Основы разбавления, хранения и транспортировки спермы

Разбавление спермы и его значение:

1. Продление жизни спермиев во внешней среде. Для этого необходимо:

- уменьшить их активность, затормозить обменные процессы;

- обеспечить дополнительными источниками энергии;

- предотвратить накопление продуктов метаболизма;

- защитить мембрану спермиев от разрушения;

- предотвратить размножение микроорганизмов;

- повысить устойчивость спермиев к перепадам температуры;

Всё это достигается применением специальных разбавителей.

2. Увеличение объема эякулята:

- по стандарту в 1 мл спермы – 0,7 млрд. спермиев

- по ГОСТу объем эякулята должен быть не менее 3 мл, т.е. 2,1 млрд. спермиев всего.

В дозе семени должно содержаться не менее 15 млн. спермиев с прямолинейным поступательным движением (это 40% в среднем, но может быть и больше). Активность спермиев должна быть не менее 8 баллов.

Сперму быка можно разбавлять в 10-40 раз (от 1:9 до 1:39). При расчетах исходят из следующего норматива – в 1мл разбавленной спермы должно содержаться 25-50 млн. сперматозоидов (37,5 млн. в среднем):

2.1 млрд. : 50 млн. или 2,1 млрд. : 0,05 млрд. = 40 раз, во столько раз необходимо разбавить. 3 мл : 40 раз = 0,075 мл спермы идет на 1 дозу, объем увеличивают за счет добавления специальных разбавителей.

Обычно сперму быка разбавляют в 10-15 раз (1:9 или 1:14), сперму барана и жеребца -1:1, 1:3 max, хряка 1:1-1:9 max.

На 1 мл дистиллированной воды добавляется 30 г глюкозы, 4,5 г NaCl – это самая простая искусственная среда – создается оптимальный объем и оптимальное осмотическое давление. Разбавление производится не позднее 10 минут после получения спермы. С таким разбавлением сперму долго не хранят, и в течение ближайшего времени осеменяют, т.е такую среду используют для кратковременного хранения.

Для кратковременного хранения семени также можно применять естественный раствор – молоко (есть молочный сахар для питания, белки, необходимое осмотическое давление). Свежее молоко доводят до кипения и охлаждают до 25ºС. Разбавленное молоком семя хранят при температуре +2-5ºС до 7 суток. Молоко обладает буферностью, увеличивает вязкость, имеет концентрацию водородных ионов и рН сходные с маточной слизью.

Требования к разбавителям для длительного хранения спермы

Должны быть изотоническими для спермы данного вида животных, обладать буферными свойствами, обеспечить сперму источниками энергии, поддерживать определённое соотношение электролитов и не электролитов, защищать от холодового шока, обладать антибактериальными свойствами.

Обычно разбавители для синтетических сред имеют следующие компоненты:

- Вода, д. быть дистиллированная, служит объемным материалом

- Сахара – (глюкоза, лактоза) энергетический материал для гликолиза, дыхания. Они способствуют сохранению спермиями отрицательного заряда.

- Цитрат натрия – (лимонно-кислый натрий) обеспечивает буферность, при рН 7,8-8,0, создает нормальное осмотическое давление, нейтрализует излишнюю кислотность, также сохраняет заряд спермиев.

- Желток куриного яйца – содержит питательные вещества и биологически активные вещества, витамины, аминокислоты, холестерин, до 7% лецитина. Предохраняет от температурного шока.

- Глицерин – сохраняет спермии при заморозке, цитоплазма замерзает стеклообразно, явление витрификации (не образуются кристаллы льда, которые могут разрывать оболочку спермиев)

- Антиоксиданты (токоферол, хелатон), загустители, свободные аминокислоты (аргинин, гликол), антибиотики (стрептоцид и др.). Хелатон – двунатриевая соль этил-диамин-тетрауксусной кислоты, сохраняет спермии при комнатной температуре.

Разбавление спермы

В колбу отмеряют необходимое количество воды, закрываю горловину бумагой или пленкой и кипятят 1-2 мин. Охлаждают до 35ºС.

Вносят в определенной последовательности химические компоненты. После полного растворения вносят желток.

Яйца (снесенные не позднее 7 дня) моют, вытирают насухо, скорлупу стерилизуют ватным тампоном, смоченным в спирте. Разбивают по экватору, отделяют желток, который помещают на стерильный фильтр, прокалывают оболочку и фильтруют. Остатки отжимают через сложенные края фильтра. Добавляют санирующие препараты – спермосан.

Способы хранения и транспортировки спермы