
- •Раздел 6 «Проведение лабораторных биохимических исследований по определению показателей липидного обмена»
- •Раздел 7 «Проведение лабораторных биохимических исследований по определению показателей водно-минерального обмена, кислотно-основного состояния»
- •Список сокращений:
- •Содержание.
- •Занятие № 1. Тема: Определение триглицеридов в сыворотке крови.
- •Химия липидов.
- •Занятие № 2. Тема: Определение общего холестерина в сыворотке крови.
- •Занятие № 3. Тема: Определение холестерина липопротеидов высокой плотности в сыворотке крови.
- •Занятие № 4. Тема: Определение липопротеидов методом электрофореза и расчет содержания хс в различных классах лп. Типирование гиперлипопротеидемий.
- •Занятие № 5. Тема: Определение содержания кальция в сыворотке крови.
- •Занятие № 6. Тема: Определение содержания железа в сыворотке крови.
- •Занятие № 7. Тема: Определение содержания натрия, калия, хлоридов в сыворотке крови.
- •Занятие № 8. Тема: Исследование кислотно-основного состояния крови.
- •Занятие № 9. Тема: Анализ результатов исследований минерального обмена.
- •Внешний вид сыворотки.
- •Общие липиды
- •Триглицериды
- •Определение триглицеридов в сыворотке крови с ацетилацетоном.
- •Определение тг ферментативным методом.
- •Бета-липопротеиды
- •Холестерин
- •Определение общего холестерина по методу Илька.
- •Ферментативный метод определения холестерина.
- •Холестерин - лпвп
- •Методы определения хс-лпвп. Метод с осаждением.
- •Лпвп-иммуно.
- •Фосфолипиды
- •Определение общих фосфолипидов в сыворотке крови по содержанию общего фосфора.
- •Аполипопротеин а1.
- •Аполипопротеин в.
- •Липопротеид (а)
- •Методы исследования минерального обмена. Кальций.
- •Определение кальция в биологических жидкостях химическим методом.
- •Железо.
- •Методы определение железа.
- •Батофенантролиновый метод определения содержания железа в сыворотке крови.
- •Определение с феррозином.
- •Определение общей железосвязывающей способности.
- •Натрий.
- •Химический метод определения натрия (набор реактивов фирмы «Ольвекс»).
- •Химический метод определения калия (набор реактивов фирмы «Ольвекс»).
- •Хлориды
- •Химический метод определения хлоридов (по набору реактивов фирмы «Ольвекс»)
- •Фосфор.
- •Определение фосфора колориметрическим методом
Химический метод определения калия (набор реактивов фирмы «Ольвекс»).
Принцип метода:
В результате реакции между ионами калия и тетрафенилбората образуется стабильная суспензия. Мутность суспензии пропорциональна концентрации ионов калия.
Исследуемый материал: сыворотка крови, плазма.
Ход определения:
№ |
Реактивы |
Опытная проба |
Стандартная проба |
Контроль |
1. 2.
3. 4. |
Монореагент Сыворотка крови (или плазма) Стандартный раствор Дистиллированная вода |
2,00 0,05
- - |
2,00 -
0,05 - |
2,00 -
- 0,05 |
Сыворотку, стандартный раствор и воду медленно введите в монореагент без перемешивания, через 1,5-2 минуты перемешайте и инкубируйте точно 10 минут при 18-25ºС. Перед фотометрированием пробы энергично перемешайте. Измерьте оптическую плотность опытной и стандартной проб против контрольной пробы при длине волны 570-590 нм в кювете 5 мм.
Расчет результатов:
|
Dо |
|
Концентрация калия = |
------- |
* Cст |
|
Dст |
|
Повышение концентрации может наблюдаться при:
Массивном парентеральном введении калия;
Недостаточности коры надпочечников;
Уменьшении выделения калия через почки при почечной недостаточности;
При повреждении, омертвлении тканей: обширный некроз, внутрисосудистый гемолиз, ожоги, опухоли, тяжелые травмы и т.д.
Снижение концентрации:
Недостаточное поступление (чаще всего у больных после хирургического вмешательства, получающих питание через зонд);
Потеря калия через желудочно-кишечный тракт: длительный понос, рвота;
Потеря калия через почки при почечной недостаточности, лечении диуретиками, гипотензивными препаратами;
При гиперальдостеронизме;
После введения инсулина за счет перемещения калия в клетки;
Повышенное потоотделение.
Хлориды
Хлор - основной анион, компенсирующий влияние катионов, в первую очередь натрия, во внеклеточной жидкости. В физиологических условиях изменения концентрации хлора вторичны к изменениям других электролитов и направлены в первую очередь на создание электронейтральности среды: когда повышается натрий, то увеличивается хлор. Присутствует в виде солей натрия, калия, кальция и магния. Наряду с перечисленными катионами анионы хлора являются наиболее важными и осмотически активными ионами плазмы крови, лимфы и других жидкостей.
Нормальное содержание хлора - 95-110 ммоль\л.
Определение содержания хлора в биологических жидкостях проводится следующими методами:
Титрометрический метод;
Химический метод;
Использование анализатора с ион-селективной мембраной.
Химический метод определения хлоридов (по набору реактивов фирмы «Ольвекс»)
Принцип метода:
В присутствии ионов хлора в кислой среде тиоцианат ртути образует тиоцианат-ионы, формирующие окрашенный комплекс с Fe3+. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации хлорид-ионов в пробе.
Исследуемый материал:
Сыворотка крови (без гемолиза);
Плазма гепаринизированная;
Моча, разбавленная в 2 раза дистиллированной водой.
Реактивы:
Реагент №1 содержит тиоцианат ртути;
Стандартный раствор хлоридов;
Реагент № 2 нитрат железа.
Подготовка реагентов к процедуре анализа:
Для приготовления рабочего раствора реагента необходимо смешать реагент № 1 и реагент № 2 в соотношении 9:1.
Ход определения:
№ |
Реактивы (мл) |
Опытная проба |
Стандартная проба |
Контроль |
1. 2. 3. 4. |
Рабочий реагент Исследуемый материал Стандартный раствор Дистиллированная вода |
2,00 0,01 - - |
2,00 - 0,01 - |
2,00 - - 0,01 |
Пробы тщательно перемешайте и выдержите 5 минут при 20-25ºС. Опытные и стандартные пробы фотометрируют против контроля при длине волны 540 нм в кювете 5 мм.
Расчет результатов:
|
Dо |
|
Со = |
----- |
* Cст |
|
Dст |
|
Сст = 100 ммоль/л
Увеличение содержания ионов хлора в сыворотке крови отмечается при:
Нарушении водного баланса: обезвоживание, вызванное недостаточным поступлением в организм жидкости, гипервентиляция;
Заболевания почек: ОПН, нефропатия, воспалительные заболевания почек;
Нарушение функции сердечно-сосудистой системы: глубокое нарушение сердечной деятельности, несахарный диабет.
Уменьшение концентрации ионов хлора в сыворотке крови выявляется при:
Усиленном потреблении воды;
Задержке воды в организме вследствие нарушения выделительной функции почек;
В послеоперационном периоде;
Потере хлора при неукротимой рвоте, длительном поносе;
Тяжелых инфекционных заболеваниях.