§ 9. Качественное определение

Получение извлечения: 1 г Измельченного сырья помещают в кол­бу с притертой пробкой, заливают 4-кратным количеством хлоро­форма (этиловый, метиловый спирт) и оставляют на сутки, перио­дически взбалтывая. Затем фильтруют через бумажный фильтр (извлечение «А»).

Получение сырого филицина. 10 г измельченных корневищ сырья заливают восьмикратным количеством этилового спирта, взбалты­вают в течение 30 мин и оставляют на 3 ч для экстракции. Извле­чение фильтруют и упаривают в вакууме при температуре 55—60 °С до густой консистенции. Остаток обрабатывают несколько раз насы­щенным раствором гидроксида бария и фильтруют. Фильтрат под­кисляют концентрированной НС1 до рН 2,0. Выпавший осадок сы­рого филицина отфильтровывают, промывают дистиллированной водой и высушивают в эксикаторе.

ige ¥ 3,5 3.0

Методики качественных реакций. 1. К 1 мл извлечения добавляют 3—5 капель смеси равных объемов 1 %-ного раствора FeCl₃ и K₄Fe(CN)_e. Образуется темно-зеленое окрашивание.

2. К 1 мл извлечения добавляют 2—3 капли реактива Паули по Кутачеку: вишнево-красная окраска переходит в оранже­вую.

3. К 1 мл извлечения прибавляют раствор ванилина в концентри­рованной НС1: появляется красное окрашивание.

4. К 1 мл извлечения добавляют раствор FeCl₃, K₄Fe(CN)_e (1 : 1) и 10 капель концентрированной НК0₃. Образуется темно-бурое окрашивание.

5. Хроматографическое определение. На пластинку «Силуфол», пропитанную лимонно-фосфатным буфером (рН 6,0), с последующим активированием пластинки при температуре 70—80 °С (1 ч) наносят 1 °о-ный сырой филицин из мужского па­поротника (5—6%-ный раствор из иголь­чатого папоротника) в хлороформе капил­ляром в одно касание на стартовую линию хроматографической пластинки, высота жидкости в капилляре 1,5—2 см, диаметр полученного пятна 2—3 мм. Высушенную пластинку помещают в хроматографиче- скую камеру со свежеприготовленной, на­сыщенной системой н-гексан — хлороформ (1 1) с 5 % этилового спирта. Время хроматографирования 1 ч. Хроматограмму высушивают на воздухе и просматривают в УФ свете, отмечая зону флуоресценции. Проявляют флороглюциновые производ­ные реактивом Паули по Кутачеку, отме­чая цвет пятен (рис. 11).

В мужском папоротнике обнаружива­ются не менее 6 пятен, из них иденти­фицированы флаваспидовая кислота, ас- пидинол, альбаспидин; в игольчатом папо­ротнике не менее 8 пятен, для 4 из них установлено строение (флаваспидовая кислота, аспидинол, дезас- пидин и аспидин).

Хроматографическое разделение можно проводить в тонком слое силикагеля марки КСК, смешивая 4 г силикагеля с 10 мл лимонно- фосфатного буфера с рН 6,0 и последующим активированием- пла­стинки в течение 1 ч при t = 105—110 °С в той же системе.

а

" «4Ш» ⁰ даяа

S ф Ь #

а I

I I

® О /

Рис. 11. Схема хромато граммы (ТСХ) флороглю- цинов игольчатого и муж­ского папоротников:

1 — раствор сырого филици­на из корневищ игольчатого папоротника; 2 — раствор сырого филицина из корне­вищ мужского папоротника; а — аспидин, б — дезаспи- дин, в — аспидинол; гг_х — флаваспидовая кислота (тау- томерные формы); д — аль баспидин

§ 10. Количественное определение

65

Методы количественного определения производных флороглю- цина ограничивались в фармакопеях различных стран только опре­делением сырого филицина. В литературе имеются сведения о раз­работке хроматоспектрофотометрических методов определения фло-

3 п/р Гринкевнч и др.

