Использование «ЦветЯуза» 01-аа

Подготовка прибора к работе сводится к следующим операциям:

• включается детектор, компьютер и насос;

• устанавливается расход элюента (для каждой аналитической задачи подбирается заранее в пределах 1,0 - 3,0 мл/мин.);

• для каждого ввода пробы рассчитывают суммарное содержание (мкг) антиоксидантов в объеме (мл) или в массе (г) анализируемого вещества в пересчете на используемый и разрешенный к применению в фармацевтических, медицинских и пищевых исследованиях стандарт-антиоксидант.

В качестве стандартов используют вещества по утвержденным нормативным документам (ГФ, ВФС, ФС, ГОСТ) близкие по строению и физико-химическим свойствам к биологически активным веществам, содержащимся в анализируемом препарате. Растворы стандартов (кверцетин, дигидрокверцетин, тролокс и др.) должны быть свежеприготовленными.

«ЦветЯуза» 01-АА работает следующим образом: перистальтический насос постоянно прокачивает подвижную фазу, забирая её из емкости, через всю систему. В дозируемую петлю крана-дозатора в положении «ввод» вводится стандартным шприцем на 1-2 мл исследуемый раствор. Поворотом ручки крана в положение «анализ» поток подвижной фазы направляет определенную дозу исследуемого раствора в амперометрическую ячейку. В ячейке на поверхности рабочего электрода происходит окисление молекул исследуемого вещества, при этом возрастает электрический ток между двумя электродами. Величина электрического тока зависит от природы анализируемого вещества, природы рабочего электрода и потенциала, приложенного к электроду.

Возникающие электрические токи очень малы (в пределах 10 ^-6 - 10 ^-9 А), эти сигналы усиливаются, а затем, с помощью АЦП, преобразуются в цифровой сигнал, который регистрируется на дисплее компьютера, в случае необходимости выходные результаты можно распечатать на принтере.

Рабочий электрод выполнен из стеклоуглерода, который наиболее универсален при определении полифенольных соединений. Потенциал может изменяться от -2 до +2 В, потенциалы ионизации фенольных соединений варьируются в пределах 100-1400 мВ.

В качестве подвижной фазы для водорастворимых веществ используется растворы неорганических кислот или их солей (1-5 мМ), а для жирорастворимых веществ используется смесь органического растворителя с небольшим количеством воды (5-10%). Для получения правильных результатов следуют разбавлять или растворять исследуемую пробу подвижной фазой. Пробу (такую как, например, экстракты, настои, вытяжки и т.п.) следуют разбавлять не менее чем в 100 раз и отфильтровывать.

Рекомендуется проводить 5 последовательных измерений сигналов (площади выходной кривой) стандартного вещества (например, кверцетин). За результат принимают среднее арифметическое значение из 5 измерений (СКО не более 5%). По полученным данным строят градуировочный график в координатах: X - сигнал стандартного вещества (площадь выходной кривой); Y - концентрация стандартного вещества, мг/дм³, описываемый уравнением: Y = аХ + Ь.

Далее проводят по 5 последовательных измерений сигналов (площади выходной кривой) исследуемых растворов. За результат принимают среднее арифметическое значение из 5 измерений (СКО не более 5%).

Расчет общего содержания природных полифенолов – антиоксидантов исследуемого образца проводят по градуировочному графику стандартного вещества. В случае необходимости полученную величину пересчитывают в мг/см³.

Общего содержание природных полифенолов - антиоксидантов определяют в экстрактах (вытяжках) лекарственных растений, в пищевых продуктах и напитках, содержащих флавоноиды (включая катехины, антоцианы), ароматические оксикислоты, таннины, дубильные вещества и другие.