Решите несколько заданий-моделей, используя диагностические и лечебные алгоритмы:

Г. Лабораторными тестами фенилкетонурии являются:

1. снижение уровня билирубинглюкуронилтрасферазы

2. увеличение уровня фенилпировиноградной кислоты в моче

3. снижение уровня фенилпировиноградной кислоты в моче

4. положительная проба Гатри

5. положительная проба Пантуса

Д. Для органических ацидурий не свойственно:

1. кризовое течение

2. ацетонемия

3. отставание в развитии

4. манифестация в зрелом возрасте

5. вовлечение в процесс ЦНС

Е. Факторы, провоцирующие развитие метаболического криза при НБО:

1. прием большого количества углеводов

2. пубертат

3. прием лекарственных препаратов

4. прием больших количеств белка

5. алкоголь

Ж. Органические ацидурии сопровождаются :

1. газовым алкалозом

2. газовым ацидозом

3. метаболическим ацидозом

4. метаболическим алкалозом

5. нормальным уровнем рН крови

З. При помощи тандемной масс-спектрометрии возможна диагностика:

1. синдрома Марфана

2. синдрома Дауна

3. нарушений обмена жирных кислот

4. гемолитической анемии

5. трофобластической болезни

И. Лабораторные критерии болезни Тея- Сакса:

1. снижение активности гексоаминидаз

2. повышение активности протеиназ

3. повышение активности кислой фосфатазы в крови

4. обнаружение «пенистых» клеток в селезенке, костном мозге

5. обнаружение перегруженных глюкоцереброзидом гистиоцитов

К. Мышечная дистрофия Дюшенна сопровождается повышением уровня фермента:

1. билирубинглюкуронилтрансферразы

2. металлопротеиназ

3. креатинфосфокиназы

4. аланинаминотрансферразы

5. гамма-глютамилтранспептидазы

Г раф логической структуры темы «Методы диагностики нбо» Приложение.

Приложение №1.

Хроматографическое исследование.

Хроматография как эффективный метод разделения и исследования состава сложных многокомпонентных смесей родилась в начале ХХ века и к настоящему времени сформировалась в самостоятельную научную дисциплину, изучающую распределение химических соединений в системе двух контактирующих несмешивающихся фаз, из которых, как правило, одна - подвижная, перемещается относительно другой - неподвижной.

В последние годы разработаны специальные методики хроматографического анализа содержимого одной клетки, методики для расшифровки компонентов ДНК (международный проект "Геном человека").

Из истории хроматографии

Рождение хроматографического метода анализа связывают с именем русского ботаника Михаила Семеновича Цвета (1872-1919), который в 1902-1903 годах после серии предварительных экспериментов достиг разделения сложной смеси растительных пигментов при пропускании петролейно-эфирной вытяжки из листьев растений через стеклянную колонку, заполненную порошкообразным карбонатом кальция.

В чем же суть эксперимента, поставленного ученым? В стеклянную трубку с сорбентом М.С. Цвет вносил некоторое количество спиртовой вытяжки красящих пигментов зеленых листьев. Верхняя часть сорбента, находящегося в стеклянной колонке, приобретала интенсивно зеленый цвет. Затем через колонку Цвет пропускал подвижную фазу. Растворяясь в ней, компоненты исследуемой смеси экстрагируются и продвигаются по колонке, сорбируясь новыми порциями сорбента. Вещества различной химической природы перемещаются по слою сорбента с разными скоростями за счет различного распределения компонентов анализируемой смеси между подвижной и неподвижной фазами, образовав в итоге четко разделенные окрашенные зоны (рис. 1). Цвет отмечал: "Если петролейно-эфирный раствор хлорофилла профильтровать через столбик адсорбента_, то пигменты по расположению их в адсорбционном ряду отличаются отдельными окрашенными зонами_ Получаемый таким образом препарат я называю хроматограммой, а предлагаемую методику - хроматографической". Так впервые прозвучало слово "хроматография" (от греч. хроматос - цвет, окраска и графио - пишу, описываю). Если подвижная фаза - жидкость, говорят о жидкостной хроматографии.

