Инструкция по выполнению практической работы № 7 по теме:
«Методы диагностики трихомониаза».
Цели занятия:
Повторить морфологию трихомонад (кишечной, ротовой, мочеполовой).
Закрепить знания об окраске нативных мазков по Романовскому.
Закрепить навыки определения трихомонад в готовых препаратах.
Исходный уровень знаний и навыков.
Учащийся должен знать:
Морфологию трихомонад (кишечной, ротовой, мочероловой).
Учащийся должен уметь:
Готовит нативный мазок и производит его окраску по Романовскому.
Определяет трихомонад в готовых препаратах.
Структура занятия:
Теоретическая часть:
Актуализация темы.
Практическая часть:
Приготовление нативного мазка и окраска его по Романовскому.
Определение трихомонад в готовых препаратах.
Актуализация темы.
Лабораторная диагностика
Микроскопия нативных препаратов
При микроскопии нативных препаратов, возбудителя обнаруживают по его специфическому движению среди клеточных элементов и микроорганизмов в препарате, приготовленном непосредственно перед исследованием. Просмотр влагалищной трихомонады в нативных препаратах проводят чаще методом раздавленной капли –«капли-суспензии» и методом «висячей» капли.
Исследование нативных препаратов проводят под микроскопом с естественным или искусственным освещением немедленно после его приготовления при общем увеличении 280-400 раз (объектив 40, окуляр 7 или 10). Влагалищная трихомонада определяется по грушевидной, округлой или овальной форме тела по размерам близким к лейкоцитам. Она имеет характерные толчкообразные движения ундулирующей мембраны и жгутиков, которые особенно хорошо видны при исследовании в микроскопе с темнопольным или фазовоконтрастным конденсором. Трихомонады совершают активные движения поступательного и вращательного характера.
К ошибкам может привести наличие в препарате подвижных бактерий, которые, прикрепляясь к лейкоцитам, создают впечатление большого количества подвижных трихомонад.
Метод нативных препаратов высоко специфичен. Однако обнаружить в них влагалищные трихомонады можно лишь при наличии жизнеспособного возбудителя с активной подвижностью, что достигается технически правильным взятием материала и своевременным его просмотром. Чувствительность метода особенно снижена при бессимптомном течении заболевания. Измененные формы трихомонад, неподвижные особи также редко выявляются данным методом.
Микроскопия окрашенных препаратов
Для выявления влагалищных трихомонад мазки с материалом после фиксации, возможно, окрашивать различными способами, как простыми - окрашивание одним красителем, так и сложными - окрашивание несколькими красителями. После окрашивания мазки микроскопируют с использованием иммерсионной системы микроскопа и общим увеличением 500-1000 раз. Материал берут из очагов поражения при помощи стерильного зонда и наносят на чистое обезжиренное предметное стекло равномерным тонким слоем. После высушивания на воздухе, препараты фиксируют в течение 3-5 минут в метиловом спирте, или этиловом 96% спирте, или в смеси Никифорова. Наиболее часто используют следующие способы окраски:
1. Окрашивание по Романовскому-Гимзе.
2. Окрашивание 1% водным раствором метиленового синего.
3. Окрашивание 0.5% раствором бриллиантового зеленого
4. Окрашивание по модифицированному способу Грама.
Положительный ответ нужно давать при обнаружении только типичных форм влагалищных трихомонад. При обнаружении измененных (округлые, нетипично-окрашенные и др.), но похожих на влагалищных трихомонад простейших, надо исследовать повторно взятый материал или сделать посев на питательные среды.
Микроскопия окрашенных препаратов является простым, дешевым и доступным методом, не требующим немедленного проведения исследования и специального оборудования. Однако он имеет крайне низкую чувствительность и специфичность.