3.Стерилизация. Дезинфекция. Асептика. Антисептика.

Стерилизация – это освобождение объектов внешней среды от всех микроорганизмов с помощью физических или химических факторов.

Различают следующие методы стерилизации:

1. Физические (термические, радиационные, механические).

а) Термические.

- прокаливание в пламени спиртовки (бактериологические петли, пинцеты);

- стерилизация кипячением (шприцы, мелкий хирургический инструментарий);

- стерилизация в автоклаве паром под давлением (перевязочный материал, белье, питательные среды).

Простые питательные среды: давление 1 Атм (120^о С) – 20 мин.

Питательные среды с простыми углеводами: давление 0,5 Атм (110^о С) – 15-20 мин.

- дробная стерилизация в автоклаве текущим паром (питательные среды с углеводами, белками, витаминами) – (80-100^о С) – 20-30 мин., 3 дня подряд для уничтожения спороносных форм;

- стерилизация сухим паром в сухожильном шкафу (стеклянная посуда) – (165-180^о С) – 60-150 мин.;

- тиндализация – дробная стерилизация (сыворотки, витамины) – (50-80^о С) – 60 мин., в течение 5-6 дней.

- пастеризация (вино, пиво, соки, молоко) – (60-90^о С) – 15 сек.-30 мин., в зависимости от вида продукта, с последующим быстрым охлаждением, для избежания прорастания спор.

б) Радиационные.

- лучевая стерилизация гамма-лучами (полимерные шприцы, чашки Петри, системы для переливания крови);

- частичная стерилизация УФЛ с помощью бактерицидных ламп (бак. лаборатории, боксы, перевязочные, операционные).

в) Механические.

- фильтрование через миллипоровые фильтры, задерживающие вегетативные формы бактерий и споры (антибиотики, лекарственные препараты, бактериофаги и др.).

2. Химические (растворами и газами) для обработки изделий из резины, титановых сплавов, эндоскопов др.

- стерилизация растворами (первомур, перекись водорода, глутаровый альдегид, гигасепт и др.);

- газовая стерилизация (пары формальдегида, спирта, окись этилена и др.).

Дезинфекция.

Дезинфекция – это уничтожение патогенных микроорганизмов в объектах внешней среды с использованием преимущественно химических веществ – дезинфектантов:

- галоидсодержащих (хлорная известь, хлорамин, аквасепт, йодонат и др.);

- кислородсодержащих (первомур, перамин, виркон, дезоксон и др.);

- гуанидов (демос, катасепт, лизоформин и др.);

- альдегидсодержащих (гигасепт, глутарал, альдесол и др.);

- спиртов.

Антисептика.

Антисептика – это уничтожение патогенных микроорганизмов на поверхности тела человека (хирурга, оперируемого) и в ране с использованием химических веществ – антисептиков. С этой целью используются: первомур, спирты, анилиновые красители, йод, фурациллин, риванол и др.

Асептика.

Асептика включает в себя совокупность прямых и косвенных методов воздействия на микроорганизмы, с целью создания безмикробной зоны или зоны с резко сниженной численностью микроорганизмов для проведения медицинских и исследовательских манипуляций и мероприятий.

Прямые методы - стерилизация, дезинфекция, антисептика.

Косвенные (разделительные) методы заключаются в использование герметичных перегородок в рабочих помещениях, специальной одежды и обуви, перчаток, системы воздушных бактериальных фильтров и др.

ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ К ЗАНЯТИЮ № 7.

1. Бактериофаги, понятие, строение, практическое применение.

2. Антибиотики, понятие, методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.

3. Стерилизация. Дезинфекция. Антисептика. Асептика. Методы стерилизации питательных сред и лабораторной посуды.

Практическое занятие №8 Дата______________

ТЕМА: Нормальная микрофлора тела человека в норме и патологии. Дисбактериозы и их лечение.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ.

1. Знакомство с нормальной микрофлорой тела человека и ее особенностями в разные возрастные периоды.

2. Разбор значения нормальной микрофлоры в жизни человека (полезное значение, причина заболеваний человека, дисбактериоз).

3. Изучение нормальной микрофлоры кожи рук и полости рта.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА.

1. Приготовить, окрасить по Граму и зарисовать мазок из зубного налета (делает каждый студент). Сделать надписи к зарисованным микроорганизмам.

2. Изучение посева микрофлоры кожи пальцев рук:

   1. Описание всех колоний;

А. размер___________________ А. размер___________________

Б. форма____________________ Б. форма____________________

В. поверхность_______________ В. поверхность_______________

Г. цвет _____________________ Г. цвет______________________

Д. прозрачность______________ Д. прозрачность______________

А. размер___________________ А. размер___________________

Б. форма____________________ Б. форма____________________

В. поверхность_______________ В. поверхность_______________

Г. цвет _____________________ Г. цвет ______________________

Д. прозрачность______________ Д. прозрачность_______________

2. Мазки из всех колоний, окраска по Граму, зарисовать (мазки делать на одном стекле).

3. Зарисовать демонстрационный препарат «Бифидобактерии» (окраска генцианвиолет).

4. Зарисовать демонстрационный препарат «Лактобактерии» (окраска генцианвиолет).

пОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ

Макроорганизм и его микрофлора являются единой экологической системой, находящейся в состоянии динамического равновесия. Под нормальной аутофлорой принято считать совокупность типичных для определенного биологического вида ассоциаций микроорганизмов, естественная жизнедеятельность которых происходит в тех органах и тканях макроорганизма, которые сообщаются с внешней средой. Состав аутофлоры может изменяться под действием таких факторов, как сезоны года, возраст, характер питания, эмоциональный стресс. Однако, способность здорового организма к саморегуляции обеспечивает восстановление относительного постоянства нормального микробиоценоза. Микробиоценоз – это динамическая микроэкологическая система, способствующая созданию однородных условий для нормальной жизнедеятельности аутофлоры и выполняющая или регулирующая многочисленные функции макроорганизма.

Критериями классификации нормальной микрофлоры являются количественная и качественная ее характеристики.

НОРМАЛЬНАЯ МИКРОФЛОРА КИШЕЧНИКА.

Нормальная микрофлора кишечника состоит примерно на 90% из анаэробных и на 10% – из аэробных микроорганизмов.

Всех представителей нормальной микрофлоры можно разделить на три группы:

1. Основная, или главная микрофлора составляет около 90-95% микробной массы – бифидобактерии, бактероиды и катенобактерии – облигатные анаэробы.

   1. Бифидобактерии – грамположительные, бесспоровые, полиморфные, крупные палочки с раздвоением на одном или двух концах.

   2. Бактероиды – грамотрицательные палочки, не образующие спор.

   3. Катенобактерии – неспорогенные грамположительные палочки.

2. Сопутствующая микрофлора составляет 5-10% микробной массы – лактобактерии, эшерихии, энтерококки – факультативные анаэробы.

   1. Лактобактерии – грамположительные палочки, одиночные или в виде коротких цепей, способны образовывать неразвитую сеть в результате бокового прикрепления, неподвижны, спор не образуют, нередко имеются включения зерен волютина.

   2. Эшерихии – грамотрицательные мелкие палочки.

   3. Энтерококки – стрептококки группы D – грамположительные кокки полуовальной формы, располагаются попарно, уплощенной стороной друг к другу

3. Остаточная микрофлора, около 1% – клостридии, стафилококки, протей, синегнойная палочка, клебсиеллы, энтеробактерии, цитробактер, дрожжеподобные грибы, пенициллы, аспергиллы.

ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА.

1. После рождения здорового ребенка в течение 12-16 часов меконий его стерилен.

2. К концу первых суток в меконии обнаруживаются кокки (по-видимому из родовых путей).

3. К концу вторых суток появляются бесспоровые палочки (бифидобактерии и катенобактерии).

4. К третьим суткам бифидобактерии преобладают.

5. К третьему месяцу появляются бактероиды, лактобактерии и эшерихии.

6. С введением прикорма присоединяются энтерококки, спорообразующие анаэробы, грамотрицательные аэробы.

7. К первому году жизни состав микрофлоры здорового ребенка практически идентичен микрофлоре здорового взрослого человека.

8. С возрастом, а особенно ближе к старости, количество бифидобактерий уменьшается.

ХАРАКТЕР ВЗАИМООТНОШЕНИЙ МЕЖДУ МИКРООРГАНИЗМАМИ В КИШЕЧНИКЕ.

1. Синергизм – между представителями нормальной микрофлоры (бифидобактерии и эшерихии).

2. Индифферентное – между различными анаэробами.

3. Антагонизм – между нормальной микрофлорой и патогенными микроорганизмами.

ЗНАЧЕНИЕ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ.

1. Нормальная микрофлора хорошо приспособлена к условиям существования в кишечнике и успешно конкурирует с прочими бактериями, поступающими извне. Это достигается за счет того, что нормальная микрофлора обладает большим набором ферментов, более активно размножается, быстрее конкурирует за питательные вещества и кислород.

2. Нормальная микрофлора (эшерихии, бифидобактерии и ацидофильные палочки) вырабатывает бактерицидные и бактериостатические вещества – колицины, губительно действующие на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы.

3. Нормальная микрофлора участвует в энтеральном синтезе витаминов. Эшерихии, а еще более – бифидобактерии, синтезируют тиамин, рибофлавин, никотиновую и пантотеновую кислоты, пиридоксин, биотин, фолиевую и аскорбиновую кислоты, цианокобаламин, витамин К. Считается, что нормально функционирующая микрофлора способна покрыть потребность организма почти во всех витаминах. Исключение составляет цианокобаламин, который не может быть использован макроорганизмом, но используется микроорганизмами для синтеза фолацина.

4. Нормальная микрофлора закисляет среду за счет выделения кислот, в частности – молочной кислоты, чем улучшает пищеварение и препятствует адаптации и развитию патогенных микроорганизмов.

