
- •По микробиологии молока и молокопродуктов
- •Номенклатура молочнокислых бактерий
- •Изменение микрофлоры молока при хранении
- •Влияние пастеризации на микрофлору молока и сливок
- •Лекция 2. Характеристика основных представителей микрофлоры молочных продуктов молочнокислые стрептококки
- •Молочнокислые палочки
- •Уксуснокислые бактерии
- •Гнилостные бактерии
- •Плесени
- •Лекция 3. Взаимоотношения между основными представителями микрофлоры цельномолочных продуктов
- •Взаимоотношения между молочнокислыми бактериями и дрожжами
- •Взаимоотношения между молочнокислыми и уксуснокислыми бактериями
- •Взаимоотношения между кишечной палочкой и молочнокислыми бактериями, дрожжами, уксуснокислыми бактериями
- •Чистые культуры
- •Лабораторная закваска, приготовляемая в лаборатории на стерилизованном молоке
- •Приготовление производственной закваски
- •Соли и микроэлементы
- •Антибиотики
- •Реакция среды
- •Механические воздействия
Соли и микроэлементы
Содержание поваренной соли в молоке в концентрации 0,5—1,0% ускоряет развитие стрептококков, в концентрации 5% —заметно подавляет. Различную устойчивость отдельных видов стрептококков к действию поваренной соли используют для дифференциации видов. Так, энтерококки развиваются при содержании в среде 6,5% NaCl; ацидофильная и болгарская палочки —до 2% ; термоустойчивые палочки —2—3% . Другие виды молочнокислых бактерий не могут расти при концентрации соли более 1—2%.
По данным И. Рашича, Б. Обрадовича и С. Митича (1965), присутствие пептона в среде снижает ингибирующее действие поваренной соли в концентрации 4—6,5% на рост Str. diacetilactis и Leuconostoc. Методом замещения ионов в молоке установлено, что молочнокислые бактерии больше всего нуждаются в магнии и натрии, причем магний не может быть заменен кальцием. В результате удаления из молока железа энергия кислотообразования заквасок несколько снижалась, но при замене железа кобальтом и цинком она восстанавливалась (Б. Рийтер и А. Моллер-Мадсен, 1963). Т. Гелслоот и Ф. Хассинг (1962 г) установили, что кальций необходим для развития заквасок, содержащих в качестве ароматообразователей виды Leuconostoc. Str. diacetilactis развивался в декальцинированной среде нормально. Магний стимулировал образование диацетила культурами Leuconostoc, но не влиял на Str. diacetilactis.
При добавлении к молоку марганца устранялось сезонное влияние состава молока на развитие ароматообразующих бактерий (Т. Гелслоот, Ф. Хассинг, 1962а).
Впоследствии И. С. Йенсен, А. И. Оверби (1970) подтвердили, что, добавляя 0,24 мг Ма++ на 1 л молока, можно после нескольких пассажей повысить в комбинированной закваске содержание ароматообразующих стрептококков Leuc. citrovorum. Однако, как показали исследования Е. Андерсона и X. Лесмента (1970), стимулирование развития Leuc. citrovorum при добавлении марганца приводило к раннему сбраживанию лимонной кислоты и почти полному восстановлению четырехуглеродных соединений до 2,3-бутилен-гликоля, а следовательно, к исчезновению аромата
ВЕЩЕСТВА, ПОДАВЛЯЮЩИЕ РАЗВИТИЕ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ В МОЛОКЕ
Антибиотики
Антибиотики могут попадать в молоко из крови животного, подвергавшегося лечению от тех или иных заболеваний (чаще всего от мастита), при введении их в корма с целью повышения привеса. Кроме того, антибиотики вводят с целью фальсификации — приостановления нарастания кислотности.
Присутствие антибиотиком в молоке нежелательно. Даже небольшое количество их может оказывать аллергическое действие на некоторых людей, а у детей и подростков потребление молока, содержащего антибиотики, может вызвать токсический эффект. Поэтому на наличие антибиотиков в молоке необходимо обращать особенно серьезное внимание (Дж. Г. Дэвис, 1963). Американский исследователь Велг на основании обобщения статистического материала, пришел к выводу, что примерно 10% населения может давать реакцию на введение антибиотиков. Кроме того, систематическое потребление молока, содержащего антибиотики, может привести к образованию в организме резистентных форм патогенных микроорганизмов (Р. Ц. Райт, 1961) и изменениям кишечной флоры. Международная организация здравоохранения (ВОЗ) считает недопустимым употребление в пищу молока и молочных продуктов, содержащих даже незначительное количество антибиотиков. Поэтому законодательством многих стран запрещена сдача на предприятия молочной промышленности молока, содержащего антибиотики. В СССР такое запрещение также установлено ГОСТом на молоко коровье (“Требования при заготовках”). В ветеринарии применяются пенициллин, стрептомицин, тетрациклин, бацитрацин и другие антибиотики. Эти же антибиотики обнаруживаются и в молоке (Е. X. Март, 1961).
