Аспирационный метод

Аспирационный метод - это более точный метод по сравнению с седиментационным. При использовании этого метода воздух приводят в движение различными способами, а на пути воздушной струи помещают плотную питательную среду. Сталкиваясь со средой, бактериальные аэрозоли оседают на ней.

В настоящее время при санитарно-бактериологическом контроле воздушной среды для отбора проб воздуха применяют отечественные пробоотборные устройства (ПУ) нескольких технологических марок, таких как аппарат Кротова, ПУ-1Б, МБ . Во всех этих устройствах используется принцип импакционного (то есть ударного, от англ. impact) осаждения пылевых частиц на плотную питательную среду.

Аппарат Кротова представляет собой металлический цилиндр, внутри которого находится электромотор с центробежным вентилятором и вращающимся диском-подставкой для чашки Петри с плотной питательной средой (МПА, глюкозо-кровяной агар, желточно-солевой агар и т.п.). В крышке цилиндра имеется клиновидная щель, через которую всасывается воздух. Его количество определяют с помощью ротометра. Для определения общего микробного числа воздуха помещения через прибор пропускают 100 л воздуха: для обнаружения стафилококков и других патогенных микробов объем исследуемого воздуха увеличивают до 250 л. Отбор проб воздуха в жилых и производственных помещениях производят на высоте рабочего стола, в животноводческих помещениях - на уровне кормушек.

Содержание микробов в 1 л воздуха определяют делением числа выросших колоний на количество литров пропущенного воздуха. Чтобы перевести этот показатель из расчета на 1м³ полученное число микробов в 1 л воздуха умножают на 1000.

Осаждение бактериальных аэрозолей воздуха электростатическими силами осуществляют при помощи пробоотборника аэрозольного бактериологического ПАБ-1 и ПАБ-2. Приборы работают по принципу электростатического осаждения частиц аэрозоля из потока воздуха. Частицы исследуемого воздуха электризуются и осаждаются на электрод противоположного знака.

Осаждение микробных аэрозолей паром или распыленной жидкостью может быть проведено с помощью импинджеров и сифонирующих приборов с жидкостью (МПБ, пептонная вода, изотонический раствор NaCl), через которые барбатируется (пропускается, просасывается) исследуемый воздух. Капиллярные трубки, имеющиеся в таких приборах, образуют пульверизатор. При прохождении воздуха через прибор улавливающая жидкость, встречаясь с воздушной струёй, превращается в аэрозоль и адсорбирует микробные частицы из воздуха. Затем жидкость стекает в специальный резервуар и может быть использована для последующего цикла. Жидкость из импинджеров и сифонирующих приборов после просасывания определенного количества воздуха исследуют бактериологическими и вирусологическими методами.

Фильтрационный метод

Фильтрация воздуха может производиться через жидкости, твёрдые нерастворимые фильтры и твёрдые растворимые фильтры.

Фильтрация воздуха через жидкость, в том числе с использованием прибора Дьяконова, основана на том, что определенный объем воздуха (10-20 л) пропускают при частом встряхивании через «склянки Дрекселя» - стеклянный цилиндр с 20 мл стерильного физиологического раствора или стерильной питательной среды (МПБ) и стеклянными бусами. С помощью приводящей и отводящей стеклянных трубок через прибор просасывают 100 л воздуха. Для лучшего раздробления частиц пыли и разделения скопления микробов на них жидкость тщательно перемешивают. Затем по 1 см³ среды выливают в 2-3 стерильные чашки Петри, заливают расплавленным и охлажденным до 40-45°С мясо-пептонным агаром (МПА) или специальной питательной средой, равномерно распределяют вращательными движениями по дну чашки и оставляют до застывания среды. Чашки вверх дном помещают в термостат на 24-48 ч при температуре 37-38°С. Подсчитывают количество выросших колоний и, производя пересчет на 1 м³, вычисляют количество микроорганизмов в 1 м³ исследованного воздуха.

Фильтрация воздуха через нерастворимые твёрдые фильтры проводится с применением фильтров из хлопчатобумажной или тонкой стеклянной ваты. Непосредственно перед работой фильтр пропитывают стерильной смесью, приготовленной из равных объёмов вазелинового масла и 3%-го раствора желатина. Фильтр вставляют в бактериоуловители соответствующего прибора и пропускают через него при помощи аспиратора 100-300 л воздуха. Осадок извлекается промыванием фильтра физиологическим раствором с последующим анализом этого раствора на питательных средах.

Использовать для улавливания микроорганизмов растворимые твёрдые фильтры из морской соли впервые предложил Луи Пастер. Можно использовать растворяемые затем в пептонной воде и МПБ твёрдые фильтры, изготовленные из желатиновой пены и других веществ. При проведении отбора проб воздуха стерильные желатиновые фильтры фиксируют в аппарате Зейтца, к которому присоединяют вакуум-насос и просасывают определённый объём воздуха.

Практическая работа:

1. Освоить методику определения микробного загрязнения воздуха в различных помещениях седиментационным методом и с помощью аппарата Кротова.

2. Подсчитать количество микроорганизмов в воздухе, используя чашки с МПА с ростом воздушной микрофлоры.

3. Изучить и описать колонии микроорганизмов, выделенных из воздуха помещений. Сделать мазки из таких колоний, окрасить по Граму, провести микроскопию мазков.

Контрольные вопросы:

1. Какие микроорганизмы постоянно присутствуют в воздухе?

2. Какие адаптационные механизмы помогают микроорганизмам выживать в воздухе.

3. Какие болезни могут передаваться воздушно-капельным и воздушным путем?

4. Какими путями происходит загрязнение воздуха жилых, животноводческих и производственных помещений, от чего зависит интенсивность загрязнения?

5. По каким показателям оценивают степень загрязнения воздуха?

6. Какими методами проводят санитарно-бактериологическое исследование воздуха?

7. В чем суть экспериментальных данных Омелянского, как их используют на практике?

8. Расскажите о принципе работы прибора Кротова.

9. Объясните значение терминов: «импакционное осаждение», «импинджеры», «барбатироваться», «каскадные импакторы».