Выявление и идентификация l. Monocytogenes при санитарно-микробиологических исследованиях

В нашей стране наличие L. monocytogenes регламентируется в пищевых продуктах. В большинстве случаев, согласно требованиям СанПиН, наличие L. monocytogenes не допускается в 25 г (см³) исследуемого пищевого продукта.

Обнаружение в посевах грамположительных коротких тонких палочек, не образующих спор и капсул, каталазоположительных, не восстанавливающих нитраты, не утилизирующих маннит, подвижных при 25ºС и неподвижных при 37ºС, указывает на принадлежность выделенных культур к роду Listeria.

СХЕМА ВЫЯВЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ

LISTERIA MONOCYTOGENES

Этапы иссле-дования	Патологический материал Головной мозг, аборт.плоды, кусочки паренхим. органов, пищевые продукты и корма
1 этап	Мазок - палочки, Гр+, Сп-, Капс.-, подвижные при 20оС и неподвижные при 37оС, располагаются одиночно, попарно и в виде римской цифры «V»	Ветеринарная методика: Посев на: 1. Жидкие и плотные среды, обогащенные печенью, глюкозой, глицерином, кровью; МППГГБ, МППГГА; эритрит-агар; Медицинская методика: Посев на: среды обогащения - полуконцентрированный бульон Фразера (почернение среды); затем – на концентрированный бульон Фразера; затем – пересев на специальные плотные среды, например, среду PALCAM-агар, OXVORD-агар
2	Изучение культурально-биохимических свойств листерий: На средах МППГГА, эритрит-агар – точечные росинчатые колонии с голубоватым оттенком; на жидких средах – лёгкое помутнение и осадок в виде «косички». На среде PALCAM-агар или OXVORD-агар – тёмно-зелёные (практически чёрные) колонии с тёмным ореолом на соответственно красном или оливковом фоне среды;
3	Дополнительное биохимическое тестирование (подтверждение принадлежности к роду Listeria) Тест на каталазную активность + Тест на подвижность при 20оС (+) и неподвижность при 37оС(-). Бета-гемолитическая активность на кровяном агаре (+); Ферментация маннита на среде Гисса (+) Реакция нитрат-редукции со специальным реактивом (-)
4	Определение вида (Listeria monocytogenes) Тест на лецитиназную активность на среде с активированным углем и без него; Тест на скрытую гемолитическую активность (CAMP-тест) Способность ферментации сахаров рамнозы, ксилозы
5	Серологическая диагностика
6	Биопроба (по ветеринарной методике) на кроликах (дермонекротическая), морских свинках (конъюнктивальная), белых мышах (литальная) +;

Общие сведения о иерсиниозе

Иерсиниозы (псевдотуберкулёз и иерсиниоз) у людей — острые инфекционные зооантропонозные болезни, вызываемые микроорганизмами ceмейства Enterobacteriaceae Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis. Характеризуются поражением желудочно-кишечного тракта, опорно-двигательного аппарата, печени и других органов, общей интоксикацией, экзантемой (сыпью), при поздней диагностике и без лечения – рецидивирующим и затяжным течением.

Иерсинии широко распространены в природе. Они обитают в почве, на растениях, в кишечном тракте мелких мышевидных грызунов. Основной путь передачи возбудителей псевдотуберкулёза и иерсиниоза – пищевой. В большинстве случаев причиной заболевания является попадание иерсиний в восприимчивый организм с пищевыми продуктами. Инфицирование продуктов возможно в местах их производства и хранения (от грызунов, сельскохозяйственных животных, через загрязнённую почву, тару). Длительное хранение обсеменённых овощей и фруктов в овощехранилищах сопровождается накоплением на них иерсиний.

Иерсинии, так же, как листерии, являются психрофилами. Они длительно существуют и размножаются при температуре 4-15^оС. Переносят температуру -15-20^оС и даже -70^оС. Кроме того, иерсинии переносят значительные концентрации различных химических веществ. Y.enterocolitica могут выживать в 10-15% растворе поверенной соли, в среде с рН от 4,5 до 10,0. При попадании в пищевые продукты, особенно в готовые блюда из сырых овощей, иерсинии быстро размножаются, создавая большую концентрацию бактерий. В процессе жизнедеятельности они выделяют токсичные вещества, особенно при низкой температуре, что приводит к накоплению не только микроорганизмов, но и продуктов их метаболизма – токсинов.

В клинической картине иерсиниоза наиболее постоянны симптомы поражения желудочно-кишечного тракта: боли в области живота, тошнота, реже рвота, жидкий стул. При псевдотуберкулёзе в начале болезни отмечаются жалобы на першение и неприятные ощущения в глотке, болезненность в области шейных и реже подчелюстных лимфатических узлов. На 2-4- й день болезни появляется сыпь (при псевдотуберкулзе – скарлатиноподобная, при иерсиниозе – полиморфная). При дальнейшем развитии болезни наблюдаются поражения различных органов и систем (аппендицит, гепатит, артрит). В тяжёлых случаях отмечается генерализованный процесс, который может закончиться гибелью больного.

Возбудителем иерсниоза является Yersinia enterocolitica - мелкая подвижная палочка, не образующая спор и окрашивающаяся отрицательно по Граму. Она относится к семейству Enterobacteriaceae. Иерсинии – грамотрицательные мелкие палочки с закруглёнными концами, полиморфные, длиной 1.8-1.5 мкм. Могут окрашиваться биполярно, особенно в мазках из бульонных культур или в препаратах из орагнов животных, погибших от заболевания. В мазках располагаются одиночно или короткими цепочками (2-4 клетки). Иерсинии подвижны при температуре ниже 25^оС и нгеподвижны при температуре 37^оС, в некоторых условиях образуют капсулу. Спору не образуют. Являются факультативными аэробами. Наиболее благоприятна для роста иерсиний температура от 22 до 26^оС.

При температуре 37^оС колонии возбудителей псевдотуберкулёза имеют неровный утончённый край, выпуклый бугристый центр коричневого цвета или исчерченную поверхность и волнистый край. Колонии возбудителей иерсиниоза обычно более гладкие, с волнистым или ровным краем.