
- •Практикум по микробиологии
- •Часть 2. Микробиоценозы природных экосистем
- •Тема 1 микроорганизмы как часть экосистемы. Методы изучения микроорганизмов, входящих в состав микробиоценозов. Определение омч (кмафанм).
- •Микробиоценозы как часть экосистемы
- •Способы существования микроорганизмов в составе микробиоценоза
- •Методы изучения микроорганизмов, входящих в состав микробиоценозов
- •Идентификация микроорганизмов возможна при использовании системы классификации. Принципы современной систематики и классификации бактерий.
- •Определение общего микробного числа
- •Методика определения общего числа микроорганизмов омч (количества мафАнМ) бактериологическим методом
- •Методика выявления и определения количества термофильных и психрофильных микроорганизмов
- •Нормальная микрофлора кожи
- •Нормальная микрофлора дыхательных путей
- •Микрофлора разных отделов полости рта
- •Нормальная микрофлора пищевода
- •Микрофлора желудка
- •Микрофлора толстого кишечника
- •Микробиоценоз мочеполовой системы
- •Представители микробиоценоза организма человека и животных
- •Грамположительные кокки
- •Тема 3. Энтеробактерии
- •Коринебактерии, бактероиды, микобактерии
- •Модуль 6. Микрофлора пищевых продуктов и кормов.
- •Источники и пути обсеменения пищевых продуктов микроорганизмами
- •Особенности пищевых продуктов как среды обитания микроорганизмов
- •Особенности санитарно-микробиологического исследования пищевых продуктов
- •Тема 6 аэробные микроаэрофильные палочки и кокки семейств псевдомонады и ацетобактерии
- •Тема 7 молочнокислые палочки и кокки. Бифидобактерии.
- •Характеристика молочнокислых бактерий
- •Практическое значение молочнокислого брожения и молочнокислых микроорганизмов
- •Тема 8 Патогенные микроорганизмы в пищевых продуктах и кормах – листерии и иерсинии
- •Выявление и идентификация l. Monocytogenes при санитарно-микробиологических исследованиях
- •Выявление и идентификация Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis
- •1 Этап. Предварительное холодовое обогащение в неселективной жидкой среде.
- •3 Этап. Выявление характерных колоний.
- •Санитарно-показательные микроорганизмы
- •Тема 9. Микробиоценозы объектов внешней среды Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха.
- •Микрофлора воздуха
- •Санитарно-микробиологические исследования воздуха
- •Седиментационный метод (метод оседания) по Коху.
- •Аспирационный метод
- •Фильтрационный метод
- •Тема 10. Микроэкологические методы исследования почвы. Свободноживущие и симбиотические микроорганизмы почвы: – обитатели почвы
- •Условия обитания микроорганизмов в почве.
- •Антропогенное воздействие на почву
- •Экологические методы бактериологического исследования почвы.
- •Почвенные микроорганизмы, принимающие участие в круговороте азота
- •Свободноживущие и симбиотические азотфиксаторы семейств
- •Свободноживущие автотофные серо- железо- и марганецокисляющие почвенные бактерии
- •Грамположительные, не образующие спор палочки неправильной формы, род Arthrobacter.
- •Тема 11 санитарно-микробиологические методы бактериологического исследования почвы. Почвенные бациллы
- •Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Бациллы
- •Сибирская язва
- •Диагностика сибирской язвы.
- •Тема 12 клостридии. Фузобактерии.
- •Ботулизм
- •Профилактика ботулизма
- •Столбняк
- •Газовая гангрена
- •Фузобактерии
- •Тема 13 обитатели почвы - актиномицеты и родственные им микроорганизмы
- •Тема 14 свободноживущие водные микроорганизмы – автотрофы
- •Тема 15 санитарно-микробиологическое исследование воды
- •Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •Тема 16 водные микроорганизмы возбудители болезней
Выявление и идентификация l. Monocytogenes при санитарно-микробиологических исследованиях
В нашей стране наличие L. monocytogenes регламентируется в пищевых продуктах. В большинстве случаев, согласно требованиям СанПиН, наличие L. monocytogenes не допускается в 25 г (см3) исследуемого пищевого продукта.
Обнаружение в посевах грамположительных коротких тонких палочек, не образующих спор и капсул, каталазоположительных, не восстанавливающих нитраты, не утилизирующих маннит, подвижных при 25ºС и неподвижных при 37ºС, указывает на принадлежность выделенных культур к роду Listeria.
