4.4.6.2. Количественное определение полисахаридов в пересчёте на безводную глюкозу (спектрофотометрический метод)

В основе спектрофотометрического метода количественного определения полисахаридов в пересчёте на безводную глюкозу лежит реакция с пикриновой кислотой.

Для этого около 2 г (точная навеска) измельченных корней проходящих сквозь сито с отверстиями диаметра 3 мм, помещали в коническую колбу вместимостью 250 мл, прибавляли смесь 96% спирта этилового и воды (3:1) и 0,3 кальция карбоната. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане 30 минут. Затем горячее извлечение осторожно сливали, наблюдая за тем, чтобы частицы сырья оставались в колбе. Далее колбу с сырьем промывали 2 раза, при этом использовали по 10 мл спиртоводной смеси, извлечения сливали. Операцию экстрагирования повторяли с 30 мл спиртоводной смеси. Время нагревания 15 минут. Затем промывали 3 раза, используя по 10 мл той же смеси. Далее в колбу с сырьём прибавляли 40 мл воды и нагревали кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 30 минут, охлаждали при комнатной температуре 5 минут. Далее извлечение фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попали на фильтр. Колбу с сырьём промывали 10 мл воды, извлечение фильтровали в ту же колбу. Последнюю операцию повторяли с 30 мл воды, время нагревания 15 мин. Промывали сырьё 2 раза, используя по 10 мл воды. Затем доводили раствор в колбе водой до метки, перемешивали (раствор А).

20 мл раствора А помещали в круглодонную колбу, прибавляли 6 мл концентрированной кислоты хлористоводородной и кипятили на пламени горелки 10 мин. К полученному извлечению прибавляли 40% натрия гидроксида до рН 4,0-4,5. Раствор количественно переносили в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили объём до метки, перемешивали. Извлечение фильтровали через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10-15 мл фильтрата (раствор Б). В три конические колбы вместимостью 50 мл помещали по 2,5 мл 1% раствора кислоты пикриновой, затем по 7,5 мл 20% карбоната натрия. В первую колбу прибавляли 15 мл раствора Б (анализируемый раствор), во вторую - 5 мл воды (раствор сравнения), в третью - 15 мл раствора рабочего стандартного образца (РСО) глюкозы. Колбы с содержимым погружали на 10 мин. в кипящую водяную баню, затем охлаждали до комнатной температуры. Содержимое колб количественно переносили в мерные колбы вместимостью 25 мл, доводили объем раствора водой до метки, перемешивали.

Оптическую плотность анализируемого раствора и раствора РСО измеряли относительно раствора сравнения (вода) при длине волны 470±2нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Содержание полисахаридов в пересчете на глюкозу и абсолютно сухое сырьё в процентах (Х%) вычисляли по формуле:

А₁* m₁*10000*100*100*25*15

Х=-------------------------------------------- , (13)

A₀* m₂*(100 - W) *25*20*15*250

где: A₁ - оптическая плотность испытуемого раствора;

A₀ - оптическая плотность раствора РСО глюкозы;

m₁ - масса навески РСО глюкозы в пересчете на безводную глюкозу, г;

m₂ - масса навески сырья, г;

W - потеря в массе сырья при высушивании, %.

Приготовление раствора РСО: около 0,05 г (точная навеска) глюкозы, отвечающей требованиям ФС, растворяли в воде в мерной колбе вместимостью 250мл, доводили объём раствора водой до метки, перемешивали.

Массу навески РСО глюкозы в пересчёте на безводную глюкозу вычисляли по формуле:

m₁*(1000 – W)

m=---------------------

100. , (14)

где: m – масса навески, г

W – влажность глюкозы, %

Рисунок 13 - УФ-спектр извлечения из корней шиповника собачьего

1. раствор РСО глюкозы;

2. извлечение из корней шиповника собачьего.

Результаты исследования представлены в таблице 14.

Таблица 14 - Содержание полисахаридов в пересчёте на безводную глюкозу в корнях шиповника собачьего Rosa canina L.

№ п/п	Масса навески, г	Оптическая плотность испытуемого раствора, В	Содержание, %	Метрологические характеристики
1	1,994	0,250	0,653	S = 0,0063482 = 0,0028391 ΔХ = 0,006309 ± ΔХ = 0,651±0,006309 ε = ± 0,99%
2	1,930	0,240	0,648
3	1,985	0,245	0,643
4	2,036	0,258	0,660
5	2,025	0,254	0,653
РСО глюкозы	0,08	0,85	= 0,651

Из таблицы 14 следует, что в корнях шиповника собачьего Rosa canina L. содержание полисахаридов в пересчёте на безводную глюкозу составляет 0,651 ± 0,99%.