5. Метаболизм желчных кислот определяет участие нормальной микрофлоры в обмене жиров и жирных кислот.

6. Инактивируя такие ферменты кишечного сока как энтерокиназа и щелочная фосфатаза, нормальная микрофлора регулирует уровень активности полостного пищеварения.

7. Расщепляя целлюлозу, пектин и другие сложные органические вещества до легко усваеваемых организмом, способствует более полному перевариванию пищи.

8. Принимает участие (прямое и опосредованное) во всасывании железа (антианемическое влияние), кальция и витамина Д (антирахитическое влияние).

9. Стимулирует перистальтику кишечника за счет ферментации белков до индола, скатола и фенола.

10. Участие в пигментном обмене (всасывание витамина Д, а также образование стеркобилиногена).

11. Канцеролитическое действие.

12. Стимулирует местный и общий иммунитет, являясь источником хронического «физиологического воспаления», что стимулирует лимфоидную ткань кишечника, которая по массе составляет 80-90% от числа всей лимфоидной ткани организма.

ДИСБАКТЕРИОЗ (ДИСБИОЗ).

Термином «дисбактериоз» определяют качественное и/или количественное изменение нормальной аутофлоры.

КЛАССИФИКАЦИЯ ДИСБАКТЕРИОЗА.

1. По этиологии:

   1. Дисбактериоз здоровых лиц:

      1. Сезонный дисбактериоз (весна, лето, осень – снижение числа бифидобактерий и эшерихий).

      2. Возрастной (снижение к старости бифидобактерий, бактероидов, снижение канцеролитической активности).

      3. Пищевой (однообразная пища приводит к резким изменениям микробного пейзажа, главным образом – снижению количества анаэробов и кишечной палочки. Пример: в период Ленинградской блокады у людей определялись только сарцины и дрожжи, у лиц на длительных зимовках – то же самое).

      4. Профессиональный (работа в замкнутых пространствах (космонавты, подводники, зимовщики полярных станций), студенты в период сессии, фармацевты, работники пищевой промышленности, выпускающие однообразную продукцию (кондитерские изделия) и др.).

   2. Дисбактериозы больных:

      1. Инфекционные и паразитарные болезни.

      2. Заболевания ЖКТ неинфекционной природы.

      3. Заболевания печени и желчевыводящих путей.

      4. Онкопатология.

      5. Постстрессорные дисбактериозы (травмы, ожоги, инфаркт и др.).

   3. Медикаментозные дисбактериозы:

      1. После антибактериальной терапии.

      2. Химиотерапия онкологических заболеваний.

      3. Лечение антидепрессантами.

   4. Пострадиационный (лучевой) дисбактериоз.

   5. Дисбактериоз смешанной этиологии.

2. По течению:

   1. Латентная (субклиническая).

   2. Местная (локальная).

   3. Распространенная (генерализованная).

3. По степени компенсации:

   1. Компенсированная.

   2. Субкомпенсированная.

   3. Декомпенсированная.

4. По фазам развития (по А.Ф. Билибину):

   1. Начальная фаза – характеризуется увеличением общего количества симбионтов в тех местах, где они обитают.

   2. Фаза нарушения взаимоотношений между представителями нормальной микрофлоры (снижение количества одних симбионтов и преобладающий рост других), а также появление таких представителей, которые в норме не выявляются или выявляются в незначительном количестве.

   3. Фаза изменения обычной локализации тех или иных представителей нормальной микрофлоры (появление эшерихий в полости рта, проксимальных отделах кишечника и др.), развитие бактериемии представителями нормальной микрофлоры (при травмах, ожогах и др.).

   4. Фаза появления токсигенных, вирулентных, патогенных свойств у представителей нормальной микрофлоры (гемолитическая кишечная палочка) или их ассоциаций, появление патогенных микроорганизмов (токсигенные стафилококки, шигеллы, сальмонеллы, холерный вибрион и др.).

лАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИСБАКТЕРИОЗА КИШЕЧНИКА

Исследуемый материал – кал не позже 2 часов после дефекации.

Метод исследования – бактериологический: количественный посев исследуемого материала на различные питательные среды с целью определения количества микроорганизмов наиболее значимых групп.

Этапы исследования

1. приготовление серийных разведений суспензии испражнений

2. посев на питательные среды из разведений:

Для выделения:

- бифибумбактерий - тиогликолевая среда

- кишечных палочек и других энтеробактерий – среда Эндо

- стафилококков – желточно-солевой агар

- протея – МПА по Шукевичу

- гемолитических микроорганизмов – кровяной агар

- грибов рода Кандида – среда Сабуро

ЛЕЧЕНИЕ ДИСБАКТЕРИОЗОВ.

Лечение дисбактериоза – одна из наиболее сложных проблем современной клинической микробиологии. Коррекция нарушений микробного пейзажа включает в себя эрадикацию патогенных микроорганизмов, диетотерапию, витаминотерапию и заместительную терапию. Важно то, что микроорганизмы, входящие в состав препаратов для заместительной терапии, не способны приживаться в организме хозяина и через 1-2 месяца после окончания их приема они полностью покидают свой биотоп. Основная их функция состоит в создании «зонта прикрытия», который позволяет представителям собственной нормальной микрофлоры колонизировать природный биотоп.

Основными препаратами для лечения дисбактериоза являются:

1. БАКТИСУБТИЛ – препарат содержит живые споры Bacillus subtilis IP 5832.

2. Бактиспорин – биомасса живых бацилл Bacillus subtilis штамма 3Н.

3. СПОРОБАКТЕРИН жидкий – биомасса живых бацилл Bacillus subtilis штамма 534.

4. биоспорин – биомасса живых бацилл Bacillus subtilis штамма 3 и Bacillus licheniformis штамма 31.

5. БИФИДУМБАКТЕРИН – содержит лиофильно высушенную живую культуру B.bifidum (штамм 1).

6. пробифор и бифидумбактерин форте – содержат лиофильно высушенную живую культуру B.bifidum (штамм 1), адсорбированную на частицах активированного угля.

7. бифилиз «Вигэл» – биомасса живых B.bifidum не менее 10⁷ м.т. и лизоцим не менее 10 мг на 1 дозу.

8. БИФИКОЛ – содержит лиофильно высушенные живые культуры B.bifidum (штамм 1) и E.coli (штамм М17) не менее, чем по 10⁷ м.т. на 1 дозу.

9. КОЛИБАКТЕРИН – содержит лиофильно высушенную живую культуру E.coli (штамм М17) не менее 6×10⁹ м.т. на 1 дозу.

10. ЛАКТОБАКТЕРИН – микробная масса живых лактобацилл.

11. АЦИЛАКТ сухой – лактобактерии штамма L.acidophilus.

12. АЦИПОЛ – смесь живых, антагонистически активных лактобактерий штамма L.acidophilus и полисахарид кефирных грибков.

13. ЛИНЕКС – содержит лиофильно высушенные живые культуры Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium infantis, Enterococcus faecium.

14. БАКТЕРИОФАГИ – различные, для специфической элиминации патогенных микроорганизмов и нормальных симбионтов с измененными свойствами (клебсиеллезный, интести-бактериофаг, пиобактериофаги, коли-протейный, стафилококковый, синегнойный, стрептококковый, протейный).

Домашнее задание к занятию №8

1. Виды микроорганизмов, постоянно обитающих в дыхательных путях, пищеварительной системе, конъюнктиве, мочеполовой системе, на коже.

2. Возрастные особенности микрофлоры тела человека.

3. Значение нормальной микрофлоры.

4. Дисбактеирозы. Классификация, диагностика и лечение.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 9 Дата___________________

ОТЧЕТ ПО ТЕМЕ: ФИЗИОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Определить уровень усвоения студентами пройденного материала.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1.Письменный ответ на прилагаемые вопросы.

Вопросы для письменного контроля:

1. Рост и размножение бактерий

2. Питание бактерий

3. Питательные среды, назначение, классификация

4. Методы выделения чистой культуры (метод механического разобщения и методы, основанные на биологических свойствах бактерий)

5. Понятие «Культуральные свойства бактерий»

6. Ферменты бактерий, классификация, назначение, практическое применение знаний о ферментах бактерий

7. Питательные среды для определения сахаро-, протео- и пептолитических ферментов, редуцирующих ферментов

8. Понятие – «Чистая культура бактерий», принципы идентификации чистых культур

9. Дыхание бактерий. Типы дыхания бактерий

10. Методы и питательные среды для культивирования анаэробов

11. Бактериофаг, понятие, свойства. Взаимодействие с микробной клеткой. Практическое использование бактериофагов. Методы определения фаголизабельных свойств микробных культур

12. Стерилизация и дезинфекция. Методы стерилизации. Стерилизация лабораторной посуды, питательных сред

13. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний, цели, задачи, этапы

14. Нормальная микрофлора тела человека. Дисбактериоз

15. Антибиотики. Классификация. Механизмы действия на бактериальную клетку. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

16. Генетика микроорганизмов. Изменчивость микроорганизмов. Рекомбинации. Генная инженерия. Методы генетической диагностики

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 10 Дата _________________

ТЕМА: ГУМОРАЛЬНЫЕ И КЛЕТОЧНЫЕ ФАКТОРЫ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА. ИНФЕКЦИОННЫЙ ПРОЦЕСС И ЕГО ХАРАКТЕРИСТИКА. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ИНФЕКЦИЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Факторы и механизмы врожденного иммунитета.

2. Методы определения гуморальных и клеточных факторов неспецифической резистентности организма.

3. Факторы, обуславливающие возникновение инфекционного процесса, его динамику, формы и периоды.

4. Значение биологического метода диагностики инфекционных заболеваний.

5. Понятие «экспериментальная инфекция».

