Оцінка гуморального імунітету - стану в-системи

1. Визначення концентрації імуноглобулінів у сироватці (тест Манчіні)

Принцип полягає в тому, що досліджувану сироватку поміщають в лунки агару, який містить антитіла проти IgM, IgG або IgA у відомій концентрації. Імуноглобуліни дифундують в агар, у місцях їх взаємодії утворюються кільця преципітації, розмір яких в тісній залежності від кількості в сироватці імуноглобулінів. Рівень сироваткових імуноглобулінів залежить від функціонального стану В-системи імунітету, яка постійно перебуває в стані спонтанної стмуляції різними мікроорганізмами, харчовими антигенами тощо.

   2. Антитілоутворення після природної або штучної імунізації    Іншим показником фукціонування В-системи імунітету є дослідження рівня антитіл у крові досліджуваних без попередньої штучної імунізації: ізогемаглютинінів a і b, антистрептолізинів, антитіл до E. coli.    Для штучної імунізації можуть бути використані такі препарати: АКДП, бактеріофаг jХ174, фосфат полірибози та інш. Після введення антигену регулярно (не рідше як 1 раз на тиждень) протягом місяця визначають рівень сироваткових антитіл.

   3. Стимуляція біосинтезу імуноглобулінів В-лімфоцитами in vitro    У зв'язку з тим, що при імунізації можуть виникати ускладнення, останніми роками створилися умови визначення здатності синтезувати антитіла окремими клітинами. Мононуклеари, які виділені з крові, культивують in vitro з поліклональним активатором В-лімфоцитів - мітогеном лаконоса. У результаті стимуля ції В-лімфоцити, які були в суспензії мононуклеарних клітин, починають виробляти імуноглобуліни. Максимум їх продукції настає на 7 -12 день культивування.

Інший спосіб базується на підрахунку бляшкоутворюючих клітин проти еритроцитів барана, оскільки під час поліклональної стимуляції індукується продукція імуноглобулінів всіма клітинами, в тому числі і тими, які виробляють антитіла проти баранячих еритроцитів.

   4. Шкірні проби для виявлення гіперчутливості негайного типу    Результати оцінюють через 20 хв. після введення алергену в шкіру. Позитивною вважається проба, якщо з'являється пухирець діаметром не менше 5 - 7 мм.

5. Кількісні тести визначення в-лімфоцитів

   ЕА і ЕАС - розеткоутворення, Е розетки з еритроцитами мишей, використання моноклональних антитіл.

   Оцінка клітинного імунітету - стану Т-системи

1. Шкірні проби гіперчутливості сповільненого типу

   Показником гіперчутливості сповільненого типу, і, відповідно, реактивності системи Т-лімфоцитів є позитивні проби при внутрішньошкірному введенні певних антигенів. По-перше, це класична реакція Пірке, яка характеризується почервонінням, а іноді набряком у місці введення туберкуліну або його очищеного препарату РРD. Можна вводити правцевий, дифтерійний або стрептококові антигени.

2. Стимуляція лімфоцитів in vitro

  У певних ситуаціях лімфоцити крові після їх стимуляції in vitro збільшуються в розмірах і перетворюються на бластоподібні клітини, які активно синтезують ДНК. Як відомо, цей феномен називається бласттрансформацією лімфоцитів. Ви знаєте, що для цієї реакції використовують специфічні (антигени) і неспецифічні мітогени (ФГА, конканавалін А, мітоген лаконосу).

Максимально виражена реакція після антигенної стимуляції спостерігається на 4 - 5 добу після культивування, на неспецифі чні мітогени - на 3 добу. Порівняння результатів завжди проводять відносно нестимульованого контролю. Найкращий спосіб обліку реакції базується на здатності клітин, що діляться синтезувати ДНК. Підвищення мітотичної активності клітин ( Т- і В-лімфоцитів) можна визначити за зростанням синтезу ДНК, додаючи за 4 - 6 год. до кінця культивування мічені попередники ДНК (наприклад Н³ тимідин). Кількість захопленого клітинами ізотопу визначають за допомогою сцинтиляційного лічильника. Відношення величини включення Н³-тимідину в стимульованих культурах до величин включення Н³-тимідину в культурах без стимуляції відображає вираженість бластогенезу і називається індексом або коефіцієнтом стимуляції. Чим вищий цей показник, тим сильніше виражена РБТЛ. У нормальних умовах у здорових осіб індекс стимуляції становить 10 - 20 і вище.