Штаммы микроорганизмов

В исследованиях использовались коллекционные культуры видов Lactobacillus casei, Bifidobacterium longum, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Saccharomyces cerevisiae из коллекции ГНЦ РФ ИМБП РАН.

Исследование выживаемости культур лактобацилл и бифидобактерий в питательных средах, содержащих воду, обработанную ультрафиолетом

Тестируемые культуры изначально находились в лиофилизированном состоянии. Культуры регидрировались и 10-кратно раститровывались в питательных средах. Инкубировали 48 часов при 37⁰С. Выживаемость оценивали по количеству выросших колоний.

Исследование количества живых клеток в колониях лактобацилл и бифидобактерий, выросших в питательных средах, содержащих воду, обработанную ультрафиолетом

Колонии микроорганизмов, выросших в толще агара, изолировали, разводили в стерильном физрастворе и раститровывали в пробирках, содержащих стандартную ростовую среду. Среды с посевами инкубировали в термостате при 37⁰С в течении 24 часов, после чего производили учет выросших колоний.

Исследование микробного антагонизма в питательных средах, содержащих воду, обработанную ультрафиолетом

Культура тест-штамма лактобацилл выращивалась в течение 24 часов при 37⁰С на поверхности питательного агара в форме макроколонии. По окончании инкубации макроколония стерилизовалась парами хлороформа и заливалась полужидким агаром, содержащим культуры следующих видов:

• Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк);

• Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка);

• Escherichia coli (кишечная палочка).

Посевы инкубировались в течение 24 часов.

По окончании инкубации антагонистическая активность оценивалась по диаметру зоны задержки роста вокруг макроколонии тестируемого штамма лактобацилл.

Исследование частоты переноса генетического материала в жидкой питательной среде, приготовленной на основе воды, обработанной ультрафиолетом

Свежие агаризированные культуры штамма Е. Coli J 5-3 содержащие плазмиды pR1, несущие детерминанты резистентности к антибиотикам широкого спектра действия различных химических групп: ампициллину, карбенициллину, канамицину, и свежая агаризированная культура штамма Е. coli С-600, чувствительного ко всем антибиотикам, кроме налидиксовой кислоты, инкубировались в воде, обработанной ультрафиолетом, при температуре 37⁰С. Контроль: инкубация в обычных средах при температуре 37⁰С. После инкубации культуры пересевались на бульон и помещались на 24 часа в условия, соответствующие преинкубационным. По окончании инкубации приготовляли коньюгационные смеси: 1 мл культуры донора, содержащие 1х10⁹ GFU/мл, были смешаны с 1 мл культуры реципиента той же концентрации. Были приготовлены следующие коньюгационные системы:

• доноры и реципиент R-плазмид, выращенные в воде, обработанной ультрафиолетом, и осуществляющие конъюгацию в воде, обработанной ультрафиолетом;

• доноры и реципиент R-плазмид, в воде, обработанной ультрафиолетом, и осуществляющие конъюгацию в обычной среде;

• доноры и реципиент R-плазмид, выращенные в обычной среде и осуществляющие конъюгацию в воде, обработанной ультрафиолетом;

• доноры и реципиент R-плазмид, выращенные в обычной среде и осуществляющие конъюгацию в обычной среде (контроль).

После инкубации смеси были высеяны на среду, содержащую два антибактериальных агента (для селекции трансконъюгантов): один из антибиотиков, к которым устойчив штамм-донор, и налидиксовую кислоту в концентрации 100 мкг/мл. По окончании инкубации количество выросших на чашках колоний трансконъюгантов подсчитывалось по формуле

А

N=--------- (Lg)

В

N - частота передачи плазмид

А - количество колоний трансконъюгантов (CFU/ml)

В - количество живых клеток реципиента в конъюгационной смеси (CFU/ml)