Методические указания

1. Большинство мицелиальных грибов, развиваясь на пищевых продуктах, размножаются бесполым путем (спорами, конидиями, оидиями). Поэтому на лабораторных занятиях рассматриваются только способы бесполого размножения на примерах грибов – распространенных возбудителей порчи продуктов. Культуры этих

грибов выращивают в чашках Петри¹ на среде сусло-агар. Культуры в чашках не следует без надобности держать открытыми, так как споры грибов легко осыпаются и рассеиваются, что может привести к нежелательной контаминации ими лаборатории и самих чистых культур.

Вначале просматривают и описывают культуральные признаки грибов визуально. После визуального просмотра приступают в микроскопическому изучению морфологических признаков - мицелия и органов размножения с увеличениями 40х, 100 и 400х. При небольшом увеличении 40х и 100х выясняют наличие воздушного мицелия, его характер, расположение спорангие- и конидиеносцев, спор и конидий. Наблюдения ведут у края колонии, на границе пигментированной и неокрашенной части колонии и в центре.

Приготовление препаратов грибов для микроскопирования производят двумя обожженными и затем охлажденными препаровальными иглами. На обезжиренное чистое предметное стекло наносят каплю смеси равных объемов глицерина и этилового спирта (1:1). Отбирают небольшой кусочек мицелия вместе с плодоносящими гифами и прилегающей к нему тонким слоем питательной среды. В эту каплю вносят отобранный кусочек мицелия гриба. Осторожно, не нарушая структуры мицелия, расправляют гифы мицелия и плодоносящие органы иглами, после чего накрывают покровным стеклом и слегка прижимают.

2. Для приготовления препарата гриба Rhizopus нужно двумя предварительно обожженными и охлажденными препаровальными иглами (рис.2) взять его черновато-серый пушистый воздушный мицелий и накрывать покровным стеклом осторожно, без резкого броска, чтобы не раздавить спорангии – вместилища спорангиоспор. После этого иглы обжечь в пламени горелки.

При микроскопировании выявить одноклеточное строение мицелия

----------------------------------------------------------------------------------------------------

¹ Чашки Петри – стеклянные, круглые, плоские чашки с крышкой диаметром 6…11 см и

высотой 1,5…2 см.

и органы размножения – спорангиеносцы. Рассмотреть их по всей длине, передвигая соответствующим образом препарат. Спорангиеносцы Rhizopus крупные, неветвящиеся, отрастают как

правило от грибницы пучками. Спорангии, сидящие на их верхушках (спорангиеносцах), крупные, шарообразные, с массой спор, которые видны через тонкую прозрачную оболочку спорангиев. Спорангиоспоры одноклеточные, округлые или эллипсоидальные, бесцветные или сероватые (рис.11б).

В препарате всегда есть много свободно лежащих спор, высыпавшихся из некоторых лопнувших спорангиев.

3. Для приготовления препарата гриба Aspergillus взять воздушный окрашенный мицелий. При микроскопировании найти многоклеточные гифы мицелия и органы размножения – конидиеносцы. Конидиеносец по внешнему виду простой, одноклеточный, ветвящийся. На его конце имеется булавовидное вздутие, на котором расположены в один ярус бутылочковидные фиалиды, а на них в виде цепочек – конидии. Верхушка канидиеносца с массой неосыпавшихся спор кажется плотной, плохо просвечивается, ее можно рассмотреть лишь при осыпании спор (рис. 12а).

4. Для приготовлении препарата гриба Penicillium рекомендуется брать более молодую, зеленую часть грибницы – на границе с белым краем ее, заметно внедряясь в нее препаровальными иглами.

При микроскопировании найти многоклеточные гифы и органы размножения – конидиеносцы. Они представляют собой многоклеточные гифы, кистевидно разветвленные на концах. На концах ветвей расположены фиалиды (по 2…4), а на фиалидах – цепочки одноклеточных конидий, имеющих голубовато-зеленую окраску с различными оттенками (рис.12б).

5. Для приготовления препарата гриба Fusarium следует взять небольшой кусочек грибницы ярко розового или коричневого оттенков.

При микроскопировании найти многоклеточный мицелий и конидии серповидноизогнутые и банановидные одноклеточные или многоклеточные в зависимости от вида данного рода (рис.13).

6. Для приготовления препарата гриба Alternaria взять грибницу в черных участках ее, заметно внедряясь иглами вглубь грибницы.

При микроскопировании найти многоклеточный мицелий и крупные многоклеточные темноокрашенные конидии округло-грушевидной или заостренно-вытянутой формы. Обратить внимание на то, что конидиеносцы – гифы, на которых находятся конидии, слабо развиты и мало отличаются от других вегетативных гиф (чаще они слегка пигментированы – серые, буроватые). Конидии образуются на таких конидиеносцах поодиночке или короткими цепочками (рис.15).

7. Для приготовления препарата гриба Helminthosporium взять грибницу в темных ее участках, заметно внедряясь иглами вглубь грибницы.

При микроскопировании найти многоклеточный мицелий и крупные многоклеточные конидии булавовидной формы с поперечными перегородками оливкового цвета (рис.16).

8. Для приготовлении препарата гриба Geotrichum снять (слегка соскабливая ) иглой его белый стелющийся мицелий с субстрата.

При микроскопировании следует установить многоклеточность мицелия и отсутствие специальных органов размножения. Гриб размножается оидиями, которые образуются на концах гиф путем их расчленения в виде бесцветных клеток прямоугольной или округло-прямоугольной формы. В препарате могут наблюдаться иногда цепочки нераспавшихся оидий (рис.17).

Оборудование и материалы. Микроскопы, флаконы с глицериновой смесью, предметные и покровные стекла, препаровальные иглы, фильтровальная бумага – по числу студентов.