9. Методы стерилизации. Аппаратура, используемая для стерилизации. Контроль эффективности стерилизации.

Стерилизация - методы, применяемые для освобождения различных объектов от всех форм жизни, уничтожение всего живого на поверхности и внутри стерилизуемого объекта. Стерильность может быть достигнута при помощи физических и химических методов. Физические методы стерилизации: тепло (тепловая стерилизация) - нагревание в пределах 60-70 (пастеризация), кипячение(30-60 мин с использованием закрытых металлических емкостей стерилизаторов), пар, сухой жар(горячим воздухом при т-ре 160-170 в течение 2 ч., погибают вегетативные клетки, и споры), инфракрасные лучи; ультрафиолетовое облучение; бактериальные фильтры (холодная стерилизация), проникающая радиация и ультразвук. Химические вещества, применяемые для стерилизации, должны быть бактерицидными и не портить инструменты и материалы, с которыми они соприкасаются: (йод, спирт, хлорамин; для обеззараживания приборов, инструментов, материалов - диацид; для предупреждения бактериального загрязнения питательных сред их консервируют прибавлением хлороформа, толуола, иногда эфира; для освобождения от консерванта среду нагревают на водяной бане до 56. Вакцины и лечебные сыворотки консервируют фенолом (0,25-0,5%), формалином (0,05%)или мертиолатом. Автоклавирование - нагревание материала насыщенным водяным паром при давлении выше атмосферного. Погибают и вегетативные клетки и споры при 121. Осуществляют в герметически закрывающихся толстостенных аппаратах - автоклавах. Бывают вертикальные и горизонтальные, проходные и непроходные. Дробная стерилизация (тиндализация) - для стерилизации сред, портящихся под действием температур выше 100°С. Прогревают среду или ее компоненты без избыточного давления несколько раз, и в период между прогреваниями дают прорасти жизнеспособным спорам. Стерилизация фильтрованием - для субстратов, не выдерживающих нагревания (жидких сред и растворов, содержащих термолабильные белки, витамины, сахара, некоторые антибиотики, а так же сывороток, летучих веществ). Пропускание жидкостей через мелкопористые бактериальные фильтры.При использовании пара контроль стерилизации с помощью термометров и манометров, при использовании сухожаровой стерилизации термометром. Биологический метод: в качестве тест-МО используют В. Subtillis и ее споры или садовую землю, в качестве тест объектов - предметы, чаще всего подвергающиеся стерилизации. Химические средства контроля: при паровой стерилизации вместе с инструментами и материалами в бикс помещают различные вещества, которые плавятся в пределах 120, цветные термоиндикаторы плавления.

11. Методы определения антагонистической активности микроорганизмов. Бактериоциногения.

