Виготовлення препаратів

Для того, щоб вивчати мікроорганізми за допомогою мікроскопа, необхідно виготовити препарати. Під мікроскопом можна вивчати як живі, так і неживі мікроорганізми. Так, живі мікро­організми можна вивчити, ознайомившись з їхньою формою, розташуванням клітин, рухливістю, способом розмноження, утворен­ням і пророс­танням спор.

Для вивчення живих бактерій готують препарат мето­дом розтисненої краплі.

Виготовлення препаратів методом розтисненої краплі. На предметне скло наносять краплю води з промивалки або колбочки. Потім обпаленою над полум’ям пальника петлею вносять в краплю води невелику кількість (на кінчику петлі) мікробів, які підлягають вивченню, і ретельно перемішують до одержання ополисценції. Якщо досліджують рідкі матеріали або мікроби, що знаходяться у рідкому середовищі, то вода на предметне скло не наноситься, а наносяться мікроби разом з краплею рідини. Потім краплю суспензії, яка знаходиться на предметному склі, накривають покривним склом, слідкуючи за тим, щоб під нього не потрапило повітря (це ускладнить мікроскопування). Для цього покривне скло спочатку ставлять на ребро, а потім обережно опускають і притискають нігтем або скляною паличкою (крапля рідини при цьому розтискається). Крапля має бути середнього розміру і заповнювати весь простір між предметним і покривним склом. Якщо вона занадто велика, то рідина може виступити за край покривного скла, що стане на перешкоді мікроскопуванню. У такому випадку надлишок води необхідно усунути за допомогою фільтрувального паперу.

Препарати, виготовлені методом розтисненої краплі (з живих мікробів), розглядають при закритій діафрагмі. Частіше при цьому користуються об’єктивом, який дає збільшення у 40 разів. Слід запам’ятати, що робоча відстань цього об’єктива від препарату знаходиться у проміжку від 1 до 2 мм (що відповідає фокусній відстані об’єктива). У цьому проміжку і слід знаходити зображення.

Виготовлення забарвлених препаратів. Бактерії дуже часто розглядають у забарвлених препаратах. Так можна краще вивчити будову клітини, включення, спороутворення, наявність джгутиків тощо. Забарвлені препарати готують так. Спочатку роблять мазок. Для цього краплю бактеріальної суспензії, виготовленої методом розтис­неної краплі, розмазують петлею на поверхні предметного скла. Виготовлений мазок висушують на повітрі. Щоб прискорити процес висушування, препарат можна направити під струмінь теплого повітря над полум’ям пальника (але ні в якому разі не вносити у полум’я пальника). Потім необхідно вбити мікроби. Мертві клітини краще забарвлюються і добре закріплюються на поверхні скла, не змиваючись при наступних операціях. Для того, щоб убити мікроби, препарат фіксують, тобто три рази повільно проводять через полум’я пальника мазком зверху. Фіксований мазок фарбують. Для цього на поверхню мазка наносять 1–2 краплі фарби з крапельниці і витри­мують впродовж 2–3 хвилин. (Як барвник можна використовувати водний розчин фуксину, розчин метиленової синьки, генціан-віолету або іншої фарби). Після забарвлення фарбу змивають водою з промивалки і препарат ретельно висушують фільтрувальним папером.

Забарвлені препарати необхідно розглядати при відкритій діафрагмі з об’єктивом×90. Об’єктив×90 – це об’єктив, що дає максимальне збільшення, однак лінза його невелика і через неї проходить незначна кількість світлових променів. Через шар повітря розглядати препарат з об’єктивом×90 неможливо, через те, що світлові промені, переходячи з одного середовища в інше (із скла в повітря), заломлюються і в об’єктив потрапляє занадто мало світла, в результаті чого зникає видимість препарату. Щоб виключити заломлення світлових променів, на препарат наносять краплю кедрового (імерсійного) масла і об’єктив занурюють у масло, розглядаючи препарат через шар масла (а не через шар повітря). Кедрове масло має показник заломлення такий, як і скло, завдяки чому повністю виключається розсіювання світлових променів і препарат буде добре видно. Слід запам’ятати, що робоча відстань об’єктива×90 від препарату знаходиться у проміжку від 0,5 до 1,0 мм, тому зображення слід шукати на цій відстані.