Диагностика:

Активность г6Фд и глутатионредуктазы в гемолизатах определяли спектрофотометрически при температуре 37°С по Бойтлеру. Изменение плот-

ности поглощения регистрировали при 340 нм на анализаторе скорости реакции «Ультралаб 2086» фирмы lKВ (швеция) в течение 5 мин [11, 13].

Наследственный характер недостаточности г6Фд и глутатионредуктазы установлен путем анализа родословных и биохимических данных.

Исследования по определению активности г6Фд и глутатионредуктазы в образцах пуповинной крови и семейное обследование родственников — носителей мутантного гена позволяют произвести раннее выявление наслед-

ственных аномалий эритроцитарных ферментов в период новорожденности с целью дифференциальной диагностики наследственных гемолитических анемий.

Основой для диагностики Г-6-ФД-не- достаточности является определение активности фермента у пробандов и их родственников.

Дефицит Г-6-ФДГ устанавливается на основании количественного определения активности этого фермента в эритроцитах биохимическим или цитохимическим методами, а также с помощью скрининг-тестов: пробы с бриллиантовым крезиловым синим, теста тетразолиевого пятна и восстановительно-ингибирующего теста GSU (глютатиона).

 Обычно применяют 2 наиболее простых качественных метода: Бернштейна и Бойтлера. Количественный метод позволяет установить снижение активности фермента Г-6-ФД не только у гомозигот, но и у женщин гетерозигот.

Диагноз красных клеток недостатков фермент окончательно установлено путем измерения фермента в свежеприготовленного гемолизата . Проверочные тесты доступны для обнаружения некоторые из наиболее распространенных ферментных дефектов , в частности дефицитом G6PD . В некоторых случаях , диагноз лучше могут быть установлены путем демонстрации присутствия в ДНК пациента мутации известно, вызывает фермент дефицит . Анализ мутаций особенно полезно , когда пациент была перелита , так как ДНК получают из периферической крови лейкоцитов . Поскольку ДНК очень стабильна , тогда как большинство эритроцитов ферменты являются относительно нестабильными , ДНК-тестирование имеет то преимущество, что образцы могут быть отправлены на большие расстояния в специализированный лаборатории. Тем не менее, нормальная последовательность всей кодирующей области не исключает дефицит фермента , т.к. мутации вверх по течению от кодирующей области может повлиять на экспрессию генов и могут быть не обнаружены . Анализ ДНК легче выполнить, и наиболее полезен, когда конкретная мутация подозревают , как, например , А- мутации G6PD в черном пациента. Анализ ДНК является предпочтительным подход к пренатальной диагностики.

Микроскопическое исследование фильме крови имеет очень мало значения в диагностике красных клеток ферментных дефектов . Появление базофильной зернистостью в эритроцитах больных с пиримидинового 5'- нуклеотидазы дефицита является исключением (см. рис. 23-2 ) . Широко распространено заблуждение, что пируваткиназа -дефицитных эритроциты показать echinocytic изменения. Кроме того, тест autohemolysis не имеет никакой ценности в диагностике гемолитической анемии, вызванной красных клеток ферментных дефектов .