют 5—10 мл дистиллированной воды и хорошо пере­мешивают, после чего раствор нейтрализуют 10 %-ной НС1 дй кислой реакции. Если при этом наблюдается помутнение или вщ

падение осадка, то это указывает на вероятное присутствие кумари­нов в сырье (лактонная проба).

Хроматографическое определение. 3 а. Из оставшейся части спиртового извлечения берут 0, 01 мл и наносят на пластинку «Силуфол» или силикагеля (закрепленный слой) и хроматографи­руют в системе «-гексан — бензол — метиловый спирт (5:4:1) до тех пор, пока линия фронта не достигнет расстояния 10 см от линии старта. После этого хроматограмму высушивают на воздухе в течение 10 мин, опрыскивают 10%-ным КОН в метаноле и высу­шивают в сушильном шкафу при t = 110—120 °С в течение 2—3 мин. Затем опрыскивают свежеприготовленным реактивом Паули по Кутачеку. При наличии кумаринов в сырье на хроматограмме проявляются яркие пятна от кирпично-красного до сине-фиолетово­го окрашивания в зависимости от структуры кумаринов (рис. 22,23).

36. 0,01 мл спиртового извлечения наносят на полосу хрома­тографической бумаги марки «Б» размером 14 X 65 см, предвари' тельно импрегнированной 10 %-ным формамидом в метиловом спирте, и хроматографируют нисходящим методом в смеси раство­рителей петролейный эфир — бензол — метиловый спирт (5:4:1) в течение 3—4 ч. Хроматограмму высушивают на воздухе в течение 10 мин, опрыскивают 10 %-ным КОН в метиловом спирте и высу­шивают в сушильном шкафу при t — 110—120 °С в течение 2—3 мин, затем опрыскивают диазореактивом Паули по Кутачеку. При на­личии кумаринов в сырье на хроматограмме появляются яркие пятна от кирпично-красного до сине-фиолетового окрашивания.

Реактивы и оборудование: этиловый спирт (этанол); КОН, 10%-ный раствор в метиловом спирте; НС1 10%-ная; CaS0₄; н-гексан; бензол; метиловый спирт (метанол), 10%-ный раствор в метиловом спирте; петролей­ный эфир (/кип = 60 — 100 °С)

Бумага хроматографическая марки Б; пластинка «Силуфол»; силикагель марки КСК; камеры хроматографические для ТСХ и БХ; колбы с нормальным шлифом вместимостью 50 мл; холодильники (обратные) стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; пробирки стеклянные; шкаф сушильный лабораторный; микропипетки измери­тельные вместимостью 0,2 мл; пластинки стеклянные для ТСХ размером 13 X X 18 см; цилиндры мерные на 250 мл.

»