Одним из наиболее опасных антибиотиков при производстве продуктов с применением заквасок считается пенициллин, так как он термоустойчив и выдерживает в молоке кратковременную пастеризацию при высокой температуре (Р. Розанов, 1962). Присутствие в молоке антибиотиков крайне отрицательно отражается на тех производствах, где применяют закваски молочнокислых бактерий. Сквашивание молока, содержащего антибиотики, задерживается, а иногда и полностью прекращается. По данным различных зарубежных авторов, от 1 до 63% молока, сдаваемого на молочные предприятия, содержит пенициллин в количестве 0,005 и. е./мл. При производстве масла и сыра такие дозы пенициллина в молоке не затрудняют технологического процесса, а при выработке йогурта замедляется процесс сквашивания (Р. Розанов, 1962, Т. Е. Гелслоот, 19626).
С молоком могут также выделяться и задерживать микробиологические процессы при производстве кисломолочных продуктов и сульфаниламидные препараты, применяемые для лечения животных. Антибиотики, введенные в организм животного, выделяются с молоком длительное время. Длительность выделения антибиотиков с молоком зависит от природы антибиотика, вида растворителя, места введения (Е. X. Март, 1961, Р. Кеннон и др., 1962). Большинство авторов указывает, что во всяком случае в течение шести доек после введения антибиотика в организм животного он продолжает обнаруживаться в молоке (М. Г. Финчер и др., 1962, Е. X. Март, 1961). В молоке, полученном от одного стада, действие антибиотиков проявляется сильнее, чем в сборном. В случае умышленного добавления антибиотиков к молоку они могут содержаться в значительном количестве и в больших партиях сборного молока. По чувствительности к антибиотикам молочнокислые бактерии можно расположить в такой последовательности: мезофильные молочнокислые стрептококки (Str. lactis, Str. cremoris) выдерживают концентрацию пенициллина 0,1 и. е./мл, Str. tbermophilus и молочнокислые палочки 0,01 и. е./мл. По отношению к стрептомицину, наоборот, вторая группа оказывается менее чувствительной, чем первая.
Снизить влияние антибиотиков на развитие микроорганизмов закваски можно, применив культуры, адаптированные к возрастающим количествам антибиотиков в молоке. Такие закваски создают нормальное кислотообразование при содержании в молоке пенициллина до 1 и. е./мл. Ф. Вассерфаль (1966) путем пассирования Sir. diacetilactis в молоке с возрастающим содержанием пенициллина получил варианты, резистентные к 2,5 и. е./мл. Однако способность к арома-тообразовапию у культур утрачивалась. И. Н. Пятницына и Л. А. Банникова (1966) установили, что способность к приобретению резн-стентности у разных видов молочнокислых бактерий неодинаковая. Если у ацидофильных бактерий резистентность могла быть повышена в 9 и 16 раз и достигала 3,6 и. е./мл, то у термофильного стрептококка ее удалось повысить лишь вдвое (с 0,03 до 0,06 и. е./мл). Установлено также, что пенициллин адсорбируется на клетках бактерий, в результате чего концентрация его в молоке уменьшается. При повышенном количестве вносимой закваски часть клеток адсорбирует антибиотик, другая получает возможность нормально развиваться в молоке (Ф. Дж. Бэбел, 1962). Для снижения чувствительности к антибиотикам рекомендуется также добавлять ростовые факторы — экстракты, обогащенные пептидами, дрожжевой и печеночный экстракты, гидродизованное молоко (Е. X. Март, 1962). По данным Дж. Жаск и др. (1959), молочнокислые бактерии, длительное время используемые в сыроделии, приобретают некоторую устойчивость к антибиотикам.
МОЮЩЕ-ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИЕ СРЕДСТВА И ДРУГИЕ ХИМИЧЕСКИЕ ВЕЩЕСТВА
При недостаточно тщательном ополаскивании оборудования чистой водой после мойки и дезинфекции на поверхности его могут остаться моюще-дезинфицирующие средства, влияющие на развитие микроорганизмов в молоке. Наибольшее значение в этом отношении имеют препараты, содержащие хлор и четырехзамещенные соединения аммония. Отмечаются случаи умышленного добавления моюще-де-зинфицирующих средств, в частности гипохлорита, к молоку с целью предотвращения развития в нем микроорганизмов (Г. Чемберс и др., 1962). При наличии в молоке гипохлорита и четырехзамещенных соединений аммония значительно увеличивается продолжительность редуктазной пробы. Для обнаружения моюще-дезинфпцирующих средств рекомендуются химические методы, которые более чувствительны, чем микробиологические. Так, метод обнаружения четырехзамещенных соединений аммония основан на способности двух его молекул при известном рН присоединяться к молекуле красителя, например, бромфеноловой сини (Р. Лакросс, 1962). Для контроля молока на гипохлорит применяют йодометрическую пробу (Г. Чемберс и др., 1962; Дж. Эйсес и др., 1962). Концентрацию дезинфицирующих препаратов 10~2—10~3 можно также определить биологическим методом с использованием Str. thermophihis.
