2. Химический метод расщепления полипептидной цепи белка по остатку Met
Среди химических методов фрагментации белков наиболее специфичным и чаще всего применяемым является расщепление бромцианом по остаткам метионина. Метод разработан в 1961 г. Э. Гроссом и Б. Виткопом и по избирательности действия не имеет себе равных. Реакция с бромцианом проходит с образованием промежуточного циансульфониевого производного метионина, спонтанно превращающегося в кислых условиях в иминолактон гомосерина, который, в свою очередь, быстро гидролизуется с разрывом иминной связи. Получающийся на С-конце пептидов лактон гомосерина далее частично гидролизуется до гомосерина (HSer), в результате чего каждый пептидный фрагмент, за исключением С-концевого, существует в двух формах — гомосериновой и гомосеринлактоновой.
Реакцию обычно проводят при комнатной температуре в течение 15—30 ч в сильнокислой среде (чаще всего в 70%-ной муравьиной кислоте) при 100-кратном избытке бромциана на каждый остаток метионина. В этих условиях связи, образованные остатками метионина, обычно расщепляются на 90—100%. Исключение составляют связи метионина с серином и треонином, расщепляющиеся лишь частично. В условиях обработки белка бромцианом может иметь место частичный гидролиз связи Asp—Pro, неустойчивой в кислой среде.
3. Кросс-сшивающие реагенты, их классификация. Задачи, решаемые с помощью них
Билет 4
1. Пептидные антибиотики и пептиды-иммунорегуляторы
Итак, благо у пептидов и белков есть много разных функций, есть у них и функции, имеющие отношение к иммунитету и вообще защите организма от всякого.
Т.о., есть в природе куча пептидов-антибиотиков: амебопоры, цекропины, протегрины, магейнины, грамицидины, дефенсины и прочая, прочая…
Есть всякие иммуноактивные пептиды, как то:
1) тафцин (тетрапептид Thr—Lys—Pro—Arg, являющийся фрагментом СН2-домена IgG, противоопухолевый и антибактериальный, выделяется в селезенке, стимулирует фагоциты, повышает цитотоксическую и цитостатическую активность против чужеродных клеток);
2) хемотактический (продуцируется E.coli, привлекает макрофагов);
3) пептиды тимуса: тимулин, тимопоэтин, тимозины, тимоген, тимопентин, сывороточный фактор тимуса. Последний – вообще со всех сторон молодец: индуцирует Т-клеточные маркеры на Т-клеточных предшественниках, стимулирует Т-клеточный иммунитет (появление цитотоксичных Т-клеток, отторжение MSV-саркомы), стимулирует Т-хелперов, усиливает Т-супрессию (снижая продукцию антител против тимус-независимых антигенов, снижение чувствительности к динитрофторбензолу, депрессия реакции отторжения аллотрансплантанта).
Очень важны гликопептиды клеточных стенок бактерий – они распознаются, тем самым стимулируя иммунную систему (антигенные детерминанты).
Один из основных представителей группы пептидных регуляторов иммунитета — антибиотик циклоспорин А, продуцируемый микроорганизмом Trichoderma polysporum,— обладает выраженными иммунодепрессивными свойствами. В конформационном отношении этот циклоундекапептид аналогичен грамицидину S. Циклоспорин А ингибирует отторжение пересаженных органов и тканей и для этих целей широко применяется в клинике. Мишенью его действия является Т-хелперная популяция лимфоцитов. Увы, отрицательное действие на органы (нарушает обмен жиров и микроэлементов, функцию почек, вызывает артериальную гипертензию, тремор, спазмы и многое другое)