5.2. Построение калибровочной кривой

Из 1%-ного исходного раствора сульфата меди готовят растворы с меньшей концентрацией по схеме:

№ пробирки	Разведение	Концентрация сульфата меди	№ пробирки	Разведение	Концентрация сульфата меди
1	Исходный раствор	10 мг/мл	6	5 мл (1) + 5 мл воды	5 мг/мл
2	9 мл (1) + 1 мл воды	9 мг/мл	7	4 мл (1) + 6 мл воды	4 мг/мл
3	8 мл (1) + 2 мл воды	8 мг/мл	8	3 мл (1) + 7 мл воды	3 мг/мл
4	7 мл (1) + 3 мл воды	7 мг/мл	9	2 мл (1) + 8 мл воды	2 мг/мл
5	6 мл (1) + 4 мл воды	6 мг/мл	10	1 мл (1) + 9 мл воды	1 мг/мл

Содержимое пробирок перемешивают и проводят реакцию образования аммиаката меди. Для этого отбирают 2 мл испытуемого раствора (см. таблицу выше), добавляют 1 мл NH₄OH и 2 мл воды. Пробирки встряхивают и измеряют интенсивность образовавшейся окраски на ФЭК при выбранном светофильтре. Полученные данные записывают в табл. 8 и строят калибровочную кривую. Работа по построению кривой дублируется 2-3 раза. При этом используются те же растворы сульфата меди.

Таблица 8. Зависимость оптической плотности от концентрации CuSO₄

Номер пробирки	CuSO4, мг/мл	Оптическая плотность	Примечание
1	2	3	4

5.3 Способность пектина связывать ионы меди

В ряд пробирок вносят испытуемые растворы в количествах, указанных в табл. 9.

Таблица 9. Зависимость количества связанной меди от содержания пектина в растворе

№ пробирки	CuSO4 4%, мл	Пектин, мл	Вода, мл	Оптическая плотность (А)	Количество связанной меди, мг
1	1	0	4
2	1	0,5	3,5
3	1	1	3
4	1	2	2
5	1	3	1

Содержимое пробирок перемешивают. Образующийся осадок отделяют на фильтре и в фильтрате определяют содержание ионов меди (см. п. 5.2). Остаточную концентрацию меди в исследуемых растворах (С_ост> мг/мл) найти по калибровочной кривой. Количество связанной меди (С, мг) рассчитать по формуле:

С = С_исх- С_ост

где С_исх — исходная концентрация меди в растворе, мг/мл; С_ост — остаточная концентрация меди в растворе, мг/мл.

5.5 Способность белка связывать ионы меди

В ряд пробирок вносят испытуемые растворы в количествах, указанных в табл. 10.

Таблица 10. Зависимость количества связанной меди от содержания белка в растворе

№ пробирки	CuSO4 4%, мл	Раствор белка, мл	Вода, мл	Оптическая плотность (А)	Количество связанной меди, мг
1	1	0	4
2	1	0,5	3,5
3	1	1	3
4	1	2	2
5	1	3	1

Содержимое пробирок перемешивают и фильтруют. В фильтрате определяют содержание ионов меди по интенсивности окраски аммиаката меди (см. п. 5.2.). Остаточную концентрацию меди в исследуемых растворах (С_ост мг/мл) найти по калибровочной кривой. Количество связанной меди (С, мг) рассчитать по формуле (см. выше).

5.6 Способность смеси белок + пектин связывать ионы меди

В ряд пробирок вносят испытуемые растворы в количествах, указанных в табл. 11.

Таблица 11. Зависимость количества связанной меди от содержания пектина и белка в растворе

№ пробирки	CuSO4 4%, мл	Пектин 0,5%, мл	Белок 0,5%, мл	Вода, мл	Оптическая плотность (А)	Количество связанной меди, мг
1	1	1	0	3
2	1	1	0,5	2,5
3	1	1	1	2
4	1	1	1,5	1,5
5	1	1	2	1
6	1	0	1	3
7	1	0,5	1	2,5
8	1	1	1	2
9	1	2	1	1
10	1	3	1	0
11	1	0	0	4

Содержимое пробирок перемешивают и фильтруют. В фильтрате определяют содержание ионов меди по интенсивности окраски аммиаката меди (см. п. 5.2.). Остаточную концентрацию меди в исследуемых растворах (С_ост> мг/мл) найти по калибровочной кривой. Количество связанной меди (С, мг) рассчитать по формуле (см. выше).

На основании полученных результатов делают вывод о способности разных соединений взаимодействовать с ионами меди. Сравнивают связывающую способность пектина, белка и их смеси. Делают графические построения.