3. Определение резус принадлежности

Понятие резус-фактор — слишком общее (и устаревшее). Система резус антигенов многообразна. Современные методы исследования позволяют делать тесты индивидуально по резусу D, С, с, Е, е. Кроме этого, необходимо выявлять случаи со слабым D-антигеном или вариабильным D-антигеном. Вся эта информация тоже крайне важна при подборе донора в случае необходимости. Ход работы. Определение резус-принадлежности крови проводится с помощью стандартной универсальной сыворотки «антирезус» для всех групп крови. В пробирку вводят одну каплю (0,05 мл) исследуемой  крови   или  эритроцитов   и  добавляют   1—2  капли  стандартного универсального реагента «антирезус» той же группы крови. Перешивают    содержимое    путем    встряхивания    пробирки и помещают ее на водяную баню на 5 минут при температуре 370С, так как иммунная реакция с антигеном требует оптимальной температуры.   Как правило, агглютинация наступает в течение 3-5 мин.  По истечении этого времени  для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2—3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешивают  (но взбалтывая!), 2—3 раза переворачивая пробирку.  В некоторых случаях не представляется возможным определение резус-принадлежности реципиента, тогда пользуются индивидуальной пробой на резус-совместимость крови донора и реципиента. На чашку Петри наносят 2 капли сыворотки крови больного и маленькую каплю переливаемой крови, их смешивают и ставят на водяную баню (42-45 °С) на 10 мин. Если наступила агглютинация, то кровь донора несовместима с кровью реципиента и ее переливать нельзя. Трактовка результатов. Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом. При положительном резуль­тате агглютинация выражается в появлении хлопьев из склеенных эритроцитов на фоне просветленной жидкости. При отрицательном результате жидкость в пробирке остается равномерно окрашенной, без признаков агглю­тинации эритроцитов. Результат учитывают как истинный после проверки контрольных, образцов, т. е. при поло­жительном результате со стандартными резус-отрицательными эритроцитами, одногруппными с исследуемой кровью.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ  Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей  – носителей анти-D и анти-С гибридом. Цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с предназначены для определения резус принадлежности крови. Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом. Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение  трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек., но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности резус-антигена. При использовании цоликлонов термостатировать не требуется,  Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. Наличие агглютинации с Анти-D, Анти-С или Анти-с цоликлонами свидетельствует о том, что кровь резус-положительная, а отсутствие агглютинации – что кровь резус-отрицательная.