Исследование частоты переноса генетического материала в жидкой питательной среде, приготовленной на основе воды, обработанной ультрафиолетом

Свежие агаризированные культуры штамма E.Coli J 5-3 содержащие плазмиды pR1, несущие детерминанты резистентности к антибиотикам широкого спектра действия различных химических групп: ампициллину, карбенициллину, канамицину, и свежая агаризированная культура штамма E.coli C-600, чувствительного ко всем антибиотикам, кроме налидиксовой кислоты, инкубировались в воде, обработанной ультрафиолетом, при температуре 37^оC. Контроль: инкубация в обычных средах при температуре 37^оC. После инкубации культуры пересевались на бульон и помещались на 24 часа в условия, соответствующие преинкубационным. По окончании инкубации приготовляли коньюгационные смеси: 1 мл культуры донора, содержащие 1x10⁹ CFU/мл были смешаны с 1 мл культуры реципиента той же концентрации. Были приготовлены следующие коньюгационные системы:

- доноры и реципиент R-плазмид, выращенные в воде, обработанной ультрафиолетом, и осуществляющие коньюгацию в воде, обработанной ультрафиолетом,;

- доноры и реципиент R-плазмид, в воде, обработанной ультрафиолетом,и осуществляющие коньюгацию в обычной среде;

- доноры и реципиент R-плазмид, выращенные в в обычной среде и осуществляющие коньюгацию в в воде, обработанной ультрафиолетом;

- доноры и реципиент R-плазмид, выращенные в обычной среде и осуществляющие коньюгацию в обычной среде (контроль) .

После инкубации смеси были высеяны на среду, содержащую два антибактериальных агента (для селекции трансконьюгантов): один из антибиотиков, к которым устойчив штамм-донор, и налидиксовую кислоту в концентрации 100 мкг/мл. По окончании инкубации количество выросших на чашках колоний трансконьюгантов подсчитывалось по формуле

A

N= ------ (Lg)

B

N - частота передачи плазмид

A - количество колоний трансконьюгантов (CFU/ml)

B - количество живых клеток реципиента в коньюгационной смеси (CFU/ml)

Ферментативная активность культур, выросших в питательных средах, содержащих воду, обработанную ультрафиолетом

Оценивалась на основе выработки индуцибельного фермента (бета-лактамазы) и конститутивного фермента (гемолизина).

Определение активности бета-лактамазы. Культура штамма Escherichia coli - продуцента бета-лактамазы выращивалась в виде макроколонии на среде с ампициллином в концентрации 60 миллиграмм на миллилитр в течении суток при температуре 37^оС. По окончании инкубации макроколония стерилизовалась парами хлороформа и поверхность среды заливалась культурой Escherichia coli. чувствительной к ампициллину. Посев инкубировали в течении суток при температуре 37^оС. По окончании инкубации активность бета-лактамазы оценивали по диаметру зоны роста чувствительного к ампициллину штамма вокруг макроколонии штамма-продуцента бета-лактамазы.

Определение активности гемолизина. Культура золотистого стафилококка, обладающего гемолитическими свойствами, дозированно наносилась на поверхность 5% кровяного агара, приготовленного на основе воды, обработанной ультрафиолетом. Контроль - кровяной агар, приготовленный на обычной воде. Посев инкубировали в течении суток при температуре 37^оС. По окончании инкубации активность продукции гемолизина.