Фотометрические определения

Сущность фотометрических определений состоит в проведении фотометрической (цветной) реакции с целью получения окрашенных растворов с последующим измерением их оптической плотности.

Фотометрическую реакцию проводят для тех анализируемых веществ, которые не обладают собственным поглощением, т. е. они образуют неокрашенные растворы.

При проведении фотометрической реакции анализируемое вещество действием соответствующего реагента переводят в прочное окрашенное комплексное соединение, которое и будет поглощать световой поток определенной длины волны.

В качестве фотометрической реакции применяют чаще реакцию комплексообразования. Для получения прочного окрашенного комплексного соединения берется избыток соответствующего реагента и поддерживается определенное значение pH приготавливаемого раствора.

К фотометрическим (цветным) реакциям предъявляются требования, а именно:

1. Реакция должна протекать мгновенно

2. Интенсивность окраски приготовленных растворов должна быть пропорциональна концентрации анализируемого вещества.

3. Окраска растворов должна быть устойчивой, не изменяться под воздействием света, температуры и pH раствора.

4. Окрашенные растворы должны подчиняться закону Ламберта-Бера.

Для каждого нового анализируемого вещества фотометрические определения проводят в следующей последовательности, а именно:

1. Приготовление окрашенных растворов с известной концентрацией анализируемого вещества (стандартный ряд растворов) для построения градуировочной кривой. Стандартный ряд окрашенных растворов готовится периодически только для проверки градуировочной кривой. В дальнейшем для данного вещества готовится только исследуемый раствор по той же методике, по которой готовился стандартный ряд растворов, а именно: в той же посуде, в таком же количестве и последовательности добавляют реагенты, измеряют его оптическую плотность в той же кювете и светофильтре.

2. Выбор светофильтра (длины волны), которую будет поглощать анализируемое вещество.

3. Выбор кюветы, в которых будут проводить измерение светопоглощения.

4. Измерение оптической плотности окрашенных растворов стандартного ряда при выбранных светофильтре и кювете.

5. Построение градуировочной кривой, по которой будут определять содержание (концентрацию) вещества в исследуемом растворе

6. Приготовление исследуемого раствора по той же методике, по которой готовился стандартный ряд окрашенных растворов.

7. Измерение оптической плотности исследуемого раствора при том же светофильтре и той же кювете, при которых определялась оптическая плотность окрашенных растворов стандартного ряда.

8. Определение концентрации вещества в исследуемом растворе по градуировочной кривой.

Правила приготовления окрашенных растворов

Окрашенные растворы для данного анализируемого вещества (стандартные, исследуемый, растворы для подбора кювет и светофильтра) готовят по одной методике:

1. Готовят эти растворы в одинаковой посуде. Для приготовления окрашенных растворов используют мерные колбы емкостью 25, 50, 100 мл или градуированные пробирки.

2. Объем эталонного раствора для приготовления стандартного ряда и исследуемого раствора отбирают с максимальной точностью градуированной пипеткой

3. Добавляют соответствующие реагенты для проведения цветной реакции в одинаковом количестве и последовательности. После чего доводят растворы дистиллированной водой до метки.

Конечные объемы все стандартных растворов для данного вещества должны быть строго одинаковыми.

Только в этих условиях можно проводить сравнение интенсивности их окрасок.

Измеряют оптическую плотность (экстинцию) приготовленных растворов через одинаковый промежуток времени после их приготовления.

Для фотометрических определений применяются сильно разбавленные окрашенные растворы.