3. Задача.

При аналізі на хром по методу трьох еталонів на мікрофотометрі МФ -2. Вивірено почорніння (S) ліній гомологічної пари в спектрах еталонів та досліджувального зразка. Знайти відсотковий вміст хрому (Сr) по дослідним даним:

Еталон І ІІ ІІІ

С_ср 0,50 1,23 4,87

S 0,27 0,23 0,27

S_Cr 0,07 0,37 0,86

Аналізуючий зразок має S_Cr = 0,61 і S_Tl0,25.

Розв‘язування:

В методі трьох еталонів використовується залежність різниці ( S) поглинання ліній гомологічної пари від логарифму концентрації дослідного елементу при визначених умовах ця залежність близька до лінійної.

За показниками вимірної шкали мікрофотометра знаходимо

∆S (∆S₂-S_сп-S_Fe ), для трьох еталонів: ∆S₂=0,37-0,23=0,14; ∆S₃=0,86-0,27=0,59. Визначаємо за даними таблиці логарифми концентрацій:

lg С₁=-0,30; lg С₂=0,09; lg С₃=0,62, та будуємо калібровочний графік у координатах ∆S - lg С (рис. 1). Знаходимо ∆S для аналізую чого зразка:

∆S_х=0,61-0,25=0,36. С_сп=0,24%.

Еталонна відповідь

Варіант №7

1. Прилади та речовини для люмінесцентного аналізу.

Метод люмінесцентного аналізу в медицині став більш успішно розроблятися з розвитком вивчення вторинної люмінесценції. Остання представляє світіння, що виникає після зафарбування тканин спеціальними барвниками – фото люмінофорами. Органічні фотолюмінофори, що випромінюють під дією ультрафіолетових чи променів видимої частини спектра, часто називають флуоресцентними барвниками, чи флуорохромами.

Флуоресцеїн (диоксифлуоран) (C20H12O5) – органічна сполука, барвник трифенілметанової групи, червоний кристалічний порошок, розчиняється в спирті, ефірі та водних лугах. Назва "флуоресцеїн" дано сполуці тому, що в лужних розчинах він має сильну флуоресценцію (у концентраціях до 1 : 2000000).

Отримують флуоресцеїн при нагріванні фталевого ангідриду з резорцином. У лужному середовищі оптимальна концентрація його 0,8 г/л, колір флуоресценції жовто-зелений, відносна яскравість 0,26 нт.

Флуоресцеїн майже нерозчинний у воді, тому для введення цього препарату застосовують його натрієву сіль. Це один з найяскравіших флуорохромів.

Стрімкий розвиток молекулярної біології та біотехнології потребує швидких і зручних методів детекції нуклеїнових кислот (НК) та білків. На заміну радіоактивним міткам, що традиційно застосовуються з цією метою, приходять ефективніші, зручніші, дешевші та безпечніші спектрально-люмінесцентні методи детекції.

Апаратура для люмінесцентних досліджень повинна бути портативною, зручною, забезпечувати проведення діагностичних спостережень у будь-яких умовах, мати оптико-світлотехнічну систему для концентрації випромінювання на визначену ділянку. Основними вузлами апаратури для люмінесцентного аналізу є освітлювач із світлофільтрами, кювети, діафрагми і пристрій для вимірювання інтенсивності свічення. Освітлювачем для люмінесцентного аналізу, як правило, використовують ртутні лампи. Приймачем виступає фотоелемент або фото помножувач. Принципова схема лабораторного флуорометра ЄФ-ЗМ, призначеного для кількісного аналізу вітамінів та інших люмінесціюючих речовин, показана на рис. 4.

Рис. 4. Схема лабораторного флуорометра ЄФ-3М

1.кварцова лампа;

2.діафрагма;

3.заслінка;

4.фільтр;

5.кварцова оптика;

6.посудина з досліджуваним розчином;

7.кварцова оптика;

8.світлофільтри;

9.фотоелементи.

Світло від кварцової лампи 1, проходячи через діафрагму 2, світлофільтр 4 і кварцову оптику 5, потрапляє на посудину з досліджуваним розчином. Люмінесцентне свічення досліджуваного розчину проходить через кварцову оптику 7, вторинні світлофільтри 8, потрапляє на фотоелемент 9. Фотоелемент, перетворюючи світлову енергію в електричну, подає її на електронний підсилювач, в анодний ланцюг якого підключений мікроамперметр. Покази мікроамперметра прямо пропорційні концентрації люмінесціюючої речовини.

Спочатку результати люмінесцентних досліджень оцінювалися лише візуально і за допомогою фотографування.

У практичній роботі користалися візуальним лабораторним фотометром моделі ВФМ-57. Прилад дозволяє проводити вимірювання в області малих яскравостей, причому як білих, так і кольорових поверхонь. Межі виміру малих яскравостей приладу від 5-10 до -0,00003 нт. Верхня межа виміру високих яскравостей до 1 · 106 нт у "кольоровому" світлі і до 5 · 106 нт у "білому" світлі.

Принцип дії приладу заснований на візуальному порівнянні яскравості двох фотометричних полів, з яких одне - вимірюване, інше - поле порівняння. Для реєстрації яскравості кольорових поверхонь до приладу додається набір з дев'яти кольорових світлофільтрів. Основні вузли фотометра малих яскравостей- вимірювальна голівка, стійка, яка живить пристрій.

Для фотоелектричного фотометрування сконструювали апаратуру для графічного запису процесу фотоелектричного фотометрування. Змонтована на базі ФЗУ-54 з режимом живлення 1800 В, вона дозволяє проводити дослідження на рівні мікроциркуляції і записувати у виді графічних кривих картину світіння, що спостерігається. Прилад складається з фіброволоконного світловоду, світлочутливого елементу (ФЭУ-54), джерела живлення й одноканального элекфокардиографа ЭКСПЧТ-4 чи самописи Н-390.

Аналізатори типу «Флюорат» є прикладом доступної лабораторної апаратури, що реалізує можливість фотолюмінісцентних та хемілюмінесцентних вимірювань. Застосовані в них імпульсні плазмові джерела світла забезпечують високу чутливість, широкий спектральний діапазон та можливість кінетичних вимірювань в часових інтервалах до 105-106 секунд. Крім того, ці прилади дозволяють легко реєструвати люмінесценцію при низьких температурах (77 К).