СХЕМА ВЫЯВЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ
LISTERIA MONOCYTOGENES
Этапы иссле-дования
|
Патологический материал Головной мозг, аборт.плоды, кусочки паренхим. органов, пищевые продукты и корма |
|
1 этап |
Мазок - палочки, Гр+, Сп-, Капс.-, подвижные при 20оС и неподвижные при 37оС, располагаются одиночно, попарно и в виде римской цифры «V» |
Ветеринарная методика: Посев на: 1. Жидкие и плотные среды, обогащенные печенью, глюкозой, глицерином, кровью; МППГГБ, МППГГА; эритрит-агар; Медицинская методика: Посев на: среды обогащения - полуконцентрированный бульон Фразера (почернение среды); затем – на концентрированный бульон Фразера; затем – пересев на специальные плотные среды, например, среду PALCAM-агар, OXVORD-агар |
2 |
Изучение культурально-биохимических свойств листерий: На средах МППГГА, эритрит-агар – точечные росинчатые колонии с голубоватым оттенком; на жидких средах – лёгкое помутнение и осадок в виде «косички». На среде PALCAM-агар или OXVORD-агар – тёмно-зелёные (практически чёрные) колонии с тёмным ореолом на соответственно красном или оливковом фоне среды; |
|
3 |
Дополнительное биохимическое тестирование (подтверждение принадлежности к роду Listeria) Тест на каталазную активность + Тест на подвижность при 20оС (+) и неподвижность при 37оС(-). Бета-гемолитическая активность на кровяном агаре (+); Ферментация маннита на среде Гисса (+) Реакция нитрат-редукции со специальным реактивом (-) |
|
4 |
Определение вида (Listeria monocytogenes) Тест на лецитиназную активность на среде с активированным углем и без него; Тест на скрытую гемолитическую активность (CAMP-тест) Способность ферментации сахаров рамнозы, ксилозы |
|
5 |
Серологическая диагностика |
|
6 |
Биопроба (по ветеринарной методике) на кроликах (дермонекротическая), морских свинках (конъюнктивальная), белых мышах (литальная) +; |
Общие сведения о иерсиниозе
Иерсиниозы (псевдотуберкулёз и иерсиниоз) у людей — острые инфекционные зооантропонозные болезни, вызываемые микроорганизмами ceмейства Enterobacteriaceae Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis. Характеризуются поражением желудочно-кишечного тракта, опорно-двигательного аппарата, печени и других органов, общей интоксикацией, экзантемой (сыпью), при поздней диагностике и без лечения – рецидивирующим и затяжным течением.
Иерсинии широко распространены в природе. Они обитают в почве, на растениях, в кишечном тракте мелких мышевидных грызунов. Основной путь передачи возбудителей псевдотуберкулёза и иерсиниоза – пищевой. В большинстве случаев причиной заболевания является попадание иерсиний в восприимчивый организм с пищевыми продуктами. Инфицирование продуктов возможно в местах их производства и хранения (от грызунов, сельскохозяйственных животных, через загрязнённую почву, тару). Длительное хранение обсеменённых овощей и фруктов в овощехранилищах сопровождается накоплением на них иерсиний.
Иерсинии, так же, как листерии, являются психрофилами. Они длительно существуют и размножаются при температуре 4-15оС. Переносят температуру -15-20оС и даже -70оС. Кроме того, иерсинии переносят значительные концентрации различных химических веществ. Y.enterocolitica могут выживать в 10-15% растворе поверенной соли, в среде с рН от 4,5 до 10,0. При попадании в пищевые продукты, особенно в готовые блюда из сырых овощей, иерсинии быстро размножаются, создавая большую концентрацию бактерий. В процессе жизнедеятельности они выделяют токсичные вещества, особенно при низкой температуре, что приводит к накоплению не только микроорганизмов, но и продуктов их метаболизма – токсинов.
В клинической картине иерсиниоза наиболее постоянны симптомы поражения желудочно-кишечного тракта: боли в области живота, тошнота, реже рвота, жидкий стул. При псевдотуберкулёзе в начале болезни отмечаются жалобы на першение и неприятные ощущения в глотке, болезненность в области шейных и реже подчелюстных лимфатических узлов. На 2-4- й день болезни появляется сыпь (при псевдотуберкулзе – скарлатиноподобная, при иерсиниозе – полиморфная). При дальнейшем развитии болезни наблюдаются поражения различных органов и систем (аппендицит, гепатит, артрит). В тяжёлых случаях отмечается генерализованный процесс, который может закончиться гибелью больного.
Возбудителем иерсниоза является Yersinia enterocolitica - мелкая подвижная палочка, не образующая спор и окрашивающаяся отрицательно по Граму. Она относится к семейству Enterobacteriaceae. Иерсинии – грамотрицательные мелкие палочки с закруглёнными концами, полиморфные, длиной 1.8-1.5 мкм. Могут окрашиваться биполярно, особенно в мазках из бульонных культур или в препаратах из орагнов животных, погибших от заболевания. В мазках располагаются одиночно или короткими цепочками (2-4 клетки). Иерсинии подвижны при температуре ниже 25оС и нгеподвижны при температуре 37оС, в некоторых условиях образуют капсулу. Спору не образуют. Являются факультативными аэробами. Наиболее благоприятна для роста иерсиний температура от 22 до 26оС.
При температуре 37оС колонии возбудителей псевдотуберкулёза имеют неровный утончённый край, выпуклый бугристый центр коричневого цвета или исчерченную поверхность и волнистый край. Колонии возбудителей иерсиниоза обычно более гладкие, с волнистым или ровным краем.