4. Методика определения группы крови с помощью цоликлонов

Различают цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ. Они представляют собой моноклональные антитела, которые продуцируются двумя мыши­ными гибридомами, принадлежат к иммуноглобулинам класса М и предна­значены для определения группы крови человека по системе AB0. Цоликлоны изготавливаются из асцитической жидкости мышей - носителей анти-А и анти-В гибридом, являются строго специфичными и, следователь­но, не могут вызывать неспецифическую агглютинацию эритроцитов. Тех­нология приготовления реагента исключает возможность попадания в него патогенных для человека вирусов.

Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти- А и анти-В антител. Цоликлоны выпускают в жидкой форме во флаконах по 5-10 мл. Цоликлоны анти-А подкрашены в красный цвет, анти-В - в си­ний, анти-АВ не подкрашивают, он остается бесцветным. Срок хранения цоликлонов при температуре +2-8°С составляет два года, вскрытый флакон может храниться при той же температуре в течение одного месяца в за­крытом виде.

Условия определения группы крови цоликлонами аналогичны опи­санным выше способам. На пластинку индивидуальными пипетками, под соответствующими надписями, наносят по одной большой капле (0,1 мл) цоликлонов анти-А, анти-В и анти-АВ. Рядом с каплями размещают по од­ной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл). Затем проводят смешивание капель отдельными палочками. Наблюдают за ходом реакции в течение трех минут, хотя агглютинация может появиться через три - шесть секунд, но возможна и поздняя реакция агглютинации, при наличии в эритроцитах слабых антигенов А или В.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных комочков, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрица­тельной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Интерпретация результатов реакции агглютинации крови с цоликлонами представлена в таблице 5.

Таблица 5. Определение группы крови с помощью цоликлонов

Результат реакции с цоликлонами				Исследуемая кровь принадлежит к группе
Анти-А	Анти-В	Анти-АВ
-	-	-	0(I)
+	-	+	A(II)
-	+	+	B(III)
+	+	+	AB(IV)

Оценка результатов исследования:

1. Отсутствие агглютинации во всех каплях свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах нет агглютиногенов А и В, и исследуемая кровь принадлежит к 0(I) группе.

2. Наличие агглютинации в каплях с анти-А и анти-АВ свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах имеется антиген А и кровь принадлежит к A(II) группе.

3. Наличие агглютинации в каплях с анти-В и анти-АВ свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах имеется антиген В и кровь принадлежит к В (III) группе.

4. Наличие агглютинации во всех каплях свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах имеются оба антигена (А и В) и кровь при­надлежит к АВ(IV) группе. В таких случаях необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроци­тов. Для этого производят смешивание маленькой капли исследуемой крови с каплей изотонического раствора хлористого натрия (в соот­ношении 1:10) и, отдельно, проверяется реакция с сывороткой четвер­той группы крови. При отсутствии агглютинации эритроцитов в фи­зиологическом растворе и в сыворотке четвертой группы можно ут­верждать, что исследуемая кровь принадлежит к АВ(IV) группе. Про­водить отдельно контроль с растворителем цоликлонов не требуется, поскольку в нем нет каких-либо добавок, способных вызвать агглю­тинацию эритроцитов.