Триглицериды

Нейтральные жиры, т.е. ТГ поступают с пищей (экзогенные ТГ) и синтезируются в организме (эндогенные ТГ). Последние образуются в жировой ткани, печени, главным образом из углеводов. ТГ являются главной формой накопления жирных кислот и фактически основным источником энергии у людей. ТГ накапливаются в жировых клетках, откуда после гидролиза до глицерина и жирных кислот освобождаются в систему циркуляции. Уровень нейтральных жиров в сыворотке крови повышен при увеличении пре-бетаЛП (при высокоуглеводной пище) или при образовании ХМ (после приема пищи).

Определение уровня ТГ необходимо для типирования ГЛП и оценки риска инфаркта миокарда.

ТГ являются структурными компонентами ЛП, которые необходимо разрушить, чтобы сделать липиды доступными для химических или ферментативных реакций. Для оценки содержания ТГ определяют глицерин, освободившийся после гидролиза ТГ.

Для определения ТГ обычно используется сыворотка крови. Забор крови осуществляется после обязательного 12-16 часового голодания. Исследование должно быть проведено немедленно, однако, если отделить сыворотку от сгустка и заморозить, то проведение анализа можно отложить.

Существует 3 метода для определения ТГ:

1. химический – с ацетилацетоном

2. ферментативный

3. метод «сухой химии»

Определение триглицеридов в сыворотке крови с ацетилацетоном.

Принцип метода:

Триглицериды омыляются едким кали с образованием глицерина, при окислении которого образуется формальдегид.

Реактив, содержащий ацетилацетон, взаимодействует с формальдегидом с образованием 3,5-диацетил-1,4-дигидролутидина, окраску которого измеряют.

Материал для исследования:

1. Сыворотка крови;

2. Плазма (антикоагулянт – ЭДТА).

Реактивы:

1. Изопропанол;

2. Адсорбент;

3. Раствор КОН;

4. Окислительный раствор;

5. Реактив, содержащий ацетилацетон;

6. Стандартный раствор триглицеридов.

Ход определения:

№	Реактивы		Раствор сравнения		Эталон		Проба
1. 2. 3. 4.	Дистиллированная вода (мл) Эталонный раствор (мл) Сыворотка крови (мл) Изопропанол (мл)		0,1 - - 4,0		- 0,1 - 4,0		- - 0,1 4,0
Перемешивают и добавляют с помощью мерной ложечки
5.	Адсорбент (г)		0,4		0,4		0,4
Встряхивают (10-15 мин), центрифугируют 5 мин. при 3000 об/мин.
6. 7.	Супернатант (мл) Раствор КОН (мл)	2,0 0,5		2,0 0,5		2,0 0,5
Содержимое пробирок перемешивают, пробирки закрывают пробками, инкубируют 5-10 мин. при температуре 60º±2ºС. После этого охлаждают в холодной воде и добавляют
8.	Окислительный раствор (мл)		0,5		0,5		0,5
Содержимое пробирок после добавления окислительного раствора немедленно перемешивают и оставляют стоять при комнатной температуре 10 мин. Добавляют:
9.	Реактив (мл)

Содержимое пробирок перемешивают, неплотно закрывают пробками и раствор инкубируют точно 30 мин. при температуре 60º±2ºС. После охлаждения измеряют оптическую плотность пробы и эталона против раствора сравнения в кювете 0,5 см при длине волны 410 нм.

Расчет результатов:

По оптической плотности пробы D_о и эталона D_ст рассчитывают содержание ТГ (х) в ммоль/л пробы по формуле:

	Dо
С =	--------------	* Сст
	Dст

С_ст = 3,39 ммоль/л

Коэффициенты пересчета мг/дл * 0,113 = моль/л

ммоль/л * 88,55 = мг/дл

Примечания:

Экстракцию проводят в центрифужных пробирках, закрытых полиэтиленовыми или стеклянными пробками.

Адсорбент дозируют с помощью мерной ложечки, входящей в набор (около 0,4 г).

Омыление и прочие реакции проводят в тонкостенных пробирках объемом 15 мл, неплотно закрытых пробками.

Проведение испытания можно приостановить до следующего дня в стадии омыления КОН (после охлаждения пробирки необходимо хорошо закрыть, чтобы раствор не испарялся), но проведение испытания во времени при окислительной и цветной реакциях необходимо строго соблюдать.

Если проба хранится при температуре -20ºС, содержание ТГ в плазме остается неизменным в течение 8 недель.

При длительном хранении при комнатной температуре липаза сыворотки разлагает ТГ на свободные жирные кислоты.

До приобретения определенного опыта рекомендуется проводить дублированный анамнез. В одной серии должно обрабатываться не более 20 проб.

Применяемая посуда должна быть очищена от жирных загрязнений и синтетических моющих средств.

Если полученные величины превышают 4,5 ммоль/л, сыворотку разводят водой в соотношении 1:1 (а результат умножают на 2).

Отбор пробы для определения ТГ должен проводиться после не менее чем 14-часового воздержания от пищи. Слабый гемолиз не влияет на определение.