В природных условиях различные виды мо живут в ассоциациях, оказывая друг на друга взаимное влияние, зависящее как от свойств мо, так и от окружающих условий. Одной из форм взаимодействия является антагонизм - угнетающее влияние одного микробного вида на другой; выражается в задержке развития или гибели мо, на которых микроб-антагонист оказывает свое действие. Антагонизм наблюдается среди многочисленных групп микробов и в настоящее время широко используется в медицинской практике в виде применения АБ (продуктов жизнедеятельности мо-антагонистов) для лечения и профилактики инфекционных болезней. Активные антагонисты обнаруживаются в воде, воздухе, почве. Способность некоторых штаммов бактерий продуцировать специфические АБ вещества - бактериоцины, подавляющие ЖД бак. клеток других штаммов того же вида или филогенетически родственных видов, называется бактериоциногенией. Бактериоциногения обнаружена у многих видов бактерий. Большая группа нехромосомных генетических элементов - плазмид детерминирует и контролирует синтез бактериоцинов разных видов бактерий. Бактериоцины именуются в соответствии с видовым названием продуцентов. Бактериоцины обнаружены у киш.палочек (колицины), бактерий чумы (пестицины), холерных вибрионов (вибриоцины), стафилококков (стафилоцины), синегнойных палочек (пиоцины). В соответствии с этим способность отдельных видов бактерий продуцировать бактериоцины называется колициногенией (пестициногенией и т.д.). Наиболее изучены колицины, продуцируемые кишечными палочками, шигеллами и другими видами энтеробактерий. Бактериоцины одного и того же вида могут различаться по ряду признаков и в связи с этим подразделяются на типы. Колицины энтеробактерий (продуцируемые под контролем колициногенных плазмид) представляют собой вещества белковой природы. Известно более 25 типов колицинов, различающихся по своим физико-химическим и антигенным свойствам и по способности адсорбироваться на определенных участках поверхности бактериальных клеток. Они обозначаются латинскими буквами А, В, С, D, Е₁, E₂, К и т.д. Чувствительность или устойчивость бактериальных клеток к действию бактериоцинов определяется прежде всего наличием или отсутствием на их поверхности рецепторных структур, специфически адсорбирующих тот или иной бактериоцин. Из популяции чувствительных к бактериоцину бактерий могут быть выделены особи, утратившие вследствие мутации способность синтезировать рецепторные структуры и ставшие устойчивыми к бактериоцину соответствующего типа. Такие устойчивые мутанты часто сохраняют чувствительность к другим бактериоцинам того же вида. Следовательно, бактериоцины одного и того же вида могут различаться по специфичности адсорбции на рецепторных структурах бактериальных клеток. Это свойство используется для типирования ряда колицинов. Бактериоциногенные бактерии устойчивы к действию продуцируемого ими бактериоцина, хотя и обладают рецепторными структурами, адсорбирующими данный бактериоцин. Такая устойчивость, в отличие от устойчивости бактериоциногенных клеток, утративших соответствующие рецепторы вследствие мутации, называется иммунитетом бактериоциногенных бактерий к гомологичному бактериоцину. В некоторых случаях равные типы бактериоцинов, адсорбирующихся на одних и тех же рецепторах, можно дифференцировать на основании иммунитета клеток, продуцирующих эти бактериоцины. Так, колицины группы Е, адсорбирующиеся на одних и тех же рецепторах, делятся по специфичности иммунитета на типы Е₁, Е₂, Е_З, Е₄. Бактерии, продуцирующие один из типов колицинов группы Е, иммунны к данному колицину, но сохраняют чувствительность к другим колицинам этой группы. Деление колицинов группы Е по специфичности иммунитета продуцирующих их клеток соответствует их делению по антигенной специфичности. При обычных условиях культивирования в большинстве клеток бактериальной популяции, содержащей колициногенные особи, синтеза колицина не происходит. Примерно в одной из 1000 клеток отмечается продукция колицина. Но количество колицинпродуцирующих клеток может быть резко увеличено при обработке бактерий УФ или другими агентами. При этом погибают только клетки, продуцирующие колицины. В то же время бактериальные клетки, несущие Col-плазмиды, резистентны к действию гомологичного колицина, как и лизогенные бактерии к действию гомологичного фага. Т. о., характерной чертой Col-плазмид является потенциальная летальность для клеток-продуцентов, которая сближает их с профагами. Механизм бактерицидного действия колицинов неодинаков. После адсорбции на рецепторах наружной мембраны бактерий один из колицинов (Е₃) нарушает функцию рибосом, другой (Е₂) является ферментом - эндодезоксирибонуклеазой. Имеются колицины, действующие на ЦПМ бактерий. Col-плазмиды находятся в клетках энтеробактерий в автономном состоянии и передаются при конъюгации без сцепления с хромосомой. Но некоторые из них (Col V, Col В) могут встраиваться в бактериальную хромосому и находиться в ней в интегрированном состоянии. Они, как и F-плазмиды, передаются путем конъюгации в рецепиентные клетки благодаря имеющемуся у них tra-оперону. Широкое распространение бактериоциногении среди микрофлоры организма человека имеет экологическое значение как один из факторов, влияющих на формирование природных биоценозов.