Министерство науки и образования Украины

Харьковский национальный университет имени В.Н. Каразина

Биологический факультет

Кафедра биохимии

Дипломная работа магистра на тему:

Влияние восстановленного глутатиона и ингибитора каталазы на пероксидную резистентность и скорость лизиса эритроцитов при действии хлорида железа

Допущено к защите «__»__________2010 г. Заведующий кафедрой ______________	студентки 5-го курса дневной формы обучения Гурьевой Анны Владимировны
Оценка «_____________» Председатель ГЭК ____________________ «__»___________2010 г.	Научный руководитель: доц. Баранник Т.В.

Харьков 2010

Содержание

стр.

Список обозначений……………………………………..…........................5

Введение………………………………………………….............................6

Глава 1. Обзор литературы………………..………….....................7

1. Механизмы пероксидного гемолиза………………..........................7

2. Антиоксидантная система эритроцитов……..……..........................9

3. Окислительный гемолиз при патологических состояниях и стрессовых воздействиях………………………...............................14

Глава 2. Материалы и методы исследования....................18

1. Объект исследования……………………..........................................18

2. Проведение инкубации эритроцитов в опытах in vitro...................18

3. Определение каталазной активности …………………...................19

4. Определение содержания белка ………………………...................19

5. Определение степени пероксидного гемолиза эритроцитов..........20

6. Определение скорости лизиса эритроцитов …………………........21

7. Статистическая обработка результатов………………………........23

Глава 3. Результаты и их обсуждение……………………..

3.1 Влияние хлорида железа (III), азида натрия и восстановленного глутатиона на каталазную активность……………………….....….24

3.2. Пероксидная резистентность эритроцитов человека при действии хлорида железа (III) и глутатиона…………………………….........25

3.3. Кинетика гемолиза эритроцитов под влиянием хлорида железа ….27

Выводы………………………………………...............................................34

Список литературы…………………………...............................................35

Приложения

Реферат

Работа изложена на 39 страницах, содержит 6 таблиц и 7 рисунков, 42 литературных источника (из них 32 иностранных).

Объект исследования – эритроциты человека из донорской эритромассы (ХОЦСК, кровь (мужская) группы А(II), Rh+, консервант – глюгицир).

Ключевые слова: гемолиз, эритроциты, пероксидная резистентность,

кинетика, каталаза, азид натрия, хлорид железа (III) , глутатион.

Целью работы являлось изучение активности каталазы, пероксидного гемолиза эритроцитов и кинетики гемолиза после обработки эритроцитов хлоридом железа (III), азидом натрия, глутатионом.

Установлено, что при ингибировании каталазной активности азидом натрия, в том числе при действии хлорида железа скорость гемолиза эритроцитов возрастает. Хлорид железа (III) в концентрации 0,5% вызывал полный лизис эритроцитов человека за 5 мин инкубации с максимумом лизиса от 1,5 до 3,5 минут инкубации вне зависимости от предварительной обработки эритроцитов. Предварительная обработка азидом натрия увеличивала скорость гемолиза в присутствии 0,5% FeCl₃. Последовательная предварительная обработка эритроцитов азидом натрия или глутатионом и далее 0,05% FeCl₃ вызывала снижение скорости лизиса эритроцитов хлоридом железа.

Summary

This work contains 39 pages, 7 figures, 42 literature references ( 32 foreign ones).

The object of the investigation: erythrocytes of donors (men of middle age, blood group A(II)Rh+), obtained from Kharkov blood service.

Key words: hemolysis, erythrocytes, peroxide resistance, kinetics, catalase, sodium azide, ferric chloride, glutathione.

The aim of the investigation was to study the catalase activity, peroxide resistance and kinetics of red blood cells hemolysis after incubation in presence of ferric chloride, sodium azide, glutathione.

The rate of hemolysis was found to be elevated under inhibition of catalase activity by sodium azide as well as under ferric chloride action. Ferric chloride in concentration 0,5% caused total lysis of erythrocytes by 5 min of incubation with maximum of lysis in the range of 1,5 - 3,5 minutes of incubation being independent on pretreatment of erythrocytes. Sodium azide pretreatment increased the rate of hemolysis in presence of 0,5% FeCl₃. Consequent pretreatment of erythrocytes by sodium azide or glutathione and further by 0,05% FeCl₃ caused the decrease of the rate of erythrocyte lysis by ferric chloride.