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Определение активности лизоцима в слюне. Методика постановки: в 2 пробирки «О» и «К» внести по 0,5 мл культуры Micrococcus lysodeicticus. Затем в пробирку «О» внести 0,5 мл профильтрованной слюны, в «К» – 0,5 мл физ. раствора. Пробирки поставить в термостат на 40 мин. Через 40 мин. произвести учет опыта.

О К

Вывод: ________________________

2. Определение бактерицидного действия комплемента в сыворотке крови. Методика постановки: в 2 пробирки «О» и «К» внести по 1,0 мл свежей сыворотки крови морской свинки. Для разрушения комплемента сыворотки пробирка «К» прогревается при 56С в течение 30 мин. на водяной бане. После прогревания в пробирки «О» и «К» внести по 2 капли взвеси стафилококка. Поставить пробирки в термостат на 60 мин. После инкубации сделать посев из пробирок «О» и «К» на чашку Петри с МПА в сектора «О» и «К», соответственно. Учесть результаты опыта.

Вывод: ____________________________

3. Определение активности и интенсивности фагоцитоза частиц латекса по готовым мазкам, окрашенным по Романовскому-Гимзе.

Активность фагоцитоза = число фагоцитов / число подсчитанных лейкоцитов100 %

Активность фагоцитоза =

Интенсивность фагоцитоза = общее число объектов фагоцитоза в 100 лейкоцитах

Интенсивность фагоцитоза =

4. Определение бактерицидной функции кожи. Методика постановки: стерильным тампоном наносится взвесь кишечной палочки на ладонную поверхность предплечья. Непосредственно после этого к смазанной коже прикладывается I–я пластинка со средой Эндо, через 10 мин – II-я. Пластинки помещаются в чашке Петри в термостат на 24 ч. Учет результатов: подсчитывается число колоний, выросших на I–ой и II–ой пластинке со средой Эндо, а затем по формуле определяется индекс бактерицидности кожи в %.

БФК (%) = 100%  (1 – число колоний на II-ом стекле / число колоний на I-ом стекле)

БФК (%) =

5. Запись графа «Экспериментальная инфекция».

ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ

Основы противоинфекционного иммунитета

Иммунитет – это совокупность биологических механизмов, обеспечивающих защиту макроорганизма от генетически чужеродной информации:

• Свои мутационные клетки (10⁶), некоторые злокачественные клетки – иммунологический надзор за постоянством среды.

• Микроорганизмы – противоинфекционный иммунитет.

Классификация противоинфекционного иммунитета:

• Врожденный (видовой, генетический, естественный, неспецифический) – такая невосприимчивость, с которой организм рождается; генетически детерминирован; действуют механизмы, защищающие организм от различных микроорганизмов.

• Приобретенный (специфический) – такая невосприимчивость, которая формируется в процессе развития определенной особи; эффекторы вырабатываются лишь через определенное время после начала агрессии (например, через 7 дней).

Разновидности приобретенного иммунитета:

• Активный (постинфекционный, поствакцинальный).

• Пассивный (постсывороточный, трансплацинтарный – секреторный IgA в молоке матери).

• Гуморальный

• Клеточный

• Антимикробный (антибактериальный)

• Антитоксический

• Противовирусный

• Противогрибковый

• Нестерильный (сохраняется пока микроорганизм в макроорганизме – туберкулез, сифилис).

• Стерильный (сохраняется после выздоровления).

Инфекция

Инфекция (от «infectio» – загрязнение, заражение) – совокупность физиологических и патологических процессов, протекающих в организме при проникновении потенциально патогенных микроорганизмов и развивающихся в определенных условиях внешней среды.

Инфекция = микроорганизм + макроорганизм + внешняя среда

экспериментальная инфекция

В практической микробиологии большое значение имеет метод воспроизведения экспериментальной инфекции.

Данный метод заключается в заражении животных с целью:

• диагностики инфекционных заболеваний

• изучения вирулентности и токсигенности микробов

• воспроизведения и изучения деталей инфекционного процесса, недоступных при изучении болезни у человека

• испытания лечебного эффекта противоинфекционных химиотерапевтических и иммунологических препаратов

• выделения чистой культуры возбудителя

Существуют различные методы заражения экспериментальных животных:

1. энтеральные

2. парентеральные

   • на слизистую глаза

   • в дыхательные пути

   • накожно

   • внутрикожно

   • подкожно

   • внутримышечно

   • внутрибрюшинно

   • внутривенно

   • в мозг

Заражение может производиться:

• исследуемым патологическим материалом

• чистыми культурами

• пищевыми продуктами

• водой, взвесью почвы

Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний – это частный случай экспериментальной инфекции, осуществляется путем заражения лабораторных животных исследуемым материалом от больного человека с целью:

• оценки клинических симптомов и патоморфологических изменений в организме лабораторных животных (чума, сибирская язва и др.);

• выделения чистой культуры возбудителя (бруцеллез, туляремия и др.);

• постановки реакции нейтрализации токсинов (газовая гангрена, столбняк, ботулизм);

• проведения дифференциальной диагностики заболеваний (туберкулез, возвратные тифы).

ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ К ЗАНЯТИЮ № 10

1. Факторы, обусловливающие естественную (неспецифическую) устойчивость к инфекции:

• нормальная микрофлора организма человека;

• внешние барьеры – кожа и слизистые оболочки;

• внутренние барьеры – система лимфатических сосудов и лимфатических узлов;

• клеточные факторы – фагоцитирующие клетки, натуральные киллеры;

• гуморальные факторы – лизоцим, система комплемента, белки острой фазы, цитокины, белки теплолвого шока.

2. Методы изучения неспецифических механизмов иммунитета.

3. Инфекционный процесс и его характеристика.

4. Экспериментальная инфекция. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний:

• цели и задачи воспроизведения экспериментальной инфекции;

• методы заражения лабораторных животных с целью воспроизведения экспериментальной инфекции;

• цели и задачи воспроизведения биологического метода.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 11 Дата _________________

ТЕМА: АНТИГЕНЫ. АНТИТЕЛА. ПРИМЕНЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ В МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ: СЕРОИНДИКАЦИЯ, СЕРОИДЕНТИФИКАЦИЯ И СЕРОДИАГНОСТИКА. ДИАГНОСТИКУМЫ. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СЫВОРОТКИ.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Понятия антигены, антитела. Разновидности бактериальных антигенов.

2. Понятие «серологические реакции». Постановка РИФ, РПГА, РП, РА и их практическое использование с целью сероиндикации, сероидентификации и серодиагностики. Классификация и методы получения и применения диагностических сывороток и диагностикумов.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Постановка РА на стекле с целью идентификации неизвестной чистой культуры с агглютинирующими адсорбированными видовыми дизентерийными сыворотками. Учет реакции визуальный по выпадению хлопьев.

Вывод: ___________________________________________

2. Постановка РПГА на стекле с целью обнаружения чумного антигена в исследуемом материале с помощью противочумных суспензионных антител. Для положительного контроля смешивают контрольный чумной антиген и противочумные суспензионные антитела. Учет реакции визуальный по выпадению хлопьев.

О К

Вывод: ________________________

3. Постановка реакции Асколи (термокольцепреципитации) с целью обнаружения возбудителя сибирской язвы на шерсти животного. Техника постановки: в 2 пробирки «О» и «К» внести по 0,3 мл противосибиреязвенной преципитирующей сыворотки. Затем в пробирку «О» с помощью пипетки Пастера наслаивают 0,3 мл термоэкстракта из шерсти зараженного животного, в пробирку «К» - 0,3 мл термоэкстракта из шерсти здорового животного. Учет реакции визуальный по образованию кольца преципитации на границе двух сред.

О К

Вывод: __________________________

4. Просмотр и запись диагностических сывороток и диагностикумов по схеме: что содержит, как получен и для чего применяется данный препарат.

Диагностикумы:

Бактериальные:

Холерный диагностикум

О-брюшнотифозный диагностикум

Н-брюшнотифозный диагностикум

Паратифозный А (В) диагностикум

Единый бруцеллезный диагностикум

Эритроцитарные:

Эритроцитарный Vi-диагностикум

Эритроцитарный О-сальмонеллезный диагностикум

Диагностические сыворотки:

Люминесцирующие (флюоресцирующие, меченные ФИТЦ):

холерные антитела, меченные ФИТЦ

чумная люминесцирующая сыворотка

Суспензионные антитела:

противочумные суспензионные антитела

противосибиреязвенные суспензионные антитела

Преципитирующие:

сибиреязвенная преципитирующая сыворотка

Агглютинирующие (адсорбированные и неадсорбированные):

агглютинирующая адсорбированная сальмонеллезная О-сыворотка

агглютинирующая адсорбированная сальмонеллезная Н-сыворотка

агглютинирующая адсорбированная поливалентная сальмонеллезная сыворотка групп АВД (АВСДЕ)

Лизирующие:

гемолитическая сыворотка

ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ

Иммунодиагностика бактериальных инфекций

Используются серологические реакции – обнаружение неизвестного антигена или антитела по второму известному реагенту in vitro.

Цели серологических реакций.

1. Сероиндикация – обнаружение возбудителя в исследуемом материале, без выделения чистой культуры, с помощью диагностических сывороток. Применяется в экспресс-диагностике, наряду с несерологическими реакциями (ПЦР, ДНК-зондирование, РНТФ).

2. Сероидентификация – обнаружение (идентификация) возбудителя в чистой культуре с помощью диагностических сывороток. Применяется в III этапе бактериологического метода для идентификации чистой культуры по антигенным свойствам.

3. Серодиагностика – обнаружение неизвестных антител в сыворотке крови больного с помощью диагностикумов. Самостоятельный метод диагностики инфекциооных заболеваний – серологический.

Практическое применение серологических реакций.

1. Сероиндикация: РИФ, РПГА, РП (термокольцепреципитации), ИФА.

2. Сероидентификация: РА, РП (в геле).

