2. Сефадекс г – 100. Приготовление геля для гель-хроматографии и заполнения колонки.

Сухой порошок сефадекса или акрилеса предварительно замачивают в избытке воды или буферного раствора в течение двух суток или кипятят около двух часов. Сухого порошка берут в соответствии с полным объёмом колонки и набухаемостью геля (см. таблицу 3). Например, сефадекса Г – 100 для колонки объёмом 60 см³ надо взять 60 см³/(15-20 см³/г) = 3-4 г.

Полученную взвесь геля заливают в колонку, в нижней части которой помещают тонкий слой стекловаты или паралона для удерживания гелевой фазы. Край на выходе колонки должен быть закрыт. Взвесь должна быть не очень густой, чтобы выходили пузырьки воздуха. После осаждения геля в колонке кран открывают и сливают избыток раствора. При необходимости вносят очередную порцию суспензии геля, при этом установившийся слой предыдущей порции геля осторожно перемешивают на глубину около 2 см для более гомогенного заполнения колонки. По окончании заполнения к колонке присоединяют резервуар с растворителем (0,1% раствор NaCl) и гель промывают несколькими объёмами. При промывке устанавливается оптимальная скорость протекания (см. раздел 8). После этого колонка готова для использования.

Для того чтобы граница геля в колонке не нарушалась и всегда оставалась ровной при различных манипуляциях, иногда на поверхность геля помещают кружок фильтровальной бумаги.

3. Стандартные растворы для определения азота. Химически чистый для анализа сульфат аммония (или хлористый аммоний) высушивают в эксикаторе до постоянной массы. Затем отвешивают 0,4716 г (или 0,3822 г хлористого аммония) и растворяют в 1 дм³ дистиллированной воды. 10 см³ полученного раствора, содержащего 1000 мкг азота, помещают в мерную колбу на 50 см³ и доводят водой до метки. Получается исходный стандартный раствор, содержащий 20 мкг азота в см³.

4. Реактив Фолина. В круглодонную колбу на 1,5-2,0 л вносят 100 г вольфрамовокислого натрия х.ч. (Na₂WO₄ 2H₂O), 25 г молибденовокислого натрия (Na₂MoO₄ 2H₂O), растворяют в 700 см³ дистиллированной воды. К раствору добавляют 50 см³ 85% ортофосфорной кислоты (H₃PO₄) и 100 см³ концентрированной соляной кислоты (36%). К колбе присоединяют обратный холодильник, и смесь кипятят на сетке в течение 10 час. После окончания кипячения в колбу добавляют 150 г сернокислого лития (Li₂SO₄ H₂O), 50 см³ дистиллированной воды и 0,5 см³ бромной воды. Смесь кипятят без холодильника 15 мин. под тягой для удаления избытка брома. Затем раствор охлаждают до комнатной температуры, доводят объём до 1 дм³, фильтруют и хранят на холоду в тёмной склянке с притёртой пробкой.

Определяют кислотность полученного раствора. Для этого 1 см³ реактива Фолина разводят в 10 раз и титруют 0,1 н раствором NaOH по фенолфталеину.

44