4.4.2.2. Количественное определение дубильных веществ (танина) методом вэжх
В связи с тем, что перманганатометрический метод по ГФ ХI позволяет определить в растительном сырье не только содержание дубильных веществ, а сумму всех легко окисляемых соединений, переходящих в водное извлечение нами для стандартизации сырья был использован метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, как более точный и информативный метод качественного и количественного анализа.
Около 5 г (точная навеска) сырья шиповника собачьего корней, измельченного до размера частиц 0,5 см, помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл 70% спирта этилового, присоединяли к обратному холодильнику и кипятили в течение 1 часа. После охлаждения, доводили объем колбы до первоначального 70% спиртом этиловым и фильтровали через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А). 2 мкл раствора А вводили в хроматограф «Милихром А-02» с УФ-детектором при длине волны 280 нм на колонке из нержавеющей стали, заполненной сорбентом Prontosil 120-5C AQ. Анализ проводили методом изократического элюирования при комнатной температуре. В качестве подвижной фазы использовали систему растворителей ацетонитрил – кислота муравьиная 2% (60:40). Параллельно хроматографировали 2 мкл раствора РСО танина в спирте этиловом. В качестве РСО использовали танин фирмы «Theim» с содержанием основного вещества 97%.
Рисунок 11 - Хроматограмма 0,1% раствора РСО танина
На хроматограмме у танина наблюдали наличие двух пиков, что объясняет его полимерную структуру.
Рисунок 12 - Хроматограмма спиртового извлечения из корней шиповника собачьего Rosa canina L.
На хроматограмме излечения, приготовленного на 70% спирте этиловом, фиксировали два пика, что свидетельствует о наличии танина.
Содержание танина в пересчете на абсолютно сухое сырьё в % (Х) вычисляли по формуле:
(10)
где: ∑Sm – сумма площадей пиков танина на хроматограмме из сырья;
∑Sрсо - сумма площадей пиков на хроматограмме раствора РСО танина;
С – концентрация раствора РСО танина, г/100;
а - навески сырья, г;
w – потеря в массе при высушивании сырья, %.
Полученные результаты представлены в таблице 9.
Таблица 9 - Содержание танина в извлечении из корней шиповника собачьего Rosa canina L.
№ п/п |
Содержание,% |
Xi - |
(Xi - )2 |
Метрологические характеристики |
1 |
1,47 |
0,01 |
0,000100 |
S = 0,0264575 = 0,0118325 ΔХ = 0,0262942 ± ΔХ= 1,46±0,0262942 ε = ± 1,80% |
2 |
1,45 |
-0,01 |
0,000100 |
|
3 |
1,47 |
0,01 |
0,000100 |
|
4 |
1,49 |
0,03 |
0,000900 |
|
5 |
1,42 |
-0,04 |
0,001600 |
|
|
= 1,46 |
|
∑ = 0,002800 |
Из таблицы 9 следует, что содержание танина в извлечении из корней шиповника собачьего составляет 1,46 ± 1,80%.