Порядок виконання роботи

РОБОТА 1. РОЗДІЛЕННЯ БІЛКІВ ПШЕНИЦІ НА ОКРЕМІ ФРАКЦІЇ

ЗАЛЕЖНО ВІД РОЗЧИННОСТІ

Найціннішою складовою частиною зерна є білки. Вони повноцінні за амінокислотним складом, однак мають низький вміст лізину. Білки зернових нерівномірно розподілені між анатомічними частинами зерна. Значна кількість білка міститься в ендоспермі (65…75 %), на алейроновий шар припадає

20 % білка, на зародок – 10 %. Білки ендосперму та алейронового шару

представлені різноманітними фракціями, білки зародку – в основному каталітичними білками (альбумінами та глобулінами). Альбумінові та глобулінові фракції білків пшениці різнорідні, проявляють або каталітичну активність, або властивості інгібіторів ферментів. В кількісному відношенні основними білками пшениці є дві фракції, що здатні утворювати клейковину - гліадин (проламіни пшениці) та глютенін (глутеліни пшениці).

Прилади, обладнання, матеріали: скляна воронка, порцелянова ступка, пестик, фільтрувальний папір, технічні ваги, годинник, центрифуга, конічна колба місткістю 150…200 см³, пробірки, піпетка місткістю 1 см³, циліндр місткістю 10 см³, водяна баня, термометр, зразок борошна, дистильована вода,

10 %-й та насичений розчини хлориду натрію, сухий тонкоподрібнений порошок сульфату амонію, 0,2 %-й розчин гідроксиду натрію,

_{0,1моль/дм}³ _{розчин оцтової кислоти, біуретовий реактив (15 см}³

10 моль/дм³ розчину гідроксиду калію та 25 г сегнетової солі, яку беруть з похибкою ± 0,01г, розчиняють приблизно в 900 см³ дистильованої води в мірній колбі місткістю 1000 см³;повільно додають під час постійного перемішування 30 см³ 4 %-го розчину CuSO₄, відміряних циліндром, та доводять об’єм колби до мітки дистильованою водою).

Виділення білків пшениці, розчинних у воді. 2 г пшеничного борошна розтирають у фарфоровій ступці з 10 см³ дистильованої води. Отриману суміш залишають у спокої на 2…3 хв, потім відфільтровують. Залишок борошна промивають два рази невеликими порціями дистильованої води та залишають для подальшого вилучення глобулінів пшениці. Отриманий фільтрат використовують під час дослідження розчинності альбумінів пшениці.

До фільтрату альбумінової фракції білків додають сухий

тонкоподрібнений порошок сульфату амонію під час нагрівання (не вище

40 °С) до повного насичення (до припинення розчинення сульфату амонію).

Осад, що випав у вигляді альбумінової фракції білків пшениці,

відфільтровують. Осад на фільтрі розчиняють в 1 см³ дистильованої води. В

_{отриманому розчині підтверджують наявність білків, додавши до нього}

_{1 см}³ _{біуретового реактиву.}

Виділення білків пшениці, розчинних у солях. Промитий водою залишок борошна (після вилучення альбумінової фракції білків) розтирають у ступці з 10 см³ 10 % -го розчину хлориду натрію, залишають у спокої на

2…3 хв та відфільтровують. Залишок борошна промивають два рази невеликими порціями свіжого розчину хлориду натрію та залишити для подальших дослідів. Отриманий фільтрат використовують під час дослідження розчинності глобулінів пшениці.

До фільтрату додають однаковий об’єм насиченого розчину хлориду натрію, досягнувши таким чином напівнасичення. Осад, що випав у вигляді глобулінової фракції білків пшениці, відфільтровують. Осад розчиняють на фільтрі в 1 см³ 10 %-го розчину хлориду натрію. Проводять реакцію з біуретовим реактивом.

Виділення білків пшениці, розчинних у лугах. Залишок борошна (після вилучення альбумінової та глобулінової фракцій білків) розтирають у фарфоровій ступці з 10 см³ 0,2 % розчином гідроксиду натрію, залишають у спокої на 2…3 хв та відфільтровують. До фільтрату додають по краплям

0,1 моль/дм³ розчин оцтової кислоти. Осад, що випав, являє собою глютенін

(глутеліни пшениці).

Дану роботу зручно виконувати, якщо представити її у вигляді такої модифікованої схеми:

2 г пшеничного борошна + 10 см³ дистильованої води розтерти у фарфоровій ступці

залишити у спокої на 2…3 хв