Методы определение железа.

1. Батофенантролиновый метод;

2. Определение с феррозином.

Батофенантролиновый метод определения содержания железа в сыворотке крови.

Принцип метода:

Определение содержания сывороточного железа основана на его предварительном освобождении из белкового комплекса и последующем проведении цветной реакции с батофенантролином.

Материал для исследования: сыворотка крови.

Реактивы:

1. Стандартный раствор железа;

2. Батофенантролин;

3. Тиогликолевая кислота;

4. Раствор для осаждения белков.

Приготовление реактива:

Для приготовления раствора для осаждения белков в мерную колбу на 100 мл отмеряют 3 м тиогликолевой кислоты и добавляют до метки раствором для осаждения белков.

Ход определения:

№	Реактивы (мл)	Проба	Стандарт	Контроль
1. 2. 3. 4.	Сыворотка Стандартный раствор железа Раствор для осаждения белков Бидистиллированная вода	1,0 - 1,0 -	- 0,5 0,5 -	- - 0,5 0,5
Перемешивают пробу и через 5 минут центрифугируют при 3000 об/мин.
5. 6.	Надосадочная жидкость Батофенантролин	1,0 2,0	- 2,0	- 2,0

В пределе от 5 до 60 минут измеряют оптическую плотность опытной пробы и стандарта против контроля при длине волны 540 нм в кювете 5 мм.

Расчет результатов:

	Dо
Железо в пробе мкмоль/л =	------------	* Cст
	Dст

Определение с феррозином.

Принцип метода:

Железо, связанное в крови с трансферрином, освобождается хлоргидратом изанидина и восстанавливается аскорбиновой кислотой до ионов Fe²⁺. Ионы Fe²⁺ вступают в реакцию с хромогеном, образуя окрашенный комплекс. Интенсивность окраски образовавшегося соединения пропорциональна концентрации железа в пробе.

Материал для исследования: сыворотка крови.

Реактивы:

1. Буфер;

2. Хромоген;

3. Таблетки, содержащие аскорбинат натрия и тиомочевину;

4. Стандартный раствор железа.

Приготовление реактивов:

Реагент А: во флакон с буфером добавить 1 таблетку реагента.

Реагент В: во флакон с буфером добавить 1 таблетку реагента, 1 мл хромогена.

Ход определения:

№	Реагенты	Контроль	Опыт	Стандарт	Холостая проба
1. 2. 3. 4. 5.	Реагент А Реагент В Сыворотка Стандартный раствор железа Дистиллированная вода	- 2,00 - - 0,04	- 2,00 0,04 - -	- 2,00 - 0,04 -	2,00 - - 0,04 -

Содержимое пробирок тщательно перемешать. Инкубировать 5 минут при температуре 37ºС. Измеряют оптическую плотность опытной пробы и стандарта против контроля и холостой пробы против реагента А в течение 30 минут.

Расчет результатов:

Δ D_пробы = D_пробы – D_{холостой пробы}

Δ D_ст = D_ст – D_{холостой пробы}

	Δ Dпробы
Концентрация железа =	------------	* Cст
	Δ Dст

С_ст = 17,9 ммоль/л