- •Микробиологические методы исследования биологического материала
- •Раздел I
- •Глава 1 область применения
- •Глава 2 общие правила забора биологического материала для микробиологического исследования
- •Раздел II методы исследования биологического материала
- •Глава 3
- •Методы исследования крови
- •Глава 4 методы исследования спинномозговой жидкости
- •Глава 5 методы исследование материалов из стерильных локусов
- •Глава 6 методы исследования желчи
- •Глава 7 методы исследования мочи
- •Глава 8 методы исследования отделяемого из верхних дыхательных путей
- •Глава 9 методы исследования отделяемого из нижних отделов дыхательных путей
- •Глава 10 методы исследования инфицированных ран
- •Глава 11 методы исследования отделяемого глаз
- •Глава 12 методы исследования отделяемого ушей
- •Глава 13 методы исследования отделяемого из урогенитального тракта
- •Глава 14 методы исследования материалов при аутопсии
- •Глава 15 методы исследования грудного молока
- •Раздел III методы идентификации микроорганизмов
- •Глава 16
- •Методы идентификации микроорганизмов рода staphylococcus
- •Глава 17 методы идентификации микроорганизмов рода streptococcus
- •Глава 18 методы идентификации микробов рода enterococcus
- •Глава 19 методы идентификации микроорганизмов рода neisseria и кокковых видов рода мoraxella
- •Глава 20
- •Глава 21 методы идентификации микроорганизмов рода corynebacterium
- •Глава 22 методы идентификации микроорганизмов семейства enterobacteriaceae
- •Глава 23 методы идентификации неферментирующих грамотрицательных бактерий (нгоб)
- •Глава 24 методы идентификации микроорганизмов рода listeria
- •Глава 25 методы идентификации дрожжевых и дрожжеподобных грибов
- •Раздел IV общие методы исследования
- •Глава 26
- •Микроскопические методы (окраска препаратов)
- •Глава 26 питательные среды
- •Глава 28 биохимические методы, создание условий культивирования
- •Оглавление
Глава 5 методы исследование материалов из стерильных локусов
22. Выделение микроорганизмов из биологического материала, отобранного из стерильного при нормальных условиях локуса, с высокой долей вероятности является причиной воспаления в исследуемом биотопе. Наиболее частыми возбудителями плевритов являются: S. aureus, S. pneumoniae, Streptococcus spp. группы A, энтеробактерии, НГОБ, бактероиды, актиномицеты, микобактерии. При перитонитах наиболее часто выделяют: энтеробактерии, НГОБ, энтерококки, S. aureus, S. pneumoniae, анаэробные бактерии (Bacteroides spp., Fusobacterium spp., Clostridium spp., Peptostreptococcus spp.) и другие микроорганизмы являющиеся нормальной микрофлорой желудочно-кишечного тракта. Артриты и остеомиелиты могут вызывать Staphilococcus spp., Streptococcus spp., энтеробактерии, НГОБ, микобактерии.
23. Плевральная, перитониальная, перикардиальная, суставная и другие жидкости.
23.1. Отбор материала проводится с соблюдением правил асептики в стерильный контейнер или шприц в количестве не менее 1 мл для выделения бактерий и не менее 10 мл для - грибов. Образец доставляется в теплом виде в лабораторию в течение 15 минут. Допускается хранение материала в течение 24 часов при комнатной температуре при использовании флаконов для гемокультур.
23.2. Для микроскопии готовят не менее двух мазков.
Для жидких непрозрачных биологических образцов, наносят каплю на обезжиренное предметное стекло вблизи от торца, перед каплей ставят под углом 45ºстекло и плавным движением равномерно распределяют материал по поверхности.
23.3. Для прозрачных проб производится центрифугирование при 3000 оборотах в течение 5 минут, затем из осадка на поверхность предметного стекла наносится 1-2 капли (не распределять по поверхности).
23.4. Высушенные мазки фиксируют в пламени спиртовки и окрашивают метиленовым синим и по Граму, а при подозрении на туберкулез - по Циль-Нильсену, при необходимости – другими методами. Результаты бактериоскопии немедленно сообщают лечащему врачу в виде предварительного ответа. В соответствии с результатами микроскопии могут быть внесены коррективы в ход бактериологического исследования.
24. Биоптаты внутренних органов и тканей.
24.1.Отбор материала проводится с соблюдением правил асептики. Кусочек ткани объемом не менее 3-4 мм отбирается в стерильный контейнер. Образец должен быть доставлен в лабораторию в течение 15 минут. Допускается хранение материала в течение 24 часов при 4-6 °С в стерильном физиологическом растворе объемом не менее 1 мл.
24.2. Для микроскопии готовят не менее двух мазков. Ткани предварительно размельчают на мелкие кусочки, добавляют около 5 мл стерильного физраствора и центрифугируют при 3000 оборотах в течение 5 минут, затем на поверхность предметного стекла наносится 1-2 капли супернатанта. Препараты высушивают при комнатной температуре, фиксируют над пламенем спиртовки и окрашивают метиленовым синим, по Граму, при подозрении на туберкулез - по Циль-Нильсену, при необходимости – другими методами. Результаты бактериоскопии немедленно сообщают лечащему врачу в виде предварительного ответа.
25. Посев материала из стерильных локусов.
Стерильной пипеткой со дна пробирки берут 0,1 мл материала, засевают шпателем на питательные среды: кровяной агар, шоколадный агар, агар среда Эндо (среда МакКонки), ЖСА, анаэробный агар, тиогликолиевая среда, среда Сабуро. При необходимости, в схему исследования могут быть включены дополнительные дифференциально-диагностические среды.
Оставшийся материал используют для посева на среды «обогащения»: 0,1% полужидкий сывороточный агар, ТСБ, среду Сабуро.
Возможно использование коммерческих флаконов с двухфазной средой с визуальной системой учета роста и флаконов с различными селективными свойствами для автоматизированной системы.
Культивирование посевов: кровяной агар - при 35-370 С, 5-10% СО2, в течение 24-48 часов; шоколадный агар - при 35-370 С, 5-10% СО2, в течение 24-48 часов; среда Эндо (среда МакКонки) – при 35-370 С в аэробных условиях, в течение 24 часов; ЖСА - при 35-370 С в аэробных условиях, в течение 24-48 часов; анаэробный агар (агар Шедлера и другие) - при 35-370 С в анаэробных условиях в течение 7 дней; тиогликолевая среда - при 35-370 С в анаэробных условиях в течение 7-10 дней; среда Сабуро - при 25-300 С в аэробных условиях в течение 72 часов; 0,1% полужидкий сывороточный агар или ТСБ - при 35-370 С в аэробных условиях в течение 48 часов.
При отсутствии роста колоний на твердых средах делают высев из сред «обогащения» на кровяной агар и шоколадный агар.
26. Оценка результатов.
При отсутствии роста бактерий выдается отрицательный результат. При обнаружении бактерий указывается характер роста на первичных питательных средах и средах обогащения. Выделение бактерий только на средах обогащения свидетельствует о высокой вероятности контаминации материала на любом из диагностических этапов (отбор, хранение, транспортировка и посев биологического образца на питательные среды).