Определение коли-титра и коли-индекса воды.

Коли-титр воды измеряется минимальным количеством воды (в мл), в котором обнаруживаются БГКП, коли – индексе — количеством БГКП, содержащихся в 1 л исследуемой воды. Коли-титр воды определяют бродильным методом и методом мембранных фильтров.

Бродильный метод. Воду открытых водоемов в объемах 100; 10; 1 и 0,1 мл засевают в глюкозопептонную среду, причем для посевов больших количеств воды (100 и 10 мл) используют концентрированную среду, содержащую десятикратные количества указанных веществ.

Состав глюкозопептонной среды: 1% пептоннаявода,0,5% глюкозы, 0,5% хлорида натрия, индикатор Андреде и поплавок.

Метод мембранных фильтров. Мембранный фильтр № 3 помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуум-насосу. Мембранные фильтры предварительно стерилизуют кипячением в дистиллированной воде. Воду из водопроводной сети Москвы и Ленинграда и воду артезианских скважин фильтруют в объеме 500 мл, воду других городов — в объеме 333 мл. Чистую воду открытого водоема фильтруют в объеме 100; 10; 1 и 0,1 мл, более загрязненную перед фильтрацией разводят стерильной водой. Затем фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашку Петри и после инкубации при 37°С в течение суток подсчитывают количество выросших колоний, типичных для БГКП. Из 2—3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест. Для этого фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-п-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. Две — три колонии, не изменившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% глюкозы. Посевы инкубируют в течение суток при 37°С. При наличии газообразования подсчитывают количество красных колоний на фильтре и определяют коли-индекс, из значения которого вычисляют коли-титр. Например, если коли-индекс равен 5, то коли-титр составит 200 (1000 : 5 = 200).

Состав сред. Среда КФ: 2% питательный агар с 1% дрожжевого экстракта, 2% мальтозы, 0,1% лактозы, 0,4% азида натрия, 0,06% карбоната натрия, индикатор бромкрезоловый красный. Полимиксиновая среда: питательный агар, 1% дрожжевого экстракта, 1% глюкозы, полимиксин М 200 ЕД/мл, индикатор бромтимоловый синий. Полимиксинотеллуритный агар: питательный агар, дрожжевой экстракт, 1% глюкозы, кристаллический фиолетовый 1:800 000, полимиксин М 200 ЕД/мл, 0,01% теллурита калия. Агар ТТХ: питательный агар, 1% дрожжевого экстракта, 1% глюкозы, кристаллический фиолетовый 1 : 800 000, 0,01% ТТХ.

При определении индекса Staph, faecalis пользуются статистическими таблицами, применяемыми при установлении коли-индекса. Кроме того, с этой целью используют метод мембранных фильтров.

Для обнаружения патогенных бактерий максимальные объемы воды пропускают через мембранные фильтры, которые затем помещают в жидкие элективные среды или на поверхность плотных дифференциально-диагностических сред.

Определение микробного числа почвы.

Почву берут на глубине 10—15 см стерильным ножом (из разных мест исследуемой территории в количестве 10 и большего числа проб) и помещают в стерильную банку. Из проб готовят навеску (30 г), которую вносят в колбу с водой (270 мл) и тщательно встряхивают. Из полученной

суспензии готовят разведения 10~3,10"4,10~5. Из двух последних разведений берут ОД мл и смешивают с 40 мл 0,7% расплавленного и остуженного до 45°С питательного агара, после чего выливают в чашки Петри с 2% питательным агаром. Посевы инкубируют при 37°С. Затем подсчитывают количество выросших колоний и определяют микробное число.