3. Серодиагностика: РА, РПГА, РСК, нРИФ, ИФА.

Для обнаружения неизвестного антигена в исследуемом материале или в чистой культуре необходимы известные антитела – диагностические сыворотки.

Классификация диагностических сывороток:

1. По способу получения:

   • путем иммунизации лабораторных животных;

   • моноклональные антитела.

2. По назначению:

• люминесцирующие (флюоресцирующие) – РИФ в сероиндикации;

• суспензионные антитела – РПГА в сероиндикации;

• преципитирующие – РП (термокольцеприципитации) в сероиндикации;

• агглютинирующие (адсорбированные и неадсорбированные) – РА в сероидентификации;

• антитоксические – РП (в геле) в сероидентификации;

• лизирующие – (гемолитическая сыворотка – компонент индикаторной системы в РСК).

Получение диагностических сывороток.

Люминесцирующие сыворотки – получают путем иммунизации лабораторных животных корпускулярным антигеном, с последующим присоединением к иммуноглобулину люминесцентной (флюоресцентной) метки, например ФИТЦ (флюоресцеина изотиоционат).

Суспензионные антитела – получают путем иммунизации лабораторных животных корпускулярным антигеном, с последующей адсорбцией иммуноглобулинов Fc-фрагментом на эритроцитах I группы крови человека, предварительно обработанных танином или формалином для улучшения адсорбционных свойств последних.

Преципитирующие сыворотки – получают путем иммунизации лабораторных животных растворимым антигеном.

Антитоксические сыворотки – получают путем иммунизации лабораторных животных анатоксином (анатоксин – экзотоксин, лишенный токсигенных свойств, но сохранивший иммуногенные).

Агглютинирующие сыворотки – получают путем иммунизации лабораторных животных корпускулярным антигеном. Различают неадсорбированные (содержат полный набор антител) и адсорбированные (удалены ненужные антитела). Ненужные антитела удаляют адсорбцией по Кастелани: иммунизируют лабораторных животных корпускулярным антигеном, с последующим добавлением в полученную сыворотку микроорганизмов, имеющих в структуре антигены, сходные по структуре с теми, на которые наработались ненужные антитела. Т.о. ненужные антитела взаимодействуют с антигенами микроорганизмов и выпадают в осадок.

Лизирующие сыворотки – получают путем иммунизации лабораторных животных корпускулярным антигеном. Примером является гемолитическая сыворотка – содержит антитела к эритроцитам барана, получают путем иммунизации кроликов эритроцитами барана, является компонентом индикаторной системы РСК.

Для использования большинства иммунологических и серологических методов исследования необходимо иметь стандартные препараты антител. Основные требования к этим препаратам – специфичность, стабильность, достаточное содержание антител. Каждый природный антиген многокомпонентен, и к каждому его эпитопу формируются отдельные клоны антителобразующих клеток, что обуславливает большое разнообразие продуцируемых антител. Более того, к одной антигенной детерминанте может образоваться множество вариантов молекул антител. Т.о., антитела, получаемые от разных особей одного вида, иммунизированных одним антигенным препаратом, не полностью идентичны. Получить абсолютно однородные антитела можно используя клетки – антителпродуценты одного клона – потомков одной специализированной клетки. Решить задачу, используя специально отобранные лимфоциты человека или животного невозможно, т.к. срок жизни каждого клона ограничен и количество антител очень невелико. Положение коренным образом изменилось после того, как Г. Келер и Ц. Милштейн осуществили гибридизацию антителобразующих клеток, полученных от животного с культивируемыми в пробирке клетками злокачественной опухоли – В-клеточной плазмоцитомы. Полученные при этом гибридные клетки обладали свойствами обеих родительских клеток: способностью продуцировать антитела и способностью к неограниченному размножению вне организма. Т.о., были получены теоретически «бессмертные» клоны гибридных клеток (гибридомы), способные к образованию неограниченного количества однородных продуктов одного клона клеток – моноклональные антитела.

Для обнаружения неизвестных антител в сыворотке крови больного необходимы известные антигены – диагностикумы.

Классификация диагностикумов:

1. Бактериальные – во всех реакциях серодиагностики бактериальных инфекций, кроме РПГА.

2. Вирусные – во всех реакциях серодиагностики вирусных инфекций, кроме реакции нейтрализации вируса (РН).

3. Эритроцитарные – только в РПГА в серодиагностике бактериальных и вирусных инфекций.

Получение диагностикумов.

Бактериальный диагностикум – это стандартная взвесь убитых бактерий (искл. живой лептоспирозный диагностикум), реже – отдельные антигены микроорганизмов (О-, Н-, Vi-атигены брюшнотифозных бактерий, гонококковый антиген).

Эритроцитарный диагностикум – это антигены микроорганизмов, адсорбированные на эритроцитах I группы крови человека, предварительно обработанные танином или формалином, для улучшения адсорбционных свойств последних.

Реакции сероиндикации:

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – проводится с целью сероиндикации бактериальных инфекций. Компонентами реакции являются исследуемый материал и диагностическая сыворотка – люминесцирующая. Ставится на стекле. Учет в люминесцентном микроскопе.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА, РНГА) – проводится с целью сероиндикации бактериальных инфекций. Компонентами реакции являются исследуемый материал и диагностическая сыворотка – суспензионные антитела. Ставится на стекле. Учет визуальный по выпадению хлопьев.

Реакция преципитации (термокольцепреципитации) – проводится с целью сероиндикации бактериальных инфекций. Используется для диагностики сибирской язвы у животных – реакция Асколи. Компонентами реакции являются термоэкстракт из шерсти животного (исследуемый материал, подготовленный специальным образом – кипятится шерсть животного в физ. растворе, разрушаются термолабильные антигены микроорганизмов, но сохраняется термостабильный соматический О-антиген) и диагностическая сыворотка – преципитирующая. Ставится в узких пробирках. Учет визуальный по кольцу преципитации на границе двух сред.

Реакции сероидентификации:

Реакция агглютинации – проводится с целью сероидентификации чистой культуры в III этапе бактериологического метода (идентификация по антигенным свойствам). Компонентами реакции являются чистая культура (неидентифицированная) и диагностическая сыворотка – агглютинирующая. Ставится на стекле. Учет визуальный по выпадению хлопьев.

Рекция преципитации (в геле) – используется в диагностике дифтерии для определения токсигенности штамма. Компонентами реакции являются чистая культура (идентифицированная) и диагностическая сыворотка – антитоксическая. Ставится в чашках Петри с питательной средой. В центр чашки помещается полоска фильтровальной бумаги, пропитанная антитоксической противодифтерийной сывороткой, а по бокам от нее засеваются чистые культуры. Учет визуальный по образованию усов преципитации рядом с чистой культурой.

ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ К ЗАНЯТИЮ № 11

1. Понятие об антигенах и антителах. Антигены микроорганизмов.

2. Феномены взаимодействия между антигенами и антителами.

3. Понятие о сероиндикации, сероидентификации и серодиагностике инфекционных заболеваний.

4. Практическое применение РИФ, РПГА, РА, РП с целью сероиндикации и сероидентификации инфекционных заболеваний.

5. Диагностикумы. Классификация.

6. Диагностические сыворотки. Классификация.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 12 Дата _________________

ТЕМА: СЕРОДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ. ВАКЦИНЫ. ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ СЫВОРОТКИ И ИММУНОГЛОБУЛИНЫ.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Постановка РА, РПГА, РСК, нРИФ, ИФА с целью серодиагностики инфекционных заболеваний.

2. Биологические препараты для иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Демонстрация развернутой РА с целью определения титра АТ в сыворотке крови больного с брюшнотифозным, паратифозными А и В диагностикумами. Методика постановки: исследуемая сыворотка, взятая в рабочем разведении 1:25, разводится от 1:50 до 1:800 в 1,0 мл физ. раствора, затем вносится по 2 капли соответствующих диагностикумов; «К» сыворотки – 1,0 мл исследуемой сыворотки и 1,0 мл физ. раствора, «К» диагностикумов – 1,0 мл физ. раствора и 2 капли диагностикума. Учет реакции визуальный по выпадению хлопьев или помутнению через 1,5 – 2 ч инкубации в термостате при 37С. Результат реакции записать в виде таблицы.

Диагностикум	Сыворотка пациента					Контроль
	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800	Сыворотки	Диагностикума
О-брюшнотифозный
Н-брюшнотифозный
Паратифозный А
Паратифозный В

Вывод: ________________________________

2. Демонстрация определения тифозных Vi-АТ в сыворотке крови бактерионосителя брюшнотифозных бактерий по готовому ряду РПГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом. Методика постановки: исследуемая сыворотка разводится от 1:20 до 1:640 в 0,5 мл физ. раствора, затем вносится по 0,25 мл эритроцитарного Vi-диагностикума; «К» эритроцитарного диагностикума – 1,0 мл физ. раствора и 2 капли эритроцитарного Vi-диагностикума. Учет реакции визуальный (рыхлая взвесь с фистончатым краем «зонтик» - положительная; осадок «пуговка» или «диск» - отрицательная) через 1,5 – 2 ч инкубации в термостате при 37ºС. Результат реакции записать в виде таблицы.

Эритроцитарный диагностикум	Сыворотка пациента						Контроль эритроцитарного диагностикума
	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320	1:640
Эритроцитарный Vi-диагностикум

Вывод: ________________________

3. Демонстрация РСК для определения АТ в сыворотке больного хронической формой гонореи с помощью гонококкового антигена. Методика постановки: в пробирку внести сыворотку пациента, гонококковый антиген, комплемент в рабочей дозировке. Инкубировать в термостате при 37°С 1 ч. После инкубации в эту же пробирку добавить индикаторную систему, состоящую из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки. «К» сыворотки - сыворотка пациента, комплемент, индикаторная система; «К» гемолитической сыворотки - комплемент, индикаторная система. Учет реакции визуальный (выпадение эритроцитов в осадок - положительная; гемолиз эритроцитов «лаковая кровь» - отрицательная). Учесть реакцию.