роглюцидов в кристаллическом порошке и сырье, в частности для флаваспидовой, ацетилфлаваспидовой кислот, аспидина, аспиди- нола. Метод основан на способности поглощать фенольные соеди­нения в УФ области при определенных длинах волн, характерных для этого класса соединений.

Методика определения суммы сырого филицина из корневищ муж­ского папоротника — Rhizoma Filicis maris (Dryopteris filix mas L.) (ГФ X, ст. 584). 50 г псрошка корневищ экстрагируют около 2 ч в аппарате Сокслета этиловым эфиром до тех пор, пока эфир не будет стекать бесцветным и 10 мл эфирного извлечения не перестанут оставлять при испарении видимого остатка. Извлечение фильтруют, эфир отгоняют на водяной бане до 30 мл, после чего остаток взбал­тывают в делительной воронке с 30 мл насыщенного раствора гидро- ксида бария в течение 5 мин. После разделения слоев водный слой фильтруют. 24 мл фильтрата (40 г сырья) смешивают с 4 мл концен­трированной НС1 и последовательно взбалтывают с 30, 20, 15 мл этилового эфира. Объединенные эфирные извлечения обезвоживают 4 г безводного Na₂S0₄ и фильтруют через складчатый фильтр во взве­шенную колбу. Сульфат натрия и фильтр промывают этиловым эфиром дважды по 10 мл. Эфир отгоняют на водяной бане, а остаток сушат в течение 1 ч при 100 °С. Процентное содержание филицина х рассчитывают по формуле

_ а\00 -100 т (100 —ш) '

где а — количество сырого филицина, полученного после отгонки этилового эфира, г; т — масса навески сырья, вычисленная по отмеренному объему фильтрата, г; w — потеря в массе сырья при высушивании.

Содержание сырого филицина в корневищах должно быть не менее 1,8 %.

Реактивы и оборудование: лимонная кислота; натрия фосфат двузамещенный; Ва(ОН)₂; стрептоцид белый; NaN0₂; FeCl₃; K4Fe(CN)_e; ванилин; хлороформ; к-гексан; этиловый спирт (этанол); н-бутанол (бутанол-1); НС1 (конц.); этиловый эфир; Na₂S0₄; реактив Паули по Кутачеку [белый стрептоцид (3 г); н-бутанол (14 мл); НС1 (конц., 6 мл); вода дистиллированная (200мл), хранятв тем­ной склянке, в реактив перед употреблением добавляют натрий нитрит кристал­лический]; лимонно-фосфатный буфер с рН 6,0 [смесь двух растворов (раствор А — 0,2 М Na₂HP0₄ и раствор В —0,1 М лимонной кислоты)]. Для получения 20 мл буфера смешивают 12,63 мл раствора А и 7,37 мл раствора В (рН прове­ряют по универсальному индикатору).

Аппарат Сокслета; силикагель марки KCK; шкаф сушильный лаборатор­ный; колба круглодонная с нормальным шлифом вместимостью 500 мл; бани во­дяные лабораторные; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5— 10 см; холодильник стеклянный лабораторный; фильтры бумажные; пробирки стеклянные; камера хроматографическая для ТСХ; капилляры стеклянные; пла­стинки «Силуфол»; пластинки стеклянные для ТСХ размером 20 X 20 см; пуль­веризатор; колбы конические вместимостью 100 мл; весы ручные; весы лабора­торные аналитические; ступки фарфоровые с пестиком или кофемолка электри­ческая бытовая.

Вопросы для подготовки

1. Физико-химические свойства фенольных соединений.

2. Качественные реакции на арбутин и флороглюциды.

3. Хроматографический анализ.

4. Качественные реакции на фенольные соединения.

5. Методы количественного определения флороглюцидов и фенологликози- дов в лекарственном сырье.

Литература

Шталь Э. М. Хроматография в тонких слоях. —М-: Мир, 1965.