Исследования Т. Сторгардса и А. Андерсона (1966) показали, что в присутствии препаратов, содержащих четырехзамещенные соединения аммония, тормозился рост всех компонентов многоштаммовой закваски. Хлорамин оказывал специфическое подавляющее действие на ароматообразующне бактерии, количество которых снижалось на 90%. Практика показывает, что при переработке молока с повышенной кислотностью и нейтрализованного разрешенными для этой цели веществами нередко замедляется сквашивание, ухудшается качество сгустка, особенно трудно приготовлять закваски. Специальных исследований в этом направлении не проводилось, но в литературе имеются сведения об отрицательном влиянии искусственного снижения кислотности сливок на последующее развитие в них молочнокислых бактерий, особенно Str. diacetilactis (Л. Лайтбоди, 1962). Ким и Хагмои установили, что пестициды в количестве до 100%о не влияли на метаболизм молочнокислых бактерии или оказывали слабый эффект. Я. Янков и П. Пиева (1970) применили ДДТ, линдан, их комбинации с деделином и гербицидом 24Д. Они показали, что высокие концентрации пестицидов порядка 10000—50000%о оказывали бактерицидное действие на Str. lactis, Str. thermophilus и Lbm. bulgaricum. При содержании 1000%о наблюдалось бактериостатпческое действие, выражавшееся в снижении энергии кислотообразования. Низкие концентрации пестицидов (до 0,1 — 10%о) оказывали стимулирующее действие на молочнокислые бактерии. Авторы приходят к выводу, подтверждающему результаты Кима и Хагмона, что пестициды в концентрации до 100%о не оказывают заметного отрицательного влияния на молочнокислые бактерии.
ВЕЩЕСТВА, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ КОНСЕРВИРОВАНИЯ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ И ОБОГАЩЕНИЯ ВКУСА. ПОВЫШЕННОЕ СОДЕРЖАНИЕ СУХИХ ВЕЩЕСТВ В МОЛОКЕ
При производстве кисломолочных продуктов применяют свекловичный сахар и соль. Небольшое содержание этих веществ в продукте лишь незначительно задерживает развитие микроорганизмов. Высокой устойчивостью к соли обладают некоторые дрожжи, что может иметь значение при хранении соленых творожных изделий. Сахар, содержащийся в творожных изделиях, в некоторых случаях интенсифицирует размножение дрожжей, вследствие чего наблюдается вспучивание продуктов. Сахар, содержащийся в значительных концентрациях, например в особой творожной массе (26%), заметно подавляет рост микроорганизмов и увеличивает стойкость продукта.
Большое влияние на развитие молочнокислых бактерий оказывает концентрация сухих обезжиренных веществ в молоке. Л. А. Банникова (1953) установила, что при повышении в обезжиренном молоке концентрации сухих веществ до 18% культуры молочнокислых
бактерий развивались значительно быстрее и достигали более высокого уровня, чем в молоке, содержащем 9% сухих веществ. Накопление кислоты в таком молоке происходило медленнее. Культивирование заквасок молочнокислых бактерий в обезжиренном восстановленном молоке с содержанием сухих веществ до 12,2% приводило к повышению в них количества ароматообразующих бактерии — Str. diacetilactis и Leuc. citrovorum (И. Йенсен, А. П. Оверби, 1970). Аналогичные результаты были получены X. Йенсеном и 3. Хорватом (1970) при выращивании заквасок для масла и йогурта в обезжиренном молоке, концентрация сухих веществ в котором была повышена путем сгущения до 14%. Однако при этом отмечались сладковатый вкус и зернистая консистенция готового продукта. Исследования, проведенные с более высокими концентрациями сухих веществ в молоке (24,36 и 42%), показали, что критической концентрацией, при которой еще отмечался хороший рост молочнокислых бактерий, была концентрация 36%. Str. cremoris проявлял большую чувствительность к повышенному содержанию сухих веществ, чем Str. lactis и Str. diacetilactis.