О К_ГС К_С

Вывод: ________________________________

4. Просмотр и запись вакцин и лечебно-профилактических сывороток по схеме: что содержит, как получен и для чего применяется данный препарат.

Вакцины:

Живые:

вакцина чумная ЕВ живая

вакцина сибиреязвенная СТИ живая

вакцина бруцеллезная живая

вакцина туляремийная Гайского-Эльберта живая

вакцина туберкулезная БЦЖ живая

вакцина туберкулезная БЦЖ-м живая

вакцина гриппозная аллантоисная живая

вакцина коревая культуральная живая

вакцина краснушная живая

вакцина кори, краснухи и паротита живая

вакцина полиомиелитная культуральная живая

вакцина паротитная культуральная живая

Корпускулярные (уибитые, инактивированные):

вакцина лептоспирозная инактивированная

вакцина холерная инактивированная корпускулярная

вакцина брюшнотифозная спиртовая

вакцина брюшнотифозная, обогащенная ВИ-антигеном

вакцина антирабическая культуральная инактивированная

вакцина гепатита А культуральная инактивированная

вакцина герпетическая инактивированная

вакцина гриппозная инактивированная

вакцина клещевого энцефалита культуральная инактивированная

вакцина полиомиелитная культуральная инактивированная

Химические и анатоксины:

секста-анатоксин

тетра-анатоксин

три-анатоксин

вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная (АКДС-вакцина, АКДС-м-вакцина)

анатоксин дифтерийно-столбнячный адсорбированный (АДС-анатоксин, АДС-м-анатоксин)

вакцина тифозно-паратифозно-столбнячная химическая сорбированная (ТАВte-вакцина)

анатоксин столбнячный адсорбированный

анатоксин дифтерийный адсорбированный

вакцина брюшнотифозная ВИ-полисахаридная

вакцина холерная бивалентная химическая (холероген-анатоксин + О-антиген)

вакцина менингококковая группы А полисахаридная

вакцина менингококковая групп А и С полисахаридная

вакцина гриппозная полимер-субъединичная тривалентная

Генноинженерные:

вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая

Лечебные вакцины:

лечебная бруцеллезная вакцина

гоновакцина

Гетерологичные сыворотки и иммуноглобулины:

иммуноглобулин противосибиреязвенный лошадиный

иммуноглобулин противолептоспирозный воловий

сыворотки противоботулинические типов А, В и Е моновалентные антитоксические

сыворотка противостолбнячная антитоксическая

сыворотка противогангренозная поливалентная антитоксическая

иммуноглобулин против клещевого энцефалита лошадиный

иммуноглобулин антирабический лошадиный

сыворотка противодифтерийная лошадиная

Гомологичные иммуноглобулины:

иммуноглобулин донорский нормальный

иммуноглобулин противостолбнячный человека антитоксический

иммуноглобулин против клещевого энцефалита

иммуноглобулин антирабический

иммуноглобулин человека против гепатита В

иммуноглобулин противококлюшный антитоксический

ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ

Серодиагностика – это определение неизвестных специфических антител в сыворотке крови больного с помощью заведомо известных антигенов (диагностикумов).

Реакции серодиагностики:

Для серодиагностики применяют РА, РПГА, РСК, нРИФ, ИФА.

Реакция связывания комплемента (РСК). Предложена Ж.Бордэ и О.Жангу в 1901 году. Используется для серодиагностики бактериальных инфекций. Для постановки РСК требуется предварительная подготовка ингредиентов реакции, особенно комплемента, в качестве которого используют сыворотку крови морской свинки с установкой рабочей дозы. В последние десятилетия выпускается сухой оттитрованный комплемент, что значительно облегчило постановку реакции. Исследуемые сыворотки крови и антигены обязательно контролируются на антикомплементарность. Постановку основного опыта производят в пробирке путем внесения в нее определенного объема сыворотки крови, антигена (диагностикума) и рабочей дозы комплемента. Смесь инкубируют в термостате при 37С в течение часа. Регистрацию результатов реакции проводят по гемолизу сенсибилизированных эритроцитов барана. Их приготавливают при смешивании гемолитической сыворотки кролика с эритроцитами барана. При внесении комплемента в эту смесь происходит реакция гемолиза. Т.о., в тех случаях, когда комплемент не связывается с исследуемой системой антиген – антитело, т.е. остается свободным, наблюдается полный гемолиз бараньих эритроцитов, который свидетельствует об отрицательной реакции. Отсутствие гемолиза указывает на связывание комплемента с системой антиген – антитело, т.е. на положительную реакцию, которая обозначается крестами. Интенсивность задержки гемолиза оценивается по четырех крестной системе, при этом полное отсутствие гемолиза обозначается ++++.

Реакция иммунного лизиса. В основе реакции лежит способность специфических антител образовывать иммунные комплексы с клетками, в том числе с эритроцитами, бактериями, что приводит к активации системы комплемента по классическому пути и лизису клеток. Из реакций иммунного лизиса чаще других применяется реакция гемолиза и редко – реакция бактериолиза.

Реакция гемолиза. Под влиянием реакции с антителами в присутствии комплемента мутная взвесь эритроцитов превращается в ярко-красную прозрачную жидкость – «лаковую кровь» вследствие выхода гемоглобина. При постановке диагностической реакции связывания комплемента реакция гемолиза используется как индикаторная: для тестирования присутствия или отсутствия свободного комплемента.

Реакция агглютинации (РА). С целью серодиагностики компонентами РА является исследуемая сыворотка и бактериальный диагностикум. Повысить специфичность и чувствительность реакции можно путем разведения (титрования) исследуемой сыворотки. Для большинства инфекций существует диагностический титр, по которому судят о текущей инфекции. При некоторых заболеваниях необходимо проводить РА с парными сыворотками, т.е. двукратно через временной интервал, для того чтобы увидеть нарастание титра антител в динамике. Ставится в пробирках, в развернутом виде, с учетом диагностического титра. Учет реакции визуальный по выпадению хлопьев.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА, РНГА). С целью серодиагностики компонентами реакции являются исследуемая сыворотка и эритроцитарный диагностикум. Ставится в планшетах в развернутом виде, с учетом диагностического титра. Учет реакции визуальный («зонтики» - положительная реакция, «пуговки (диски)» - отрицательная реакция).

Существуют реакции, основанные на выявлении взаимодействия антигена с антителом с образованием иммунного комплекса по метке одного из участников реакции (РИФ, ИФА).

С целью серодиагностики применяют непрямую реакцию иммунофлюоресценции (нРИФ). Компонентами реакции являются сыворотка больного, диагностикум и меченая флюорохромом (люминофором) антиглобулиновая сыворотка. Учет реакции производится с помощью люминесцентного микроскопа.

Аналогично нРИФ, проводится иммуноферментный анализ (ИФА). Компонентами реакции являются сыворотка больного, диагноситкум и антиглобулиновая сыворотка меченая ферментом. Учет реакции визуальный по изменению окраски соответствующего субстрата.

Иммунопрофилактика И иммунотерапия инфекционных заболеваний

Одним из важнейших направлений прикладной микробиологии является создание эффективных препаратов для иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний.

Иммунопрофилактика – применение иммунологических препаратов для создания искусственного иммунитета (активного или пассивного).

Иммунотерапия – это применение иммунологических препаратов для лечения больных.

Среди препаратов для иммунопрофилактики и иммунотерапии различают:

• Вакцины – содержат антигены, индуцируют в организме развитие гуморального и клеточного иммунного ответа, то есть формируют активный иммунитет, который, как правило, развивается через несколько недель и сохраняется достаточно долго (от 6 месяцев до 10 лет и более лет).

• Гипериммунные сыворотки и иммуноглобулины – содержат готовые антитела, при их введении возникает пассивный иммунитет, который возникает немедленно после введения препарата, но сохраняется недолго (период полувыведения гетерологичных антител составляет около 2 недель, а гомологичных – около 4 недель).

Вакцинотерапия – введение лечебных вакцин – антигенных препаратов для перевода хронической формы инфекции в обострение при хронических вялотекущих инфекциях (гонорея, бруцеллез).

Вакцинопрофилактика – введение профилактических вакцин – антигенных препаратов для создания искусственного активного приобретенного иммунитета. Обладают высокой иммуногенностью (обеспечивают надежную противоинфекционную защиту), ареактивностью (не дают выраженных побочных реакций), безвредностью для макроорганизма и минимальным сенсибилизирующим действием.

По назначению вакцины делятся на:

• Профилактические

• Лечебные

По характеру микроорганизмов, из которых они созданы:

• Бактериальные

• Вирусные

• Риккетсиозные

По способу приготовления:

• Живые

• Убитые

• Химические

• Анатоксины

• Искусственные

• Генноинженерные

• Антиидиотипические (в стадии разработки)

• Липосомальные (в стадии разработки)

Серопрофилактика и серотерапия – введение лечебно-профилактических сывороток и иммуноглобулинов – биологических препаратов, содержащих антитела, для лечения и экстренной профилактики путем создания пассивного антитоксического, антибактериального или антивирусного иммунитета.

ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ К ЗАНЯТИЮ №12

1. Серодиагностика. Понятие.

2. Практическое применение серологических реакций РА, РПГА, РСК, нРИФ, ИФА с целью серодиагностики инфекционных заболеваний.

3. Понятие об иммунопрофилактике и иммунотерапии инфекционных заболеваний.

4. Вакцины. Классификация. Методы получения. Способы применения.

