Глава 10 методы исследования инфицированных ран

55. Возбудителями гнойно-воспалительных процессов могут быть представители различных родов и видов бактерий, большинство которых являются условно-патогенной микрофлорой. Основными этиологическими агентами являются: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Pseudomonas spp., Escherichia spp., Acinetobacter spp., Proteus spp., Citrobacter spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp., Peptococcus spp., Clostridium spp., Corynebacterium spp., Propionobacterium spp., Bacteroides spp., Nocardia spp., Fusobacterium spp. Микроорганизмы могут вызывать и поддерживать гнойный процесс как в монокультуре, так и в ассоциации.

56. Взятие исследуемого материала.

Взятие материала производится во время операции или перевязки. При наличии абсцессов, ран, фистул, гангрены или некроза тканей, кожу вокруг раневой поверхности обрабатывают антисептиком, некротические массы, детрит, гной удаляют стерильной сухой салфеткой и отбирают отделяемое из основания очага поражения используя стерильный контейнер или шприц объемом не менее 1 мл.

При отборе проб с помощью микробиологического тампона, используют два тампона (один используют для посева, второй – для бактериоскопии). Материал отбирают из глубины пораженного участка на границе со здоровыми тканями и помещают в стерильную пробирку или в транспортную среду. После обработки поверхности раны и высыхания антисептика с помощью шприца получают аспират из глубины раны; если имеется везикула- жидкость и клетки у основания дефекта.

Материал из закрытого абсцесса отбирают с помощью шприца с иглой.

Микробиологическому исследованию при ожогах, язвах, эрозиях, целлюлитах подлежит биопсийный материал. Объем ткани диаметром 3-4 мм – минимальное количество для культурального исследования.

Гнойное содержимое из раны после укусов получают шприцем после надреза, дренирования или поверхностной обработки инфицированной раны. При свежих укусах бактериологическое исследование не проводят, так как в этот период трудно выделить этиологически значимый микроорганизм.

Материал, полученный при оперативном вмешательстве (кости, биоптаты мягких тканей) помещают в стерильный контейнер с физраствором.

При наличии в ране дренажей для активной аспирации берут стерильным шприцем 1-2 мл отделяемого и помещают в стерильную пробирку.

Материал, отобранный с помощью микробиологического тампона, храниться при комнатной температуре и доставляется на исследование не позднее 2-х часов. Возможно хранение и транспортировка материала в транспортной среде до 24 часов при комнатной температуре. Материал, собранный в стерильный контейнер, должен быть доставлен в лабораторию в течение 2 часов, допускается хранение материала в течение 24 часов при комнатной температуре. Использование транспортных сред допустимо лишь в исключительных случаях.

57. Микроскопия исследуемого материала.

Материал, взятый тампоном, распределяют по стерильному предметному стеклу, окрашивают по Граму. При обнаружении микроорганизмов отмечают их морфологическую характеристику (грамположительные и грамотрицательные палочки, кокки и другое). В соответствии с результатами микроскопии могут быть внесены коррективы в ход бактериологического исследования.

58. Питательные среды: кровяной агар, шоколадный агар, среда Эндо (среда МакКонки ), ЖСА, 0,1% полужидкий сывороточный агар или ТСБ или тиогликолевую среду, при подозрении на анаэробную инфекцию - анаэробный агар.

Культивирование: на кровяном агаре при 35-37⁰ С, 5-10% СО₂, в течение 24-48 часов; на шоколадном агаре при 35-37⁰ С, 5-10% СО₂, в течение 24-48 часов; среда Эндо агар (среда Мак-Конки ) – при 35-37⁰ С в аэробных условиях, в течение 24 часов; ЖСА - при 35-37⁰ С в аэробных условиях, в течение 24-48 часов; 0,1% полужидкий сывороточный агар или ТСБ - при 35-37⁰ С в аэробных условиях в течение 48 часов; анаэробный агар - при 35-37⁰ С в анаэробных условиях в течение 7 дней. Чашки с биологическим материалом просматривают ежедневно. При наличии роста в жидких средах, производят высев на кровяной агар.

59. Схема посева биологического материала, собранного с помощью микробиологического тампона, представлена в приложении 7 к настоящей Инструкции. Поворачивая тампон вокруг оси равномерно распределить материал на 1/4 поверхности чашки Петри. Используя одну бактериологическую петлю, произвести рассев биологического материала на сектора II – IV. После посева на твердые питательные среды поместить тампон в 0,1% полужидкий сывороточный агар или ТСБ или тиогликолевую среду.

60.Биологический материал из стерильного контейнера или шприца равномерно распределяют микробиологической петлей на 1/4 поверхности чашки Петри и производят рассев биологического материала на сектора II – IV (используя одну бактериологическую петлю). Схема посева материала полуколичественным методом представлена в приложении 2 к настоящей Инструкции. После посева на твердые питательные среды, материал засевается в 0,1% полужидкий сывороточный агар, ТСБ, тиогликолевую среду.

61. Оценка результатов.

При появлении роста на плотных средах проводят учет колоний различной морфологии, учитывая их рост на секторах: рост колоний микроорганизмов на только I секторе - скудный рост; на I-II секторах - умеренный рост; на III- IV секторах – массивное количество.

Проводят видовую идентификацию микроорганизмов и определяют чувствительность к антимикробным препаратам. Отрицательный результат исследования выдается при отсутствии роста на всех питательных средах в течение 3-5 суток.

При отсутствии роста бактерий выдается отрицательный результат. При обнаружении бактерий указывается характер роста на первичных твердых питательных средах и средах обогащения и чувствительность к антимикробным препаратам. При выделении ассоциации микроорганизмов, в ответе перечисляют все виды микроорганизмов и отмечают, имеется ли преимущественный рост какого - либо из них. Выделение бактерий только на средах обогащения свидетельствует о высокой вероятности контаминации материала на любом из диагностических этапов (отбор, хранение, транспортировка и посев биологического образца на питательные среды).