Выявление и идентификация Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis

С учётом биологии возбудителей псевдотуберкулёза и иерсиниоза бактериологическое исследование проводят с использованием одних и тех же сред накопления и плотных питательных сред для получения колоний.

Материалом для бактериологического исследования могут служить овощи, салаты, гарниры, рыбные, мясные продукты, творог, сыр и другие молочные продукты, молоко, компоты, вода и др.

1 Этап. Предварительное холодовое обогащение в неселективной жидкой среде.

Общепризнанным методом обогащения исследуемого материала при исследованиях на иерсиниозы является метод холодового обогащения, основанный на способности иерсиний размножаться в питательных субстратах при низких плюсовых температурах. При этом используется и способность данных микроорганизмов расти на голодных средах.

Исследуемый материал растирают в ступках. Вносят в пробирки со стерильной средой обогащения (например, 1%-я пептонная вода с добавлением K₂HPO₄) в соотношении 1:5. Пробирки или колбы помещают в холодильник при температуре +4^о С. На жидких питательных средах в первые сутки образуется помутнение, затем появляется осадок и плёнка на поверхности среды.

2 этап. Посев на плотные питательные среды. Из середины столбика надосадочной жидкости, не взбалтывая, бактериологической петлёй делают пересев на плотные дифференциально-диагностические среды СБТС (среда с бромтимоловым синим), Мак-Конки, цефсулодин-иргазан-новобиоциновый агар, дезоксихолатный агар, среду Серова. Иерсинии растут и на среде Эндо, но на этой среде наблюдается также активный рост посторонней микрофлоры, поэтому она не рекомендуется для культивирования иерсиний.

Чашки с посевом инкубируют при 22-25^оС, чашки со средой СБТС – при 37^оС. Пересев производят петлёй из верхней трети среды накопления, но не с поверхности, перед пересевом содержимое не взбалтывают.

Дополнительный этап предварительной обработки исследуемого материала

Серьёзным недостатком метода холодового обогащения является его длительность (до 15 суток). Устранить этот недостаток позволяют рекомендуемые для выделения и идентификации чистой культуры Y. enterocolitica методы воздействия на предположительно находящиеся в пищевых продуктах иерсинии с целью их активизации (температурный или щелочной шок). Методы применяют параллельно с использованием метода предварительного холодового обогащения.

«Холодовой удар». Пробирки с исследуемым материалом помещают в морозильную камеру при температуре минус 18^оС на 18 часов. Затем материал размораживают и делают из него посевы на среды Эндо и СБТС.

«Тепловой удар». Пробирки с исследуемым материалом помещают в термостат при 42^оС на 18 часов. После этого производят посевы на среды Эндо или СБТС.

«Щелочная обработка». В лунки полистироловых пластин разливают по 0,2 мл свежеприготовленного 0,5%-го раствора КОН и вносят в них 0,2 мл суспензии исследуемого материала в среде обогащения. Смесь тщательно перемешивают, выдерживают в течение 3-5 минут и делают посевы в бульон Хоттингера (МПБ). Посевы инкубируют при 37^оС в течение суток и делают из них пересевы в чашки со средами Эндо или СБТС.