Определение общей железосвязывающей способности.

Принцип метода:

Трансферрин в сыворотке крови связывает ионы Fe³⁺ до 1/3 своего объема. Для полного насыщения трансферрина добавляют в сыворотку избыточное количество ионов Fe³⁺. Не связанные ионы выделяют из раствора при помощи карбоната магния. Концентрацию железа в супернатанте определяют с феррозином и судят об ОЖСС.

Исследуемый материал: сыворотка крови.

Ход определения:

№	Реагенты	Опытная проба
1. 2.	Сыворотка крови (или плазма) Насыщающий раствор	0,5 1,0
Тщательно перемешать и через 5 минут добавить:
3.	Карбонат магния	1 ложечку

Выдержать 30 минут при комнатной температуре, встряхивая каждые 5-10 минут. Центрифугировать 10 минут при 3000 об/мин.

Провести определение концентрации железа в супернатанте по реакции с феррозином.

Нормальное значение ОЖСС – 50-72 мкмоль/л.

Увеличение содержания сывороточного железа наблюдается при:

• Гемохроматозе (нарушении ограничения всасывания железа);

• Нарушении включения железа в гем (при сидероахристической анемии, свинцовой интоксикации);

• Поражении печени (острый гепатит, острый некроз печени).

Уменьшение содержания сывороточного железа наблюдается при:

• Нарушении поступления железа;

• Заболеваниях желудочно-кишечного тракта (гастриты с пониженной кислотностью, поражения кишечника);

• Железодефицитной анемии.

Натрий.

Натрий - основной внеклеточный катион. Вместе и ионами хлора обуславливает осмотическую активность плазмы и других биологических жидкостей. Ионы натрия обеспечивают перенос воды в организме, особенно в почках. Концентрация этих ионов в плазме во многом зависит от секреции в кровь минерало- и глюкокортикоидов, оказывающих влияние на реабсорбцию ионов натрия через стенку канальцев почек. Главные гуморальные механизмы, отвечающие за состояние водно-натриевого обмена – система ренин-ангиотензин-альдостерон-вазопрессин.

Концентрация ионов натрия в плазме во многом определяется и состоянием водного баланса: при потере воды она возрастает и, наоборот, при «перегрузке» организма водой снижается. Концентрация ионов натрия в плазме крови здоровых людей 130-156 ммоль\л.

Определение натрия в биологических жидкостях проводится:

• Методом пламенной фотометрии;

• С помощью ион-селективных электродов;

• Химическим методом.

Химический метод определения натрия (набор реактивов фирмы «Ольвекс»).

Принцип метода:

Содержащийся в образце натрий связывается осаждающим реагентом. Оставшиеся в растворе ионы осадителя образуют окрашенный комплекс с тиогликолятом. Концентрация натрия пропорциональна разности между контрольной (без преципитации) и опытной пробами.

Исследуемый материал: сыворотка крови.

Реактивы:

1. Реагент № 1,осаждающий реагент.

2. Реагент № 2, тиогликолят аммония.

3. Стандартный раствор – 150 ммоль/л.

Ход определения:

№	Реактивы	Опыт	Стандарт	Контроль
1. 2. 3. 4.	Осаждающий реагент Сыворотка крови Стандартный раствор Бидистиллированная вода	1,00 0,02 - -	1,00 - 0,02 -	1,00 - - 0,02
Пробы тщательно перемешивают, через 5 минут снова перемешивают (не менее 30 секунд) и инкубируют 30 минут в темноте. Центрифугируют все пробы при 900 об/мин в течение 10 минут. Для дальнейшего анализа используется супернатант.
5. 6.	Супернатант Тиогликолят натрия	0,02 2,00	0,02 2,00	0,02 2,00

Измерьте оптическую плотность опытной, стандартной и контрольной проб против воды при длине волны 365 или 405 нм. Окраска стабильна 25 минут после окончания инкубации (при предохранении от солнечного света).

Расчет результатов:

	Dк – Dо
Со =	------------	* Cст
	Dк – Dст

С_ст = 150 ммоль/л

Обратите внимание: интенсивность окраски обратно пропорциональна концентрации натрия в исследуемом образце.

Увеличение содержания натрия наблюдается при:

Относительного характера при потере воды или сниженном поступлении воды в организм.

Абсолютного характера при:

• Повышенном поступлении натрия в организм;

• Гиперальдостеронизме;

• Пониженном выведении через почки (почечная недостаточность);

• Несахарном диабете.

Уменьшении содержания натрия наблюдается при:

Относительного характера при повышенном парентеральном поступлении жидкости.

Абсолютного характера:

• Пониженное поступление натрия;

• Потеря натрия через желудочно-кишечный тракт (рвота, понос);

• Потеря натрия через почки при полиурической фазе; острой почечной недостаточности, лечении диуретиками;

• Недостаточности коры надпочечников;

• Чрезмерное потоотделение.

КАЛИЙ.

Калий - основной внутриклеточный катион. Во внеклеточной жидкости находится менее 2% общего количества калия организма. Возбудимость нервных и мышечных клеток требует поддержания концентрации калия в плазме и интерстициальной жидкости в пределах достаточно узкого диапазона концентрации. Так, при гиперкалиемии сердце может остановиться в диастолу, а при гипокалиемии - в систолу. Уровень калия в клетке зависит от активности метаболических процессов, состояния КОС. Недостаточность калия в организме в первую очередь проявляется на уровне внутриклеточных миофибрилл и митохондрий. Концентрация калия в крови не отражает его запасов в организме, гипокалиемия - свидетельство тяжелого дефицита калия.

Нормальное содержание калия - 3,6-53 ммоль\л.

Определение калия в биологических жидкостях проводится также как и натрия.

• Методом пламенной фотометрии;

• С помощью ион-селективных электродов;

• Химическим методом.