Министерство образования

Российской Федерации

Московский Государственный Университет

Пищевых Производств

Методические указания

к выполнению лабораторных работ

по курсу ''Теоретические основы биотехнологии''.

Раздел 2. Биохимические основы синтеза белков и биологически

активных веществ.

Часть I. Белки.

Л.А.Иванова, Ю.А.Тырсин, И.М.Грачёва, С.Н.Бутова, И.А.Типисева, В.В.Матрёничева.

Утверждено методической

комиссией 2001 года.

Москва, 2001г.

Оглавление

стр.

Введение……………………………………………………………………. 3-4

I. Лабораторная работа 1

''Определение содержания сырого протеина и истинного белка в

дрожжах. Выделение белков из дрожжей''…………………………………5

1.1. Выделение белков из биомассы микроорганизмов………………………. 5-6

1.2. Принцип выделения белков из биомассы дрожжей Saccharomyces

cerevisiae……………………………………………………………………. 7-8

1.3. Определение содержания влаги в образцах………………………………..8-10

1.4. Определение общего азота………………………………………………….10-15

1.5. Определение ''сырого протеина''……………………………………………16

1.6. Определение белка…………………………………………………………..16

1.6.1. Определение белка по ультрафиолетовому поглощению………………...17-18

1.6.2. Определение белка по методу Лоури……………………………………....18-22

1.6.3. Микрометод определения белка с помощью биуретовой реакции………23

II. Лабораторная работа 2

''Изучение некоторых физико – химических свойств дрожжевых белков.

Диализ и реакции осаждения''………………………………………………24

2.1. Осаждение белков………………………………………………………...…24

2.1.1. Обратимое и необратимое осаждение белков…………………………..…24-25

2.1.2. Методы осаждения белков……………………………………………….... 19-21

2.2. Фракционирование белков с помощью диализа………………………...…21-23

III. Лабораторная работа 3.

''Фракционирование дрожжевых белков методом гель – фильтрации''.….24-28

IV. Лабораторная работа 4.

''Определение молекулярной массы отдельных фракций дрожжевых

альбуминов и глобулинов методом гель – хроматографии в тонком слое……………………………………………………………………….…..28-31

Приложение……………………………………………………………….....43-44

Введение

Белки, или протеины, важнейший класс биологически активных веществ, это важнейшие биополимеры, которые синтезируются в соответствии с генетической программой, заложенной в нуклеиновых кислотах. Играя ключевую роль в клетке, белки присутствуют в виде главных компонентов в любых формах живой материи, будь то микроорганизмы, животные или растения, и, благодаря своим каталитическим действиям, обеспечивают протекание всех процессов жизнедеятельности организмов.

В настоящее время трудно оценить общее число белков во всей живой природе, существует почти миллиард химически индивидуальных белков, лишь в клетке Escherichia coli содержится более 3000 различных белков, молекулярная масса которых варьирует от 5-10 тыс. до 1 млн. и более.

Отсутствие хотя бы одной незаменимой кислоты в экзогенном источнике питания приводит к функциональным нарушениям жизнедеятельности организма и к его гибели. Наличие всех незаменимых аминокислот в кормах сельскохозяйственных животных очень важно.

В последнее время возникло новое направление в производстве пищевых продуктов, а именно, обогащение их белком, создание новых видов пищи, основную часть которых составляет пищевой белок, получаемый на основе растительного, животного и микробного белка. Наиболее доступны и экономически выгодны белки одноклеточных: дрожжей, бактерий, грибов и водорослей. В дрожжах содержится 40-55% белка, который усваивается человеком на 85-88%, в зелёных и сине - зелёных водорослях – 45-60% белка, в водородных бактериях – 65-70%.

Следует отметить, что кормовые дрожжи содержат достаточно большое количество хорошо усвояемого белка, содержащего все незаменимые аминокислоты. В связи с этим, кормовые дрожжи являются полноценным белково - витаминным концентратом, однако качество его может значительно варьировать в зависимости от штамма дрожжей, условий культивирования, субстрата и других факторов.

Для оценки качества различных продуктов, определения их белкового и аминокислотного состава, что является одним из главных показателей из пищевой или кормовой ценности, проводят биохимические исследования этих продуктов.