4.4.7. Количественное определение аминокислот

4.4.7.1. Количественное определение аминокислотного состава

Для количественного определения аминокислот в корнях шиповника собачьего Rosa canina L. Использовали аминокислотный анализатор ААА-339.

Навеску сырья помещали в колбу, добавляли спирт этиловый 96% и 6М кислоту хлороводородную. Гидролиз проводили в термошкафу при температуре 110⁰С 20-23 часа. Полученный гидролизат охлаждали и количественно переносили в выпарительную чашку, упаривали на водяной бане до густой консистенции, затем охлаждали, добавляли буферный раствор (рH 2,2) и через 10 минут фильтровали готовый гидролизат в мерную колбу на 50 мл, доводили объёмом до метки водой очищенной и тестировали на аминокислотном анализаторе ААА-339 (колонка ОСТИОН ЛГ АНБ, диаметром 8мм, длиной 35мм) [4].

Результаты исследования представлены в таблице 15.

Таблица 15 - Количественное содержание аминокислот в шиповнике собачьего корнях, г/кг

№ п/п	Название аминокислоты	Найдено, г/кг	Незаменимые (+), заменимые (-)
1	Аспарагиновая кислота	2,67	–
2	Треонин	1,33	+
3	Серин	1,73	–
4	Глутаминовая кислота	3,69	–
5	Глицин	1,70	–
6	Аланин	1,20	–
7	Валин	1,57	+
8	Метионин	0,19	+
9	Изолейцин	1,21	+
10	Лейцин	1,96	+
11	Тирозин	1,16	–
12	Фенилаланин	1,82	+
13	Гистидин	1,93	–
14	Лизин	2,30	+
15	Аргинин	13,45	–
Всего:		37,97

В результате исследований в корнях шиповника собачьем установлено содержание 15 аминокислот, из которых семь являются незаменимыми и их содержание составляет 10,38 г/кг. Общее содержание аминокислот составило 37,97 г/кг.

4.4.7.2. Количественное определение суммы аминокислот в пересчёте на аланин (спектрофотометрический метод)

Приготовление извлечения: 5,0 г (точная навеска) измельченных корней проходящих сквозь сито с отверстиями диаметра 2 мм заливали 250 мл воды комнатной температуры, нагревали на водяной бане 30 мин (60°) при перемешивании. Извлечение охлаждали и центрифугировали с частотой вращения 5000 об/мин в течение 10 мин и декантировали в мерную колбу вместимостью 50 мл через 5 слоев марли, вложенной в стеклянную воронку и предварительно промытой водой, объем доводили до метки водой (раствор А). 1 мл раствора А помещали в мерную колбу объемом 25 мл и добавляли 1 мл 0,2%-ного свежеприготовленного раствора нингидрина. Смесь нагревали на водяной бане при 60°С в течении 30 мин. После охлаждали и доводли до метки водой раствор Б. Измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 570 нм (кювета толщиной 10мм).

В качестве сравнения используется 1 мл раствора А, доведенного в мерной колбе на 25 мл, водой до метки.

Параллельно измеряли оптическая плотность раствора достоверного образца аланина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.

Содержание рассчитывали по формуле (15):

, (15)

где: Д_иссл - оптическая плотность исследуемо раствора, нм;

Д_ст – оптическая плотность стандартного раствора аланина, нм;

0,000004 – содержание аланина в 1 мл станартного раствора, г;

а – навеска сырья, г;

V₁ – объем раствор А, мл;

W- массовая доля влаги, %.

Результаты исследований приведены в таблице 16.

Таблица 16 – Результаты количественного определения аминокислот в корнях шиповника собачьего Rosa canina L.

№ п/п	Содержание,%	Xi -	(Xi - )2	Метрологические характеристики
1	3,781	-0,007	0,000049	S = 0,015379 = 0,006878 ΔХ = 0,015284 ± ΔХ = 3,788±0,015284 ε = ± 0,40%
2	3,786	-0,002	0,000004
3	3,804	0,016	0,000256
4	3,767	-0,021	0,000441
5	3,802	0,014	0,000196
	= 3,788		∑ = 0,000946

В результате количественного определения в корнях шиповника собачьего Rosa canina L. обнаружено 3,788% аминокислот.

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

1. Проведено морфолого-анатомическое исследование корней шиповника собачьего Rosa canina L. Определены диагностические признаки.

2. Установлены товароведческие показатели сырья:

• влажность - 9,63%;

• общая зола - 2,86%;

• зола нерастворимая в 10 % кислоте хлористоводородной - 1,05%.

Наибольшее содержание экстрактивных веществ установлено при экстрагировании 40% спиртом этиловым - 23,62%.

3. Фитохимически в сырье установлены биологически активные вещества: полисахариды, органические кислоты (винная, щавелевая, яблочная, лимонная, янтарная), дубильные вещества, кислота аскорбиновая, сапонины, аминокислоты.

4. В сырье установлено количественное содержание: водорастворимых полисахаридов - 5,29%, пектиновых веществ - 8,10%, гемицеллюлозы А - 1,29%, гемицеллюлозы В - 0,91%, полисахаридов в пересчете на глюкозу и абсолютно сухое сырьё – 0,65%, кислоты аскорбиновой - 0,262%, суммы органических кислот - 8,06%, аминокислот -3,788%, суммы дубильных веществ - 10,76%, танина – 1,46%, сапонинов - 4,66%, микроэлементного состава.