Вопрос 84. С помощью каких химических реакций можно идентифицировать водорастворимые витамины?

Ответ. Витамин В₁ (тиамина) можно окислить до тиохрома. Немного тиамина (на кончике скальпеля) растворяют в 0,5 мл воды, приливают 5…6 капель 5 %-ного раствора красной кровяной соли и 1 мл 30 %-ного раствора гидроксида натрия, перемешивают. Затем прибавляют 1 мл изобутилового спирта и сильно взбалтывают в течение 1…2 минут. Наблюдают в верхнем спиртовом слое голубую флуоресценцию в УФ-лучах. Смесь в пробирке при перемешивании нагревают на водяной бане. Наблюдают появление желтой окраски.

Определение витамина В₂ (рибофлавин) также основано на использовании окислительно-восстановительной реакции. Рибофлавин растворяют в воде (наблюдают окрашивание и флуоресценцию раствора), к 0,5 мл раствора приливают 10 капель концентрированной соляной кислоты и вносят небольшой кусочек металлического цинка. Начинается выделение пузырьков водорода, жидкость постепенно розовеет, затем обесцвечивается. Реакция обусловлена восстановлением рибофлавина сначала в родофлавин красного цвета, а затем в бесцветный лейкофлавин. При взбалтывании обесцвеченного раствора лейкосоединение вновь окисляется кислородом воздуха в рибофлавин:

Качественная реакция на водорастворимое производное витамина К (викасол). К 1 мл 0,05%-ного спиртового раствора викасола приливают 2…3 капли 0,025%-ного раствора цистеина и 2…3 капли 10%-ного раствора гидроксида натрия. Появляется желтое окрашивание.

Качественная реакция на витамин РР. В колбу объемом 50 мл наливают 5 мл раствора никотиновой кислоты и нагревают на водяной бане до 70 С. Затем в колбу приливают 1 мл роданобромидного раствора, 2 мл спиртового раствора анилина, хорошо перемешивают и добавляют 17 мл спиртовой фосфатно-буферной смеси (рН=5,1). Постепенно раствор окрашивается в красный цвет. Раствор можно отфильтровать и использовать для количественного определения витамина РР.

Существует несколько качественных реакций на витамин С (аскорбиновую кислоту).

Витамин С может взаимодействовать с К₃[Fe(CN)₆]. К 5 мл 0,02%-ного раствора витамина С прибавляют по несколько капель 5%-ного раствора КOH и 10%-ного раствора К₃[Fe(CN)₆], перемешивают и добавляют 2…3 капли 10%-ного раствора соляной кислоты (для подкисления) и 1…2 капли 10%-ного раствора хлорида железа (III). Появляется сине-зеленое окрашивание и постепенно образуется синий осадок берлинской лазури – Fe₄ [Fe(CN)₆]₃. Параллельно проделывают контрольный опыт, используя вместо раствора витамина С дистиллированную воду. В этом случае берлинская лазурь не образуется.

Характерная окраска образуется и при витамина С с 2,6-дихлориндофенолом. К раствору аскорбиновой кислоты добавляют по каплям 0,02%-ный раствор натриевой соли 2,6- дихлориндофенола – происходит обесцвечивание синего раствора. Раствор аскорбиновой кислоты подкисляют 10%-ным раствором уксусной кислоты и добавляют по каплям 0,02%-ный раствор 2,6-дихлориндофенола. Появляется и исчезает розовое окрашивание.

Качественные реакции на вещества Р-витаминного действия довольно разнообразны.

Реакция с хлоридом железа (III). К 2 мл насыщенного водного раствора рутина прибавляют 3…4 капли 1%-ного раствора FeCl₃. Наблюдают появление зеленого окрашивания вследствие образования комплексного соединения рутина с железом. Координатные связи возникают между ионами железа и атомами кислорода фенольных гидроксильных групп молекулы рутина.

Реакция с серной кислотой. К 2 мл насыщенного водного раствора рутина осторожно по стенке пробирки приливают 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе раздела жидкостей появляется желтое кольцо. Концентрированная серная кислота, образует с флаваноидами оксониевые соли, растворы которых окрашены в желтый цвет.

Восстановление кверцетина магнием. К 1 мл насыщенного спиртового раствора кверцетина в пробирке добавляют немного (на кончике скальпеля) порошка металлического магния и несколько капель концентрированной соляной кислоты. Постепенно появляется вначале розовая, а затем малиновая окраска.

Гидролиз рутина. В пробирку насыпают около 0,5 рутина, добавляют 5 мл 0,5%-ного раствора соляной кислоты, осторожно кипятят на спиртовке 1…2 минуты, затем фильтруют. К полученному фильтрату приливают 3 мл 10%-ного раствора NaOH и 3 мл фелинговой жидкости, снова нагревают до кипения и наблюдают выпадение красного осадка оксида меди (II).

При кислотном гидролизе рутина вначале отщепляется молекула дисахарида – рутинозы, которая далее распадается на глюкозу и рамнозу, проявляющие восстанавливающие свойства.