Исследование влияния воды, обработанной различными дозами ультрафиолета на культуральные свойства бифидобактерий, лактобацилл и пекарских дрожжей

Ильин В.К., Есиев С.С*., Ракитская Л.В.**, Тюрина Д.А., Соловьева З.О., Дешевая Е.А.

Государственный научный центр Российской Федерации Институт медико-биологических проблем РАН , г. Москва

*ЗАО «Зерноком», г. Саратов

**Общественное движение «Берегиня», г. Москва.

Введение

Известно стимулирующее влияние некоторых физических факторов на биологические свойства микроорганизмов. Так, например, факторы повышенного давления газовой среды способствуют активизации грамположительных микроорганизмов (1,2). Имеются свидетельства об оптимизации культуральной активности ряда микроорганизмов под влиянием низких доз радиации и измененной солнечной активности (3).

Целью наших исследований явилось изучение ростовых свойств микроорганизмов, участвующих в пищевых технологических процессах, – хлебопечении, пивоварении и получении кисломолочных продуктов (бифидобактерий, лактобацилл и пекарских дрожжей) при их культивировании на средах, приготовленных с использованием воды, предварительно обработанной жесткими дозами ультрафиолета.

Материалы и методы

Обработка воды ультрафиолетом

Объем воды необходимый для работы обрабатывается не фильтрованным светом источника ультрафиолетового излучения, с содержанием в лучистом потоке ультрафиолетовых квантов с длиной волны 190 - 250 нм, не менее 30% (ДРТ-400). Поток света мощностью 0,4 вт/см² моделируется с помощью электромагнитного поля дополнительного устройства. Обработка производится до увеличения внутренней энергии воды в 2 раза, что определяется с помощью вискозиметра.

На основе воды, обработанной ультрафиолетом приготовляли следующие стандартные питательные среды:

• среда МРС для культивирования лактобацилл;

• среда "Бактофок" для культивирования бифидобактерий;

• среда LB для культивирования аэробных тест-культур;

• мясо-пептонный бульон для исследования частоты переноса плазмид при конъюгации.

• Сусло-агар для культивирования дрожжей

Контролем явились аналогичные среды, содержащие воду, не обработанную ультрафиолетом.

Штаммы микроорганизмов

В исследованиях использовались коллекционные культуры видов Lactobacillus casei, Bifidobacterium longum, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Saccharomyces cerevisiae из коллекции ГНЦ РФ ИМБП РАН.

Исследование выживаемости культур лактобацилл и бифидобактерий в питательных средах, содержащих воду, обработанную ультрафиолетом

Тестируемые культуры изначально находились в лиофилизированном состоянии. Культуры регидрировались и 10-кратно раститровывались в питательных средах. Инкубировали 48 часов при 37^оС. Выживаемость оценивали по количеству выросших колоний.

Исследование количества живых клеток в колониях лактобацилл и бифидобактерий, выросших в питательных средах, содержащих воду, обработанную ультрафиолетом

Колонии микроорганизмов, выросших в толще агара, изолировали, разводили в стерильном физрастворе и раститровывали в пробирках, содержащих стандартную ростовую среду. Среды с посевами инкубировали в термостате при 37^оС в течении 24 часов, после чего производили учет выросших колоний.

Исследование микробного антагонизма в питательных средах, содержащих воду, обработанную ультрафиолетом

Культура тест-штамма лактобацилл выращивалась в течении 24 часов при 37^оС на поверхности питательного агара в форме макроколонии. По окончании инкубации макроколония стерилизовалась парами хлороформа и заливалась полужидким агаром, содержащим культуры следующих видов:

- Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк);

- Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка);

- Escherichia coli (кишечная палочка).

Посевы инкубировались в течении 24 часов.

По окончании инкубации антагонистическая активность оценивалась по диаметру зоны задержки роста вокруг макроколонии тестируемого штамма лактобацилл.