- •Раздел 6 «Проведение лабораторных биохимических исследований по определению показателей липидного обмена»
- •Раздел 7 «Проведение лабораторных биохимических исследований по определению показателей водно-минерального обмена, кислотно-основного состояния»
- •Список сокращений:
- •Содержание.
- •Занятие № 1. Тема: Определение триглицеридов в сыворотке крови.
- •Химия липидов.
- •Занятие № 2. Тема: Определение общего холестерина в сыворотке крови.
- •Занятие № 3. Тема: Определение холестерина липопротеидов высокой плотности в сыворотке крови.
- •Занятие № 4. Тема: Определение липопротеидов методом электрофореза и расчет содержания хс в различных классах лп. Типирование гиперлипопротеидемий.
- •Занятие № 5. Тема: Определение содержания кальция в сыворотке крови.
- •Занятие № 6. Тема: Определение содержания железа в сыворотке крови.
- •Занятие № 7. Тема: Определение содержания натрия, калия, хлоридов в сыворотке крови.
- •Занятие № 8. Тема: Исследование кислотно-основного состояния крови.
- •Занятие № 9. Тема: Анализ результатов исследований минерального обмена.
- •Внешний вид сыворотки.
- •Общие липиды
- •Триглицериды
- •Определение триглицеридов в сыворотке крови с ацетилацетоном.
- •Определение тг ферментативным методом.
- •Бета-липопротеиды
- •Холестерин
- •Определение общего холестерина по методу Илька.
- •Ферментативный метод определения холестерина.
- •Холестерин - лпвп
- •Методы определения хс-лпвп. Метод с осаждением.
- •Лпвп-иммуно.
- •Фосфолипиды
- •Определение общих фосфолипидов в сыворотке крови по содержанию общего фосфора.
- •Аполипопротеин а1.
- •Аполипопротеин в.
- •Липопротеид (а)
- •Методы исследования минерального обмена. Кальций.
- •Определение кальция в биологических жидкостях химическим методом.
- •Железо.
- •Методы определение железа.
- •Батофенантролиновый метод определения содержания железа в сыворотке крови.
- •Определение с феррозином.
- •Определение общей железосвязывающей способности.
- •Натрий.
- •Химический метод определения натрия (набор реактивов фирмы «Ольвекс»).
- •Химический метод определения калия (набор реактивов фирмы «Ольвекс»).
- •Хлориды
- •Химический метод определения хлоридов (по набору реактивов фирмы «Ольвекс»)
- •Фосфор.
- •Определение фосфора колориметрическим методом
Определение кальция в биологических жидкостях химическим методом.
Принцип метода:
Кальций образует с глиоксаль-бис-2-оксианилом в щелочной среде комплекс красного цвета, который определяют фотометрически.
Материал для исследования: сыворотка крови.
Реактивы:
Раствор едкого натра;
Метанол;
Глиоксаль-бис-2-оксианил;
Стандартный раствор кальция.
Приготовление реактива:
Глиоксаль-бис-2-оксианил растворяют в метаноле.
Ход определения:
Отмерить (мл) |
Проба |
Эталон |
Контроль раствор |
Дистиллированная вода Сыворотка крови Калибровочный раствор Раствор едкого натра |
1,00 0,02 - 0,50 |
1,00 - 0,02 0,50 |
1,02 - - 0,50 |
Перемешивают и спустя 5-10 минут добавляют |
|||
Раствор глиоксаль-бис-2-оксианила |
2,00 |
2,00 |
2,00 |
Перемешивают и между 5-ой и 15-ой минутой после добавления раствора глиоксаль-бис-2-оксианила измеряют оптическую плотность пробы (Dо) и эталона (Dст) против контрольного раствора. Длина волны 520-550 нм, кювета 1 см. |
|||
Расчет результатов:
Dо
Кальций (ммоль/л) = ------ * Сст
Dст
Сст= 2,5 ммоль/л
Предупреждение:
Лабораторная посуда, применяемая при определении кальция, должна быть совершенно чистой и служить исключительно для данной цели. После обычного мытья посуду следует поместить на ночь в 2% раствор комплексона 3 в аммиачной воде 1+1, потом тщательно промыть бидистиллированной водой и высушить.
Меры предосторожности по ходу работы:
В реактиве 1 содержится хлористоводородная кислота, в реактиве 3 – натрия гидроокись, оба – едкие вещества. В реактиве 4 содержится метиловый спирт – особо опасный яд и горючее вещество.
Увеличение содержания кальция происходит при:
Физиологической гиперкальциемии, наблюдается у новорожденных, а также у недоношенных детей;
Избыточном введении в организм ребенка витамина Д (передозировка);
Злокачественных опухолях с метастазированием в кости и без метастазирования;
Гиперфункции паращитовидных и щитовидной желез;
Акромегалии, гигантизме и т.д.
Уменьшение содержания кальция наблюдается при:
Спазмофилии у детей;
Рахите;
Гипопаратиреоидизме (обычно после случайного удаления во время операции на щитовидной железе);
Хронической почечной недостаточности.
Железо.
Железо в организме входит в состав порфириновых соединений, главным образом, гемоглобина и миоглобина, в небольших количествах оно включается в состав цитохромов, некоторых ферментов. Железо в сыворотке связывается белком трансферрином. Концентрация железа в сыворотке зависит от резорбции в желудочно-кишечном тракте, накопления в кишечнике, селезенке и костном мозге, от синтеза и распада гемоглобина и его потери организмом. Средние показатели железа ниже у женщин, чем у мужчин, но у тех и у других с возрастом показатель железа падает. Концентрация железа имеет суточный ритм, а у женщин - связь с менструальным циклом. При беременности содержание железа в организме уменьшается, особенно во второй половине беременности.
Нормальное содержание железа:
у женщин -14-21,5 мкмоль\л,
у мужчин - 14-26,0 мкмоль\л.