5. Лечебно-профилактические сыворотки и иммуноглобулины. Виды. Методы получения. Способы применения.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 13 Дата___________________

ОТЧЕТ ПО ТЕМЕ: ИНФЕКЦИЯ. ФАКТОРЫ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА. АНТИГЕНЫ. АНТИТЕЛА. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ. СЕРОИНДИКАЦИЯ. СЕРОИДЕНТИФИКАЦИЯ. СЕРОДИАГНОСТИКА. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СЫВОРОТКИ. ДИАГНОСТИКУМЫ. ВАКЦИНЫ. ЛЕЧЕБНЫЕ СЫВОРОТКИ

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Определить уровень усвоения студентами пройденного материала.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1.Письменный ответ на прилагаемые вопросы.

Вопросы для письменного контроля:

1. Факторы, обеспечивающие естественную (неспецифическую) устойчивость к инфекциям:

а) воспаление и фагоцитоз;

б) защитное действие неповрежденной кожи и слизистых оболочек;

в) барьерная функция лимфоидной ткани;

г) клеточная ареактивность;

д) бактерицидные вещества в сыворотке крови и жидкостях организма: лизоцим, комплемент, пропердин, лейкины, бета-лизины, интерферон

2. Методы изучения неспецифических механизмов иммунитета

3. Инфекционный процесс и его характеристика

4. Экспериментальная инфекция

а) задачи воспроизведения экспериментальной инфекции;

б) методы заражения для воспроизведения экспериментальной инфекции

5. Понятие об антигенах и антителах. Антигены микроорганизмов.

6. Феномены взаимодействия между антигенами и антителами (РИФ, РПГА, РП)

7. Понятие о сероиндикации и сероидентификации

8. Диагностические сыворотки. Классификация

9. Типы диагностикумов

10. Серодиагностика. Понятие

11. Практическое применение серологических реакций (РСК, РА, РПГА)

12. Понятие об иммунопрофилактике и иммунотерапии инфекционных заболеваний

13. Вакцины. Классификация. Методы получения различных вакцин. Способы применения.

14. Лечебные сыворотки и иммуноглобулины. Виды лечебных сывороток и иммуноглобулинов. Методы получения. Способы применения

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №14. ДАТА_________________

ТЕМА: ХОЛЕРА.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Формирование представления по ряду теоретических вопросов, связанных с этиологией, патогенезом, эпидемиологией и принципами лабораторной диагностики холеры.

2. Овладение некоторыми практическими навыками по лабораторной диагностике холеры.

3. Формирование основ клинического мышления путем анализа и оценки лабораторных данных при решении ситуационных проблемных задач.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Посев взвеси фекалий на 1% пептонную воду и на чашки со щелочным агаром (работа на 2-х студентов).

2. Изучение колоний выросших на щелочном агаре:

а) мазок, окраска по Граму (готовые мазки);

б) определение вида вибриона из колонии со щелочного агара по реакции агглютинации на стекле с холерными О1 – и ОН – сыворотками (работа на 2-х студентов).

ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Краткая характеристика. Основные клинические симптомы.

Холера (определение ВОЗ) – острое инфекционное заболевание человека с фекально-оральным механизмом заражения, вызываемое холерным вибрионом, для которого характерны резко выраженные гастроэнтерит, интоксикация и обезвоживание организма вследствие потери жидкости и солей с водянистыми испражнениями и рвотными массами. Относится к карантинным особо опасным инфекциям.

2. Лабораторная диагностика.

Исследуемый материал:

Фекалии, рвотные массы, желчь, секционный материал (отрезки тонкого кишечника и желчный пузырь), предметы, загрязненные испражнениями (постельное и нательное белье и др.), вода. Материал для исследования должен быть доставлен не позже чем через 2ч. после его взятия. В случае удлинения сроков доставки используют транспортные среды. Наиболее удобной и достаточно эффективной является 1%-ная пептонная вода (рН 8,4 ± 0,1).

1. Экспресс – диагностика:

   1. РНТФ с индикаторными холерными бактериофагами IV типа и Eltor

   2. РИФ с люминесцирующей холерной сывороткой

   3. РПГА с суспензионными холерными АТ

   4. Реакция иммобилизации холерных вибрионов с О1 холерной сывороткой, учет – темно-польная микроскопия

   5. ИФА

   6. ПЦР

2. Микроскопический метод – окраска по Граму, серебрение по Морозову (выявление жгутиков).

3. Бактериологический метод – основной.

При бактериологическом исследовании на холеру используют различные питательные среды: 1% щелочная пептонная вода, щелочной агар, элективные дифференциально - диагностические среды (ТЦБС, Монсура) и набор сред для идентификации.

На всех этапах исследования посевы выращивают на 1% щелочной пептонной воде 6 – 8 ч, на щелочном агаре не менее 14 – 16 ч, на дифференциально - диагностических средах 18 – 24 ч.

I этап. Материал засевают на 1% щелочную пептонную воду, щелочной агар, элективные дифференциально - диагностические среды.

II этап (через 6 – 8 ч после начала исследования). Изучают рост на 1-й пептонной воде:

1. мазок с окраской по Граму

2. определение подвижности в препарате «висячая капля» или «раздавленная капля» в темном поле

3. ориентировочная реакция агглютинации на стекле с О1 агглютинирующей холерной сывороткой (при отрицательном результате – с сывороткой О139)

4. реакция иммобилизации холерных вибрионов

5. нитрозо - индоловая реакция с пептонной водой, на которой выросла пленка (1 мл пептонной воды + несколько капель серной кислоты, при положительном результате – розовое окрашивание)

и производят высевы на щелочной агар и 2-ю пептонную воду.

III этап (через 12 – 14 ч после начала исследования). Изучают рост на 2-й пептонной воде (и производят высевы на щелочной агар) и щелочном агаре. Из подозрительных колоний выделяют чистую культуру на скошенном щелочном агаре.

IV этап (через 18 – 24 ч после начала исследования).

1. Дифференциация холерного и холероподобных вибрионов.

2. Дифференциация биоваров классического и эль – тор

3. Определение серовара холерного вибриона: реакция агглютинации на стекле с сыворотками Инаба и Огава.

4. Биологический метод – не используется.

5. Серологический метод – дополнительный. Может быть использован для выявления вибрионосителей.

1. Реакция агглютинации с холерными диагностикумами

2. Реакция пассивной гемагглютинации с эритроцитарными холерными диагностикумами

6. Метод кожно – аллергических проб - не используется.

3. Специфическая профилактика:

1. холерные фаги

2. вакцина холерная бивалентная химическая таблетированная представляет собой смесь холерогена-анатоксина, полученного из инактивированных формалином бульонной культуры холерного вибриона 569В или 569 (КМ – 76) серовара Инаба, и О-антигенов, полученных из бульонных культур холерного вибриона 569В или 569 (КМ – 76) серовара Инаба и М-41 Огава. Одна прививочная доза состоит из трех таблеток. Доза для вакцинации взрослого населения составляет 3 таблетки, для подростков 11 – 17 лет 2 таблетки, для детей 2 – 10 лет – 1 таблетка. Таблетки принимают внутрь за 1 ч до еды, не разжевывая, запивая кипяченой водой. Это обеспечивает антибактериальный, антитоксический и местный кишечный иммунитет длительностью до 6 месяцев. Ревакцинация через 6 – 7 месяцев.

Планируется регистрация в РФ: вакцина Дюкорал фирмы Авентис Пастер, Франция (оральная убитая рекомбинантная В-субъединичная/цельноклеточная холерная вакцина)

Специфическое лечение - отсутствует.

Домашнее задание к занятию № 14

Тема: Холерный вибрион. Микробиологическая диагностика холеры.

1. Холерный вибрион. Морфологические, культуральные, биохимические особенности. Антигенное строение. Биовары. Значение вибриона Эль-тор в эпидемиологии холеры. Отличие холерных вибрионов от холероподобных.

2. Источник инфекции, пути передачи. Факторы патогенности холерного вибриона. Патогенез холеры.

3. Правила забора материала и его транспортировка при подозрении на холеру.

4. Метод лабораторной диагностики холеры. Выделение холерного вибриона и его идентификация. Экспресс-диагностика холеры.

5. Специфическая профилактика холеры.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 15 ДАТА_________________

ТЕМА: ДИЗЕНТЕРИЯ. ШИГЕЛЛЕЗ.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Формирование представления по ряду теоретических вопросов, связанных с этиологией, патогенезом, эпидемиологией и лабораторной диагностикой дизентерии и шигеллезов.

2. Овладение некоторыми практическими навыками по лабораторной диагностике дизентерии.

3. Формирование основ клинического мышления путем анализа и оценки лабораторных данных при решении ситуационных проблемных задач.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Посев взвеси фекалий на среду Плоскирева.

1. Изучение лактозонегативных колоний на среде Плоскирева:

а) мазок, окраска по Граму;

б) пересев лактозонегативных колоний на среду Ресселя по скошенной части и уколом в столбик (работа на 2-х студентов).

2. Изучение посевов на среде Ресселя:

а) учет изменений на среде Ресселя – при правильном посеве изменение цвета столбика (ферментация глюкозы) и отсутствие изменений скошенной части (отсутствие ферментации лактозы);

б) учет демонстрационных «пестрых» рядов;

индол

сероводород

лактоза глюкоза мальтоза маннит сахароза МПБ

Вывод:_______________________________

в) пластинчатая (на стекле) реакция агглютинации со смесью видовых агглютинирующих адсорбированных шигеллезных сывороток;

г) пластинчатая (на стекле) реакция агглютинации с агглютинирующими адсорбированными шигеллезными сыворотками для определения вида и серовара выделенной культуры.

Вывод: ___________________________________________________

ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Краткая характеристика. Основные клинические симптомы.

Дизентерия (определение ВОЗ) – острое инфекционное заболевание человека с поражением толстого кишечника, проявляющееся частой болезненной дефекацией, жидким стулом с кровью и явлениями общей интоксикации. В ряде случаев шигеллы вызывают пищевые токсикоинфекции – шигеллезы, протекающие с явлениями гастроэнтерита и предрасположенностью к хронизации.

