Глава 25 методы идентификации дрожжевых и дрожжеподобных грибов

143. Грибы относятся к царству Fungi (Mycetes, Mycota). Широко распространены в природе. Различают гифальные и дрожжевые формы грибов. Дрожжевые грибы в основном имеют вид отдельных овальных клеток, могут образовывать псевдогифы и ложный мицелий. Наибольшее клиническое значение имеют дрожжевые грибы рода Candida, являющиеся частью нормальной микрофлоры кожи и слизистых. При нарушении факторов иммунитета грибы рода Candida способны вызывать кандидозы слизистых и кожи, а также системные заболевания.

144. Схема микробиологической диагностики дрожжевых и дрожжеподобных грибов представленна в приложении 26 к настоящей Инструкции.

145. Основные морфологические и биохимические характеристики для дрожжевых и дрожжеподобных грибов представленны в приложении 27 к настоящей Инструкции.

146. Основные морфологические и биохимические характеристики грибов рода Candida, наиболее часто встречающихся в клинической практике представленны в приложении 28 к настоящей Инструкции.

147. Микроскопия с добавлением индийских чернил. Нанести на предметное стекло каплю индийских чернил, внести микробиологической петлей исследуемую колонию и перемешать; накрыв покровным стеклом микроскопировать на небольшом увеличении. Способность культуры к образованию капсулы проявляется наличием светлого четко очерченного ореола вокруг дрожжеподобной клетки на основном темном (за счет индийских чернил) фоне. Диаметр капсулы может колебаться в пределах от 2 до 10 мкм или более. Некоторые виды криптококков могут терять способность к образованию капсул in vitro. Обнаружение капсул в препарате не гарантирует подтверждения принадлежности исследуемой культуры к роду Cryptococcus, так как некоторые виды дрожжеподобных грибов родов Rhodotorula и Torulopsis могут образовывать капсулы.

148. Проростковая проба - тест на способность образовывать герминативные (проростковые или зародышевые) трубки. Несколько однотипных по морфологическим признакам колоний дрожжевых грибов внести в пробирку с 0.5-1 мл сыворотки (кроличьей, бычьей, лошадиной, человеческой), термостатировать в течение 3 часов при 35±2°С. По истечении инкубации приготовить препарат (нанести каплю, смеси на предметное стекло и прикрыть покровным) и микроскопировать при небольшом увеличении. Обнаружение в препарате зародышевых трубок (предшественников истинных гиф) свидетельствует о принадлежности дрожжевого гриба к C. albicans. 10-15% культур C. albicans, выделяемых из клинического материала может не образовывать зародышевые трубки при проведении данной методики. C. tropicalis, также образует герминовые трубки с характерн6ым сужением в основании, то есть в том месте, где она формируется из материнской. Схема посева биологического материала представлена в приложении 29 к настоящей Инструкции.

149. Тест на уреазу. Несколько однотипных по морфологическим признакам колоний дрожжевых грибов вносят в пробирку с уреазным бульоном (агаром) Кристенсена и инкубируют при 25-30°С до 4 дней. Уреазопозитивные микроорганизмы изменяют рН в щелочную сторону (розово-красный цвет среды). Тест положителен для Cryptococcus spp., Rhodotorula spp. вариабаелен для Candida spp., Trichosporon spp.; негативен для Geotrichum spp., Blastoschizomyes capitatus.

150. Рост на среде с циклогексимидом (актодионом). Тестируемую культуру засевают на питательную среду с 0.1% циклогексимидом и инкубируют при 25°С в течение 48-72 часов. Тест отрицателен (отсутствует рост) для Cryptococcus spp., Saccharomyces spp., Torulopsis spp., Geotrichum spp. и вариабелен для Candida spp. и Trichosporon spp., Rhodotorula spp.

151. Тест на способность к формированию специфических репродуктивных структур или элементов мицелия. Тестируемую культуру засевают на кукурузный (рисовый) агар с твином 80 и накрывают покровным стеклом и инкубируют при 25°С в течение 24-48 часов. По истечении инкубации чашку исследуют под микроскопом (20-кратном увеличении), обращая внимание на образование псевдогиф, истинных гиф, артроконидий и бластоконидий.

Псевдогифы – цепочки почкующихся клеток, размером напоминающие истинные гифы, формирующие ответвления и имеющие более меньшие по размеру терминальные клетки; гифы – трубчатые или нитевидные структуры у грибов, способные формировать мицелий; бластоконидии (собственно дрожжевые клетки), образующиеся вдоль гифы или псевдогифы в результате почкования; артроконидии – образующиеся при фрагментации гифы прямоугольные с закругленными концами или эллипсовидные участки.

152. Тесты ферментации углеводов – определение способности дрожжевого гриба сбраживать определенные сахара. Тестируемую культуру засевают в пробирку содержащую 1% пептонный агар, углевод и индикатор. Инкубируют при 25°С до 10-14 дней, просматривая через 48 часов на наличие газообразования и изменения цвета в пробирке.