Навчальна практика № 10

Дата: ________________

Тема: Визначення наявності білка в сечі. Кількісне визначення білка в сечі за Брандбергом-Робертсом-Стольниковим.

Мета: Оволодіти різними методами виявлення білка в сечі та кількісного його визначення методом розведення за Брандбергом-Робертсом-Стольниковим.

Література:

1. К.С.Плотнікова ” Практикум з клінічних лабораторних досліджень”с.104-107.

2. О.С.Манастирська “Клінічні лабораторні дослідження” с.57-61.

Знати: 1. Причини і види протеїнурії.

2. Хімічний склад сечі в нормі.

Уміти:

1. Готувати реактиви для дослідження.

2. Виявляти білок в сечі різними методами.

3. Визначати кількість білка в сечі методом розведення за Брандбергом-Робертсом- Стольниковим.

ПЛАН:

1. Визначення наявності білка в сечі 20% розчином сульфосаліцилової кислоти.

2. Визначення наявності білка в сечі пробою Геллера:

- з 50% розчином нітратної кислоти;

- з реактивом Ларіонової.

3. Визначення наявності білка в сечі експрес-тестами.

4. Кількісне визначення білка в сечі методом розведення за Брандбергом- Робертсом-Стольниковим.

5. Оцінювання результатів.

Забезпечення заняття:

1. Посуд: пробірки центрифугальні,серологічні, пастерівські піпетки, градуйовані піпетки на 1 мл, 2 мл, 5 мл, пробірки цетрифугальні градуйовані.

2.Обладнання: гумові груші, олівці по склу, темний папір, штатив для пробірок, електроцентрифуга, секундомір.

1. Реактиви:

• 20% розчин сульфосаліцилової кислоти;

• 50% розчин нітратної кислоти (до 46,7 мл води очищеної, помішуючи, обережно додати 53,3 мл концентрованої нітратної кислоти);

• реактив Ларіонової (20-30 г хлориду натрію розчинити в 100 мл води очищеної і до 99 мл розчину додати 1 мл концентрованої нітратної кислоти);

• експрес-тести;

• вода очищена;

• дез.розчини.

Проведення поточного контролю теоретичних знань студента:

1. Який хімічний склад сечі в нормі?

2. Які можуть бути патологічні зміни хімічного складу сечі?

3. Що таке протеїнурія?

4. Які причини і види протеїнурій?

5. Які причини і види ниркової протеїнурії?

6. Які причини виникнення ниркової фізіологічної протеїнурії?

7. На які види ділиться і коли спостерігається органічна протеїнурія?

8. Коли виникає і як діагностується ортостатична протеїнурія?

9. Які причини виникнення застійної протеїнурії?

10. Коли спостерігається і які причини позаниркової протеїнурії ?

ХІД РОБОТИ:

I. Обладнання робочого місця.

Принцип методів: Білок під дією кислот згортається, утворюючи каламутність різної інтенсивності або пластівці.

2. Визначення наявності білка в сечі 20% сульфосаліциловою кислотою.

1. Набрати досліджувану сечу у центрифугальну пробірку і процентрифугувати.

2. В дві серологічні пробірки (”Д” - досвід,”К”- контроль) помістити по 1-2 мл процентрифугованої сечі.

3. До сечі у пробірці”Д” додати 3-4краплі 20% сульфосаліцилової кислоти.

4. Результат у пробірках ”Д” і”К” спостерігати на темному фоні. Якщо у пробірці ”Д” є каламутність або білі пластівці, то в досліджуваній сечі присутній білок. Проба дуже чутлива, можна виявити мінімальну концентрацію білка в сечі - 0,015г\л.

5. Замалювати результати.

2. Визначення наявності білка в сечі пробою Геллера.

1. Досліджувану сечу проценрифугувати.

2. В серологічну пробірку налити 1 мл 50% нітратної кислоти або реактиву Ларіонової.

3. За допомогою пастерівської піпетки обережно нашарувати по стінці пробірки таку ж кількість процентрифугованої сечі.

4. Результат спостерігати на темному фоні протягом трьох хвилин. Якщо на межі двох рідин утворилось біле кільце, то в досліджуваній сечі присутній білок.

Чутливість проби Геллера 0,033 г/л, при такому вмісті білка з’являється ниткоподібне кільце між другою і третьою хвилинами.

5. Замалювати результат.

2. Визначення наявності білка експрес-тестами (альбуфан).

Принцип: Білок змінює колір індикатора, що знаходиться в буферному розчині, від жовтого (через червоний) до синього.

1. З упаковки витягнути смужку індикаторного паперу і погрузити її в досліджувану сечу.

2. Через 2-3 секунди смужку помістити на білу скляну пластинку.

3. Через 60 секунд, використовуючи кольорову шкалу на упаковці, оцінити результат.

Градація кольорової шкали: О(негативна); 1 (сліди); 2 (слабкопозитивна); З (позитивна) відповідають концентрації білка 0,3; 1; 5.

4. Замалювати результат.

У клініко-діагностичній лабораторії використовують ще такі експрес-тести для визначення наявності білка в сечі: біофан, асфан та інші.

2. Кількісне визначення білка в сечі методом розведення за Брандбергом- Робертсом-Стольниковим.

Принцип: В основу метода покладено кільцеву пробу Геллера, яка дає позитивний результат при наявності в сечі не менше 0,033 г/л білка. При проведенні цієї реакції звертають увагу на ширину, щільність та час утворення кільця.