ВЕЩЕСТВА, ОБУСЛОВЛИВАЮЩИЕ ЕСТЕСТВЕННУЮ БАКТЕРИЦИДНОСТЬ МОЛОКА
Естественные ингибиторы, обусловливающие бактерицидные свойства свежевыдоенпого молока (лактенин, лактопероксидаза), обнаруживаются в молоке только в первые часы после дойки и при условии минимального содержания в нем микроорганизмов (М. Зеелеманн, 1959, Дж. Стедхаудерс и X. А. Беринга, 1962). В результате нагревания до 82—85° С эти вещества инактивируются (К. М. Шэхени и др., 1962). Практически в сборном молоке, поступающем на предприятия, естественная бактерицндность, связанная с наличием этих веществ, не обнаруживается.
Установлено, что в сыром молоке могут находиться агглютинины (неспецифические антитела), агглютинирующие стрептококки серологической группы N (типа Str. lactis, Str. cremoris и пр.). Образование агглютининов в крови животного может быть обусловлено бактериальными антигенами, адсорбированными из кишечного канала, через легкие или кожу. Например, выяснено, что Str. bovis, присутствующие в большом количестве в кишечном канале жвачных животных, имеют общий антиген с Str. cremoris. В присутствии агглютининов в молоке нарушается нормальное деление клеток молочнокислых стрептококков, Так, отмечено, что молочнокислые стрептококки, обычно образующие в стерилизованном молоке диплококки пли короткие цепочки, в сыром молоке имеют форму длинных цепочек. Показано, что ингибиторная активность молока ассоциируется с фракцией пммуноглобулина (X. Е. Рандольф, И. А. Голд, 1968). Исследования Д. Б. Эммонза, Дж. А. Эллиотта, Д. И. Беккетта (1966) показали, что среди штаммов молочнокислых стрептококков имеются как чувствительные, так и нечувствительные к агглютинн-пам. Агглютинины к чувствительным штаммам были обнаружены в молоке и крови всех исследованных животных, хотя и в разных количествах. В начале лактации (молозпзо) их содержалось много. После первой недели лактации их количество снижалось, в самом конце — снова повышалось.
ПРОДУКТЫ ОБМЕНА МИКРООРГАНИЗМОВ, РАЗВИВАЮЩИХСЯ В МОЛОКЕ
Антибиотики, образующиеся в результате жизнедеятельности микроорганизмов, найдены в значительном количестве образцов (до 10%) молока (Ф. Косиковский, М. О. Лери, 1963). Эти вещества так же, как и естественные ингибиторы, разрушались при нагревании до 82—83° С. X. Хаттовска (1970) обнаружила в сильно загрязненном сыром молоке микроорганизмы (микрококки и грамотрица-тельные палочки), которые выделяли термостабильные вещества, угнетавшие развитие молочнокислых бактерий, их аромато- и кис-лотообразование. Эти наблюдения свидетельствуют о важности снижения микробиологической обсемененности сырого молока, предназначенного для производства заквасок и кисломолочных продуктов. С другой стороны, многие немолочнокислые бактерии, развивающиеся в сыром молоке, стимулируют развитие молочнокислых (С. А. Королев, 1932). По всей вероятности, фактор угнетающего действия продуктов обмена микроорганизмов в сборном молоке значительно меньше влияет на молочнокислый процесс, чем антибиотики и бактериофаг.
ВЕЩЕСТВА, СОДЕРЖАЩИЕСЯ В МАСТИТНОМ МОЛОКЕ
Долгое время считалось, что в молоке от маститных животных содержатся вещества, угнетающие развитие молочнокислых бактерий. По данным Дж. Г. Дэвиса (1961), эти вещества разрушаются при нагревании. Другие исследователи (Ф. И. Бэбел, 1955) сообщают, что нагревание на них не действует. Добавление 10% маститного молока к нормальному задерживает рост Str. lactis. X. Р. Уайтхед и Г. А. Кокс (1933) установили, что молочнокислые стрептококки не могут нормально развиваться в сыром молоке, содержащем более 5 млн. лейкоцитов в 1 мл. При нагревании молока до 49—52° С в течение 30 с угнетающее действие лейкоцитов снижается. В то же время Г. Вейс и М. Ван-Белахем (1970) показали на большом количестве исследованных проб молока, что пастеризованное сборное молоко с высоким содержанием лейкоцитов (1,2 млн./мл) является такой же хорошей питательной средой для развития и проявления биохимической активности молочнокислых бактерий, как и пастеризованное сборное молоко с низким первоначальным содержанием лейкоцитов (300 тыс/мл). Возможно, что такие разноречивые данные объясняются различиями в режимах тепловой обработки молока. Следует отметить, что ММФ установлена норма содержания лейкоцитов в выдаиваемом молоке — 500 тыс/мл.