2. Лабораторная диагностика.

Исследуемый материал

Фекалии, пищевые продукты.

1. Экспресс – диагностика:

1. РНТФ с видовыми индикаторными дизентерийными бактериофагами

2. РИФ с видовыми люминесцирующими шигеллезными сыворотками

Чувствительность этих реакций не очень высока, т.к. для их учета необходима большая концентрация шигелл в исследуемом материале: для РНТФ – 10⁴ кл/г, для РИФ – 10⁷ кл/г.

7. Микроскопический метод

Не используется.

8. Бактериологический метод

Является основным.

Первичный посев производится на селективные среды накопления: Мюллера, селенитовый бульон, затем пересев на среду Плоскирева (предпочтительнее) или среды Эндо, Левина. Для выделения чистой культуры производят пересев лактозоотрицательных колоний на среду Ресселя. Шигеллы на среде Ресселя расщепляют только глюкозу до кислоты – столбик желтеет, скошенная часть без изменений.

Идентификация по биохимическим свойствам – посев на «пестрый» ряд, фаголизабельным свойствам – проба с видовыми индикаторными дизентерийными бактериофагами, антигенным свойствам – реакция агглютинации на стекле вначале со смесью, а затем с каждой из моновалентных агглютинирующих адсорбированных видовых дизентерийных сывороток, в эпидемиологических целях проводят определение серовара - реакция агглютинации на стекле с типовыми моновалентными агглютинирующими адсорбированными дизентерийными сыворотками.

9. Биологический метод

В настоящее время не используется (кератоконъюнктивальная проба).

10. Серологический метод.

1. Реакция агглютинации с диагностикумами Флекснера, Зонне

2. Реакция пассивной гемагглютинации с эритроцитарными диагностикумами Флекснера, Зонне. Более чувствительна, чем РА.

Диагностические титры: для дизентерии Флекснера 1:200, для дизентерии Зонне 1:100.

11. Метод кожно – аллергических проб

Проба Цуверкалова с дизентерином (в настоящее время не используется).

3. Специфическая профилактика:

1. Вакцина Шигеллвак – вакцина дизентерийная против шигелл Зонне липополисахаридная жидкая, Россия. Шигеллвак – очищенный липополисахарид из кальтуры Sh. sonnei. Цель иммунизации – профилактика дизентерии Зонне у детей с 3-х летнего возраста и взрослых. Вакцину вводят глубоко подкожно или внутримышечно, доза для всех возрастов – 0,5 мл (50 мкг). Введение вакцины через 2 – 3 недели обеспечивает невосприимчивость к инфекции в течение 1 года. Ревакцинация при необходимости ежегодно в той же дозе.

2. Бактериофаг дизентерийный поливалентный жидкий

3. Бактериофаг дизентерийный поливалентный в таблетках с кислотоустойчивым покрытием и в свечах

4. Интести – бактериофаг жидкий

Специфическое лечение:

Могут быть использованы бактериофаги.

Домашнее задание к занятию № 15

1. Шигеллы – возбудители дизентерии и шигеллезов. Классификация. Морфологические, культуральные, биохимические особенности. Антигенное строение.

2. Эпидемиология шигеллезов. Клинические варианты.

3. Методы лабораторной диагностики шигеллезов. Выделение шигелл и их идентификация. Профилактика дизентерии.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 16 Дата___________________

ТЕМА: брюшноЙ тиф и паратифЫ. сальмонеллЕЗЫ.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Разобрать ряд теоретических вопросов, связанных с этиопатогенезом, эпидемиологией, диагностикой брюшного тифа, паратифов и сальмонеллезов.

2. Овладеть практическими навыками по лабораторной диагностике брюшного тифа, паратифов и сальмонеллезов.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА ПО ТЕМЕ: брюшноЙ тиф и паратифЫ. сальмонеллЕЗЫ.

1.Выделение и изучение гемокультуры.

1-й этап. Посев крови в желчный МПБ.

2-й этап. Высев из желчного МПБ на ср. Эндо.

3-й этап. Изучение колоний на среде Эндо.

а) мазок из лактозонегативных колоний, окраска по Граму, зарисовка.

б) выделение чистой культуры на скошенный МПА.

4-й этап. Идентификация чистой культуры.

а) Учет «Пестрых рядов»;

индол

сероводород

лактоза глюкоза мальтоза маннит сахароза МПБ

Вывод:_______________________________

б) пластинчатая агглютинация со смесью адсорбированных сальмонеллезных сывороток АВД;

в) пластинчатая агглютинация с каждой О-сальмонеллезной сывороткой, входящей в смесь А-2, В-4, Д-9.

г) пластинчатая агглютинация с сальмонеллезными Н-сыворотками.

2. Учет реакции Видаля.

Диагностикум	1/50	1/100	1/200	1/400	1/800	1/1600	КС	КД
О
Н
А
В

3. Учет РПГА с Vi-брюшнотифозным диагностикумом.

1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 КД

ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ.

1. Краткая характеристика. Основные клинические симптомы.

БРЮШНОЙ ТИФ И ПАРАТИФЫ - острые инфекционные заболевания, сопровождающиеся бактериемией, поражением лимфоидной ткани кишечника, лихорадкой и общей интоксикацией.

Брюшной тиф может протекать типично и атипично (абортивные и стертые формы). Заболевание начинается постепенно. Проявляется симптомами общей интоксикации. Температура тела достигает 39-40^оС к 4-7 суткам. На 3-5-е сутки увеличиваются печень и селезенка. В период разгара болезни (на 7-8-е сутки) симптомы интоксикации усиливаются, что проявляется резкой заторможенностью, помрачением сознания, характерна розеолезная сыпь. Живот вздут, выражены симптомы энтерита. В этот период возможно возникновение осложнений: перфорация кишечника и кишечное кровотечение. Другие возможные осложнения - инфекционно-токсический шок, миокардит и пневмония. Возбудитель-S.typhi.

Для паратифа А характерно отсутствие поражений ЦНС. Заболевание протекает менее тяжело, сыпь полиморфна, появляется на более ранних сроках, в ходе болезни бывает несколько волн подсыпаний. Возбудитель-S.paratyphi A.

Течение паратифа В вариабельно - от стертых форм до тяжелых форм с симптомами менингита, менингоэнцефалита и септикопиемии. Возбудитель-S.schotmulleri.

2. Характеристика возбудителя:

2.1. Классификация

5 группа по определителю Берджи (факультативно-анаэробные Грам-отрицательные палочки), семейство Enterobacteriaceae, род Salmonella. Род включает один вид - S.enterica и семь подвидов: S. choleraesuis, S. salamae, S. arizonae, S. diarizonae, S. houtenae, S. indica, S. bongori. Патогенностью для теплокровных животных обладают в основном бактерии подвидов choleraesuis и salamae, другие вызывают заболевания редко. Подвид сholeraesuis включает 1367 из 2324 известных сероваров. В 1934 году Кауфман предложил их классификацию.

2.2. Морфологические и тинкториальные свойства

Сальмонеллы-мелкие бактерии вытянутой формы с закругленными концами размером 0,7-1,5х2-5 мкм, спор не образуют, капсул не имеют, перитрихи. Грам-отрицательные.

2.3. Культуральные свойства

На питательных средах образуют мелкие прозрачные S-колонии. На агаре Эндо-розоватые, прозрачные. На агаре Плоскирева - бесцветные, более плотные, мутноватые. На висмут-сульфитном агаре - черные, с металлическим блеском, окружены черным «гало», среда под колониями окрашивается в черный цвет. На бульоне S-формы дают равномерное помутнение среды, R-формы - осадок.

2.4. Биохимические свойства. Лактозу не ферментируют, глюкозу расщепляют до кислоты и газа. Характерно - образование сероводорода, отсутствие индолообразования.

Микроорганизм	Ферментация углеводов					индол	сероводород
	лактоза	глюкоза	мальтоза	маннит	сахароза
S.typhi	-	К	К	КГ	-	-	+
S.paratyphi A	-	КГ	КГ	КГ	-	-	-
S.schotmulleri	-	КГ	КГ	КГ	-	-	+
E. coli	КГ	КГ	КГ	КГ	В	+	-

2.5. Токсигенные свойства

Экзотоксины: LT-токсин-увеличивает содержание цАМФ в энтероцитах,

ST-токсин-нарушает синтез белков, активирует образование простагландинов.

Эндотоксин угнетает деятельность ЦНС, может вызвать миокардит, миокардиодистрофию и инфекционно-токсический шок.

2.6. Антигенные свойства.

Антигенное строение сальмонелл положено в основу диагностической классификации Кауфмана-Уайта.

О-антиген термостабильный. По О-Аг сальмонеллы разделяют на серологические группы.

Н-антиген термолабильный. По Н-Аг сальмонеллы разделяют на серовары. Выделяют Аг 1 (специфические) фазы и 2 (неспецифические) фазы.

К-антигены: поверхностный Vi-Аг (Аг вирулентности) и М-Аг, выяявляемый у слизистых штаммов.

2.7. Резистентность. Долго сохраняют жизнеспособность во внешней среде. Кипячение убивает мгновенно. При замораживании могут оставаться живыми длительное время. Осветленный раствор 0,3% хлорной извести при 30-минутной экспозиции убивает сальмонеллы через 1 час. Хлорирование сточных вод снижает их загрязненность сальмонеллами в 6 раз.

2.8. Патогенность для животных. Пресмыкающиеся, земноводные, рыбы и птицы могут быть резервуаром большинства возбудителей. Клинически у животных и птиц сальмонеллез протекает по типу гастроэнтерита. Возбудители паратифа В и С выделены от некоторых животных и птиц. Брюшной тиф и паратиф А - типичные антропонозы.