Поява ниткоподібного кільця між 2-3 хвилинами свідчить про вміст білка 0,033 г/л. Поява кільця раніше 2 хвилин свідчить про значну кількість білка в сечі.

1. В штатив помістити ряд серологічних пробірок, в які набрати по 1 мл 50% нітратної кислоти або реактиву Ларіонової.

2. В пастерівську піпетку набрати відцентрифуговану сечу і нашарувати її на реактив.

3. Включити секундомір і спостерігати за утворенням кільця на темному фоні.

4. При появі кільця секундомір виключити і звернути увагу на характер кільця: компактне, широке, ниткоподібне:

• якщо утворилось кільце ниткоподібне між другою і третьою хвилинами, то записати кількість білка 0,033г/л;

• якщо утворилось кільце ниткоподібне відразу ж після нашарування, то цільну сечу розвести у 2 рази (1 мл сечі + 1 мл очищеної води);

• якщо утворилось широке кільце - цільну сечу розвести у 4 рази (1 мл сечі + З мл води);

• якщо утворилось компактне кільце - цільну сечу розвести у 8 разів (1 мл сечі + 7 мл води);

• якщо утворилось ниткоподібне кільце не відразу, а до 1 хвилини - цільну сечу розвести у 1¹/2 рази (2 мл сечі + 1 мл води).

5. Розведення сечі з наступним нашаруванням проводити до тих пір, доки не з’явиться ниткоподібне кільце протягом 1-4 хвилин.

6. При появі ниткоподібного кільця протягом 1-4 хвилин використати таблицю поправок для розрахунку кількості білка:

   Час утворення кільця, хв.	Поправка
   1-11/4	13/8
   11/4 - 11/2	11/4
   11/2 – 13/4	13/16
   13/4 – 2	11/8
   2 - 21/2	11/16
   21/2 – 3	1
   3 - 31/2	15/16
   31/2 - 4	7/8

7. Розрахувати результат: 0,033г/л помножити на показник розведення і на

поправку.

8. Занести результати в бланк аналізу.

9. Вирішити ситуаційні задачі.

Міністерство охорони здоров’я України Житомирська обласна лікарня ім. ім.О.Ф.Гербачевського

код форми за ЗКУД код закладу за ЗКПО МЕДИЧНА ДОКУМЕНТАЦІЯ форма: 210/0 Затверджена наказом МОЗ України 04.01.2001 р. № 1

Аналіз сечі № ____ П.І.Б.хворого _______________________________ Відділення ____________ Діагноз ______________ Кількість ____________ Колір _________________ Прозорість _________ Питома вага _____________ Білок __________ Глюкоза ____________________ Уробілін __________ Жовчні пігменти __________ Реакція ______________ Ацетон _______________ Діастаза ____________________________________ Мікроскопія осаду Лейкоцити __________________________________ ___________________________________________ Еритроцити _________________________________ ___________________________________________ Епітелій ____________________________________ Циліндри гіалінові ___________________________ зернисті ___________________________ Елементи неорганізованого осаду ______________ солі ________________________________________ слиз _______________________________________ мікрофлора _________________________________ "___" _____ 20 __ р. Час_____ Підпис___________

Ситуаційна задача №1

При нашаруванні сечі на 50% розчин нітратної кислоти ниткоподібне кільце утворилось через 3,5 хвилини.

Поправка згідно таблиці для 3,5 хвилини ¹⁵/₁₆.

Розрахувати кількість білка в 1 л сечі.

Відповідь_________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ситуаційна задача №2

При нашаруванні розведеної у 8 разів сечі ниткоподібне кільце утворилось через 1,5 хвилини.

Поправка згідно таблиці для 1,5 хвилини 1 1/₄

Розрахувати кількість білка в 1л сечі.

Відповідь_________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ситуаційна задача №3

Розрахувати кількість білка за Брандбергом-Робертсом-Стольниковим, якщо ниткоподібне кільце дала сеча розведена у 8 разів в межах 1 ³/₄хв- 2 хв

Поправка згідно таблиці 1 ¹/₈

Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ситуаційна задача №4

Розрахувати кількість білка в сечі за Брандбергом-Робертсом-Стольниковим, якщо ниткоподібне кільце дала розведена у 10 разів сеча через 2 хвилини 40 секунд.

Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ситуаційна задача №5

Розрахувати кількість білка в сечі за Брандбергом-Робертсом-Стольниковим, якщо ниткоподібне кільце утворилось при нашаруванні сечі розведеної у 20 разів через З хвилини 15 секунд. Поправка згідно таблиці ¹⁵/₁₆

Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ситуаційна задача №6

Розрахувати кількість білка за Брандбергом-Робертсом-Стольниковим, якщо ниткоподібне кільце дала сеча розведена у 64 рази в кінці третьої хвилини.

Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ситуаційна задача №7

При нашаруванні сечі, розведеної в 128 разів на 50% розчин нітратної кислоти за методом Брандберга-Робертса-Стольникова ниткоподібне кільце утворилось біля 3 хвилин.

Розрахувати кількість білка, який міститься в 1л сечі.

Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ситуаційна задача №8

При нашаруванні сечі, розведеної в 4 рази на 50% розчин нітратної кислоти за методом Брандберга-Робертса-Стольникова ниткоподібне кільце утворилось через 2,5 хвилини.

Розрахувати кількість білка в 1л сечі.

Поправка для 2,5 хвилини 1 ¹/_16.

Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________