2). Криоконсервирование семени хряков
Особенности – большой объем эякулята. Семя хряков хуже переживает низкие температуры, чем семя быков. При центрифугировании эякулята отделяется плазма от спермиев. Разбавляют семя средами (эякулят хряков беден питательными веществами). В течении 2 часов проводят эквилибрацию семени, замораживают по 0,2 мл.
3). Криоконсервирование семени баранов
Разводят средами лактозо-желточно-гуммиарабик или трис-цитратная-хелатон в 3-4 раза, эквилибрация в течении 2-9 часов, замораживают по 0,2 мл на фторпластовой пластине.
4). Криоконсервирование семени жеребцов
Разбавляют лактозо-хелато-цитратной смесью с желтком. Разбавляют в 4-5 раз. Расфасовывают в полипропиленовые трубки (10 мл) или алюминиевые пакеты (по 20 мл). Герметизируют тару, затем эквилибрация и расфасовка.
Транспортировка
Если семя сохраняют при +t, то транспортируют в термосах. Если замороженное семя, то в сосудах Дьюара. Во избежание взрыва стаканы (канистры) зафиксированы, пробка не должна быть герметично закрыта. Нельзя наклоняться над горловиной сосуда. При закипании может произойти выброс азота. При открытой крышке может произойти испарение азота, заправка азота в сосуд производится в очках и перчатках. Концентрация азота в воздухе свыше 16% вызывает обморок, поэтому должны работать два человека в хорошо проветриваемом помещении.
Чтобы не травмировать спермии, необходимо работать охлажденными инструментами. В сосуде постепенно накапливается О2. При высокой температуре азот принимает газообразное состояние, что приводит к накоплению О2. При концентрации кислорода свыше 15% - взрывоопасная смесь.1 раз в месяц проводят дозаправку сосудов. Транспортировка семени сопровождается документами: ордера на отправку семени. В них указываются кличка, № производителя, дата взятия, замораживания семени, качественные показатели (активность в баллах) и качество семени перед отправкой.
Схема сосуда Дьюара
1 — подставка
2 — вакуумированая полость
3 — теплоизоляция
4 — адсорбент
5 — наружный сосуд
6 — внутренний сосуд
7 — горловина
8 — крышка
9 — трубка для вакуумирования
Жидкий азот
Техника размораживание спермы и её оценка
Оттаивание спермы в гранулах
а). необлицованные гранулы
Для такого семени характерна высокая концентрация семени в гранулах. Ампулу или флакон с цитратом натрия 2,9% 0,8-1 мл помещают в термостат или водяную баню на 2-3 минуты, t 38-40ºС. Открывают крышку сосуда Дьюара, опускают в горловину охлажденные металлические инструменты, подтягивают канистру к горловине сосуда и закрепляют так, чтобы она находилась в парах азота. Достают дозу семени и помещают в дозу семени и помещают в ампулу с цитратом. Закрывают горловину сосуда. Оттаивают гранулы 8-10 секунд до полного превращения в жидкое состояние. Температура спермы будет +1-2ºС. Затем ампулы оставляют при комнатной температуре, где сперма постепенно нагревается до комнатной температуры +18-25ºС.
Техник по и.о. проводит оценку качества. На обратной стороне ордера на отправку записывает результаты оценки. Набирает дозу в инструменты для осеменения и дозу необходимо ввести не позднее чем через 10-15 минут после размораживания.
Необлицованные гранулы с большим объемом 0,5-1,0 мл (со средней концентрацией спермиев) оттаивают без добавления цитрата натрия. Пустой флакон помещают на водяную баню на 2-3 мин, помещают 2 гранулы спермы. Фактически получается 1 мл объема. Выдерживают в бане до перехода в жидкое состояние. Достают, оценивают качество, осеменяют.
б). облицованные гранулы
Гранулы в полимерной оболочке, объемом 0,25-0,33 мл. извлекают из сосуда Дьюара спец. пинцетом и сразу помещают в водяную баню. Также 8-10 секунд оттаивают до появления тонкого стерженька льда, вытирают стерильной салфеткой, проверяют герметичность упаковки.
в). семя в пайетах
Открывают сосуд, охлаждают инструменты и вынимают соломинку нужного быка. Стряхивают остатки азота и помещают в водяную баню, не более чем на 10 см. Семя нагревается до 0ºС. Если перепутали соломинку, её выбрасывают. Оттаивают не более 2-х пайет одновременно из одной партии. Отрезают конец пайеты с пробкой (поливинилом) и помещают его в ампулу с цитратом натрия, подогретым до 38-40 ºС, потом отрезают запаянный конец. Когда семя выливается в ампулу, его размешивают и берут каплю на анализ. Оценивают концентрацию и активность.