3. Патогенез

1-я фаза – дигестивная – бактерии попадают в желудок, затем адгезируются на энтероцитах тонкого кишечника. Фаза длится несколько часов.

2-я фаза – инвазивная – бактерии попадают на пейеровы бляшки и солитные фолликулы, где размножаются.

3-я фаза – бактериемия.

4-я фаза – паренхиматозная диффузия – в основном в печень, а затем в желчь.

5-я фаза – аллергически - выделительная. Сенсибилизация пейеровых бляшек, образование инфильтрата (ГЗТ), формирование язв. Может произойти перфорация и развитие перитонита.

6-я фаза – реконвалесценция.

7-я фаза – выздоровление или носительство (до 3-х месяцев – острое носительство, более до 3-х месяцев – хроническое).

4. Эпидемиология

Источник - больные, реконвалесценты, носители.

Механизм передачи - фекально-оральный (инфицирующая доза 10⁵). Путь – водный (сельская местность), пищевой, реже контактный.

Восприимчивый коллектив - человек и животные

5. Иммунитет. При брюшном тифе в результате гуморального иммунного ответа в сыворотке крови появляются различные антитела, которые обеспечивают напряженный иммунитет. Кроме того, секреторные иммуноглобулины А, покрывая слизистую оболочку тонкой кишки обеспечивают местный иммунитет. Полагают, что при брюшном тифе имеет место и клеточный иммунный ответ в результате образования Т-эффекторов ГЗТ в пейеровых бляшках.

6. Лабораторная диагностика

Исследуемый материал. Выбор наиболее удачного метода диагностики брюшного тифа и паратифов зависит от того, в какие сроки от начала заболевания обследуется больной. Учитывая патогенез, брюшнотифозные и паратифозные бактерии могут быть выделены из крови (1 и нередко 2 недели заболевания), из испражнений (3 неделя заболевания), из мочи (3 неделя заболевания), из желчи - дуоденальное содержимое (в течение всего заболевания), из костного мозга (1-2 недели заболевания), из розеол (с момента их появления), из трупа (желчный пузырь и селезенка).

1. Микроскопический метод - не используется.

2. Бактериологический метод - основной

Ранняя диагностика брюшного тифа и паратифов - выделение и изучение гемокультуры. В более поздний период производят выделение и изучение копрокультуры, дуоденокультуры, уринокультуры.

3. Серологический метод

Антитела появляются к 4 дню заболевания, резко нарастают к 8 - 10, увеличиваются ко второй, третьей недели заболевания и достигают максимума к началу выздоровления. Обнаруживают антитела по реакции Видаля. Положительный результат – 1/200.

Получила широкое распространение РНГА для обнаружения в крови обследуемых Vi-антител. Для постановки испытуемую сыворотку разводят от 1/10 до 1/640, в качестве антигена использую эритроцитарный Vi-диагностикум (взвесь эритроцитов 1 группы крови человека, обработанных формалином и сенсибилизированных Vi-антигеном тифозной палочки). Учет реакции через 2 часа инкубирования при +37С. Диагностический титр – 1/40. Чаще всего используется для выявления бактерионосительства.

7. Специфическая профилактика:

• вакцина брюшнотифозная спиртовая сухая – инактивированные этиловым спиртом и лиофилизированные микробные клетки S. typhi штамм 4446 без консерванта. В одной ампуле – 5 млрд. микробных клеток. Предназначена для использования у взрослых. Вакцинацию проводят 2-кратно: 0,5 мл, через 25-35 суток – 1,0 мл, ревакцинация через 2 года в дозе 1,0 мл. Вводят подкожно в подлопаточную область.

• вакцина брюшнотифозная Vi – полисахаридная жидкая (ВИАНВАК) – очищенный раствор капсульного Vi – полисахарида. Введение вакцины обеспечивает невосприимчивость к инфекции через 1-2 недели, сохраняется в течение 2 лет. Применяется с 3-х летнего возраста однократно подкожно в наружную поверхность верхней трети плеча. Ревакцинация каждые 3 года.

• Тифим Ви по своему составу сходна с ВИАНВАК. Вводится п/к или в/м, иммунитет развивается через 2-3 недели и сохраняется в течение 3-х лет. Ревакцинация – однократно той же дозой. Используется начиная с 5 лет.

• бактериофаг брюшнотифозный в таблетках.

ПИЩЕВЫЕ ТОКСИКОИНФЕКЦИИ.

Вызываются более, чем 100 видами сальмонелл групп В, С, Д, Е. S. enteritidis, typhimurium – лидеры. Устойчивы во внешней среде: температура +70⁰ для большинства губительна, но есть термоустойчивые штаммы (необходимо действие 90⁰ в течение 1 часа). Соление и копчение не убивает сальмонеллы. Долго живут в молоке, размножаются в мясе, рыбе, молоке. В сыре и хлебе могут сохраняться. При развитии гастроэнтеритов сальмонеллезной этиологии микроорганизмы адгезируются на энтероцитах тонкой кишки. Затем они проникают в энтероциты и фагоцитируются макрофагами. При разрушении сальмонел освобождается эндотоксин, оказывающий неспецифическое полифункциональное действие (нарушение функций нервной, сердечно-сосудистой и пищеварительной систем). Кроме того, сальмонеллы продуцируют энтеротоксин, механизм действия которого заключается в нарушении водно-солевого обмена, что приводит к диарее и обезвоживанию организма. Клинически выделяют гастроинтестинальные и генерализованные формы. Последние разделяют на тифоподобные (с гастроэнтеритом, поражениями ЦНС и сыпью) и септикопиемические (сепсис сальмонеллезной этиологии) варианты. Как субклиническую форму сальмонеллеза рассматривают бактерионосительство. При сальмонеллезах имеет место гуморальный и частично клеточный иммунный ответ, которые не приводят к развитию напряженного иммунитета.

Лабораторная диагностика:

Исследуемый материал – испражнения, рвотные массы, моча, кровь, пищевые продукты, вода.

Бактериологический метод – основной (см. БРЮШНОЙ ТИФ).

Серодиагностика – РА (60%), РПГА (70%).

Препараты для профилактики и лечения сальмонеллезов:

• бактериофаг сальмонеллезный групп А, В, С, Д и Е,

• интести – бактериофаг жидкий,

• лактоглобулин против условно-патогенных бактерий и сальмонелл коровий сухой для перорального применения.

ГОСПИТАЛЬНЫЕ ИНФЕКЦИИ

Чаще вызывают S. typhimurium, derby. Как правило, эти бактерии устойчивы к 15-20 антибиотикам и высоко патогенны. Основные пути передачи – контактно-бытовой, воздушно-пылевой, и пищевой. Клинические проявления могут быть разнообразными: от бессимптомного бактерионосительства до тяжелейших интоксикаций и развития септических осложнений, которые встречаются у детей раннего возраста. В лабораторной диагностике основным является бактериологический метод. Для специфической профилактики и лечения можно использовать поливалентный фаг.

ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ К ЗАНЯТИЮ № 16.

1. Общие свойства сальмонелл. Серологическая классификация сальмонелл (схема Кауфмана – Уайта).

2. Возбудители брюшного тифа и паратифов. Их морфологические, культуральные, антигенные и биохимические свойства. Патогенез брюшного тифа и паратифов.

3. Ранняя микробиологическая диагностика тифо-паратифозных заболеваний (гемокультура). Получение и изучение копрокультуры, дуоденокультуры и уринокультуры. Серодиагностика брюшного тифа и паратифов. Диагностика бактерионосительства при брюшном тифе.

4. Диагностика сальмонеллезов.

5. Специфическая профилактика брюшного тифа и сальмонеллезов.

Основная литература

1. В.Д. Тимаков, В.С. Левашев, Л.Б. Борисов – Микробиология (учебник), 1983

2. К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин – Микробиология (учебник), 1980

3. М.Н. Лебедева - Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973 (практикум)

4. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии под рук. Л.Б. Борисова, 1984, (практикум)

5. Л.Б. Борисов, А.М. Смирнова – Микробиология (учебник), 1994

6. Микробиология и иммунология. Под ред. А.А. Воробьева. Москва, «Медицина», 1999

7. Микробиология. А.А. Воробьев, А.С. Быков, Е.П. Пашков, А.М. Рыбакова. Москва, «Медицина», 1998

8. Медицинская микробиология. Под ред. В.И. Покровского. Москва, ГОЭТАР-Мед, 2001

Дополнительная литература

1. Быченко Б.Д. - Столбняк, Мед., 1982

2. Вершигора А.Е. - Основы иммунологии, 1980

3. Гинсбург Н.Н. - Живые вакцины, 1969

4. Иванов А.И. - Острые кишечные инфекции, 1982

5. Лабинская А.С. - Микробиология с техникой микробиологических исследований, М., 1978

6. Новашин С.М., Фомина Н.П. - Рациональная антибиотикотерапия, 1982

7. Общая и частная вирусология (руководство), 1982, Т.1, 2

8. Петров Р.В. – Иммунология (учебник), 1982

9. Петровская В.Г., Марко О.П. - Микрофлора тела человека в норме и патологии, М., 1976

10. Постовит В.А. - Пищевые токсикоинфекции, 1979

11. Смирнова А.М. с соавт. - Микробиология и профилактика стафилококковых инфекций, Л., 1977

12. Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов, М., 1975

13. Чистович Г.Н. - Эпидемиология и профилактика стафилококковых инфекций, 1969

14. Шварцман Я.С., Хазенсон Л.Б. - Местный иммунитет, 1978

15. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ее применение в диагностике инфекционных заболеваний (учебное пособие для студентов).- Челябинск, 1999.- 10 с.

16. Долгушин И.И., Колесников О.Л., Бельский М.С., Колесникова А.А. – Препараты для специфической профилактики и лечения инфекционных заболеваний (Учебно-методическое пособие для врачей и студентов). – Челябинск, 1999.

3