Изменяя природу растворителя, оказалось возможным регулировать степень распределения зон по слою адсорбента: сдвигать или раздвигать их, способствуя большей селективности анализа. Таким образом, характер распределения разделяемых соединений между подвижной фазой (элюентом) и неподвижной (адсорбентом) определяется природой всех участников хроматографического процесса. Заметной вехой явилось создание в 1938 году варианта тонкослойной хроматографии. Советские химики Н.А. Измайлов и М.С. Шрайбер осуществили разделение веществ природного происхождения, используя хроматографическую систему, где сорбент был помещен не в колонку, а распределен в виде тонкого слоя на стеклянной пластинке ("открытая колонка"). Объектами служили белладонна, красный перец, строфантин, валериана. Растворы анализируемых образцов стеклянным капилляром наносили на стартовую линию пластины, затем пластинку помещали в специальную камеру с подвижной фазой.

Середина 70-х годов XX века ознаменована рождением высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Появились первые жидкостные хроматографы. Жидкостная хроматография (ЖХ) в ее классическом варианте (при атмосферном давлении) и высокоскоростная, или ВЭЖХ при повышенном давлении - оптимальный метод анализа химически и термически нестойких молекул, высокомолекулярных веществ с пониженной летучестью, что объясняется особой ролью подвижной фазы: в отличие от газообразной элюент в ЖХ выполняет не только транспортную функцию. Природа и строение компонентов подвижной фазы контролируют хроматографическое поведение разделяемых веществ. Среди наиболее типичных объектов жидкостной хроматографии белки, нуклеиновые кислоты, аминокислоты, полисахариды.

В зависимости от агрегатного состояния фаз, механизма взаимодействия и оформления различают основные виды хроматографии, которые приведены в табл. 1.

Таблица 1

Вид хроматографии	Подвиж-ная фаза	Неподвиж-ная фаза	Форма	Механизм разделения
Газовая: Газоадсорбционная Газожидкостная	Газ Газ	твердая жидкость	колонка колонка	Адсорбционный Распределительный
Жидкостная: Твердожидкостная Жидкость-жидкостная Ионообменная Тонкослойная (т/ж) Тонкослойная (ж/ж) Бумажная Гельпроникающая (молекулярно-ситовая)	жидкость жидкость жидкость жидкость жидкость жидкость Жидкость	твердая жидкость твердая твердая жидкость жидкость жидкость	колонка колонка колонка тонкий слой тонкий слой лист бумаги колонка	Адсорбционный Распределительный Ионный обмен Адсорбционный Распределительный Распределительный по размерам молекул

АФФИННАЯ, ИЛИ БИОСПЕЦИФИЧЕСКАЯ, ХРОМАТОГРАФИЯ

Особое место в жидкостной хроматографии занимает так называемая аффинная, или биоспецифическая, хроматография (от англ. affinity - сродство). Аффинная хроматография (АХ) основана на исключительной способности биологически активных веществ связывать специфически и обратимо другие вещества. Научные основы метода заложены в 1951 году в США, хотя первые экспериментальные указания на большие потенциальные возможности АХ были получены еще в 1910 году Штаркенштейном, использовавшим крахмал для выделения амилазы. В основе АХ лежит уникальное свойство биологически активных соединений узнавать строго определенные вещества, в процессе которого реализуется так называемый принцип молекулярного распознавания. Фермент узнает свой субстрат, антиген - антитело, гормон - рецептор. Как правило, каждый фермент катализирует определенный тип реакции. Возникновение соответствующего комплекса фермент - субстрат обусловлено строгим соответствием структур обоих участников комплексообразования.

Процесс разделения веществ с использованием АХ включает несколько самостоятельных этапов. Хроматографическую колонку заполняют носителем, ковалентно связанным с каким-либо биологически активным веществом (называемым аффинантом, или лигандом). В качестве носителей в АХ получили широкое распространение гранулированные гели агарозы и полиакриламида (биогель Р), полистирольные смолы с химически активными группами, целлюлоза и ее производные и т.д. Затем через колонку пропускают анализируемую смесь веществ, к одному из которых иммобилизованный лиганд обладает биологическим сродством. Выбирая из смеси требуемое соединение, аффинант образует с ним комплекс. Остальные компоненты пройдут через колонку, не задерживаясь. Специфически адсорбированный фермент может быть освобожден из комплекса изменением природы элюента, рН или ионной силы. Лигандами могут служить самые различные соединения: белки, пептиды, аминокислоты, витамины, нуклеотиды, нуклеиновые кислоты, углеводы и многие другие вещества.